一种食用植物油中黄曲霉毒素的快速测定方法技术

本发明专利技术提供了一种食用植物油中黄曲霉毒素的快速测定方法。本发明专利技术中以MIL

【技术实现步骤摘要】
一种食用植物油中黄曲霉毒素的快速测定方法


[0001]本专利技术涉及食品检验
，尤其涉及一种食用植物油中黄曲霉毒素的快速测定方法。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是一类有毒的次级代谢产物，主要由特曲霉(Aspergillus nomius)、黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)等霉菌产生，是二氢呋喃和香豆素的衍生物。AFs是目前发现的毒性最强的毒素，其结构稳定且耐高温，不易被破坏，具有急、慢性毒性，可致畸、致癌、致突变。
[0003]AFs属肝毒素，肝脏是AFs的主要作用器官，能不同程度的破坏肝脏组织，但其毒性与不同种类或结构有关。目前发现的AFs种类达20多种，已鉴定出超过10种类型的结构。其中：黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)、黄曲霉毒素B2(Aflatoxin B2，AFB2)、黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1，AFG1)、黄曲霉毒素G2(Aflatoxin G2，AFG2)是最重要的成员，已知毒性AFB1＞AFB2＞AFG1＞AFG2，其中AFB1的存在量最大，而且具有最强的毒性，半数致死量(LD
50
)为0.36μg/kg(体重)，为氰化钾的10倍，砒霜的68倍，致癌力是六六六的10000倍，甚至更毒于眼镜蛇的毒汁。
[0004]1993年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer，IARC)将AFB1列为I类致癌物IARC
‑
WHO，而AFG1的致癌能力相比于AFB1低得多，且AFB2和AFG2本身不具有致癌作用，但有研究表明经过体内生物转化AFB2可小部分转化为AFB1，因此，AFB2也有一定致癌性。
[0005]食用植物油主要成分为甘油三酯(95％
‑
98％)和其它化学物质(2％
‑
5％)，为人体提供能量、脂溶性维生素和抗氧化物等，是人类饮食中的重要组成部分。据报道，世界上每年有超过25％的食物受到AFs的污染，尤其是花生、大豆、芝麻和玉米等油料作物，在生产、加工、运输、储藏等环节控制不当易受霉菌侵染而产生黄曲霉毒素。
[0006]食用植物油是油料作物经过压榨或浸出以及一系列的工艺制取的。而受到AFs污染的油料作物会引起食用植物油中AFs超标。油脂中AFs的存在极大地增加了食用植物油的食用风险，严重危害着人们的身体健康。AFs的耐高温性与稳定性使得很难被杀灭，但用紫外线、微波和光催化可解毒，最新研究表明基因工程及拮抗菌也有望在抑制产毒菌株生长和毒素产生方面发挥作用。
[0007]然而优先的预防措施是制定限量标准，因此各国政府及组织根据各国实际国情专门制定了严格的AFs的限量标准。我国现行有效标准《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》(GB 2761－2017)规定，AFB1在花生油、玉米油中限量为20μg/kg，AFB1在其它植物油脂中的限量为10μg/kg，除此之外并未对其它AFs做出限量规定；欧盟颁布的EC No.1525/98号法令规定了食品中AFB1的限量为2μg/kg，AFB1+AFB2+AFG1+AFG2四种AFs的总量不得超过15μg/kg；日本规定了食品中AFB1不得检出，AFB1+AFB2+AFG1+AFG2四种AFs的总量不得超过15μg/kg。
[0008]目前检测AFs常用方法有薄层色谱法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱
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荧光检测法和液相色谱
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质谱联用法等，GB 5009.22
‑
2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》均把以上方法列入其中。上述方法中前3种方法灵敏度低、操作步骤多、流程复杂、抗干扰能力差，易出现假阳性。高效液相色谱质谱联用技术以其灵敏度高、选择性好、抗干扰能力强的优点，已成为近年来黄曲霉毒素检测的主要方法。
[0009]在样品前处理方面，免疫亲和柱法是AFs目前主要的提取净化方法，但其成本高、耗时长。由于食用植物油样品中AFs的浓度较低，而甘油三酯、维生素和植物甾醇等内源性化合物的浓度较高，因此迫切需要一种有效的样品预处理方法来提取和富集AFs，避免最终溶液中残留大量脂肪。

技术实现思路

[0010]针对上述问题，现提供一种处理操作简单、净化效果好、前处理时间短、检测成本低、灵敏度和准确性好的食用植物油中黄曲霉毒素的快速测定方法。
[0011]具体技术方案如下：
[0012]一种食用植物油中黄曲霉毒素的快速测定方法，具有这样的特征，包括如下步骤：
[0013]1)固相微萃取滤头的制备：通过水热反应制备MIL
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101(Cr)材料，再将MIL
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101(Cr)材料均匀分散于异丙醇中，取适量分散液注入带有滤膜的针头式尼龙过滤器中；
[0014]2)混合外标工作液和混合内标工作液的配制：将10μg/mL的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2混合外标标准品稀释在乙腈中，制备形成浓度为1.0μg/mL的黄曲霉毒素混合外标储备液，并储存在
‑
20℃下；移取适量外标标准储备液，用乙腈稀释成浓度为100ng/mL的混合外标工作液；以10mL乙腈将0.5μg/mL的AFB1‑
13
C
17
、AFB2
‑
13
C
17
、AFG1
‑
13
C
17
、AFG2
‑
13
C
17
混合内标标准品稀释成浓度为50.0ng/mL的黄曲霉毒素混合内标标准储备液，并储存在
‑
20℃下；移取适量内标标准储备液，用乙腈稀释成浓度为5.0ng/mL的混合内标工作液；
[0015]3)混合标准工作曲线的配制：移取适量系列混合外标工作液和适量混合内标工作液，用不含待测物的食用植物油样品的基质提取液配制成浓度分别为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的基质匹配工作溶液；
[0016]4)样品分析检测：采用液相色谱串联谱法对基质匹配标准工作溶液进行测定，绘制标准曲线；以相同的仪器参数检测待测样品，获得待测样品中AFs的质量色谱图，以保留时间和离子比率对目标物进行定性分析，以内标法定量计算得到待测物的浓度；
[0017]其中，高效液相色谱
‑
串联谱法中流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；线性梯度洗脱中流动相A+流动相B＝100％，线性梯度洗脱条件为：0
‑
2min，10.0％B；2
‑
5min，10.0<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种食用植物油中黄曲霉毒素的快速测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)固相微萃取滤头的制备：将MIL
‑
101(Cr)材料均匀分散于异丙醇中，取适量分散液注入带有滤膜的针头式尼龙过滤器中；2)混合外标工作液和混合内标工作液的配制：将10μg/mL的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2混合外标标准品稀释在乙腈中，制备形成浓度为1.0μg/mL的黄曲霉毒素混合外标储备液，并储存在
‑
20℃下；移取适量外标储备液，用乙腈稀释成浓度为100ng/mL的混合外标工作液；以10mL乙腈将0.5μg/mL的AFB1‑
13
C
17
、AFB2‑
13
C
17
、AFG1‑
13
C
17
、AFG2‑
13
C
17
混合内标标准品稀释成浓度为50.0ng/mL的黄曲霉毒素混合内标标准储备液，并储存在
‑
20℃下；移取适量内标标准储备液，用乙腈稀释成浓度为5.0ng/mL的混合内标工作液；3)混合标准工作曲线的配制：移取适量系列混合外标工作液和适量混合内标工作液，用不含待测物的食用植物油样品的基质提取液配制成浓度分别为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的基质匹配工作溶液；4)样品分析检测：采用液相色谱串联谱法对基质匹配标准工作溶液进行测定，绘制标准曲线；以相同的仪器参数检测待测样品，获得待测样品中AFs的质量色谱图，以保留时间和离子比率对目标物进行定性分析，以内标法定量计算得到待测物的浓度；其中，高效液相色谱
‑
串联谱法中流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；线性梯度洗脱中流动相A+流动相B＝100％，线性梯度洗脱条件为：0
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2min，10.0％B；2
‑
5min，10.0
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95.0％B；5

【专利技术属性】
技术研发人员：杨明，江小明，杨永，涂凤琴，伊鋆，卢跃鹏，方慧文，
申请(专利权)人：武汉食品化妆品检验所，
类型：发明
国别省市：