胶体金试纸的制备与应用制造技术

本发明专利技术属于免疫胶体金技术领域，具体涉及胶体金试纸的制备与应用。本发明专利技术提供了一种胶体金试纸，其通过增加特殊处理的反应垫和过滤垫，从整体上使制得的胶体金试纸特异性强、灵敏度高。本发明专利技术的胶体金试纸中，过滤垫添加抗异嗜性抗体消除异嗜性抗体的干扰提升检测的特异性，并且对反应垫进行特殊处理，使反应垫亲水性能和液体浸润时间受到控制。从而实现对侧向流中样本反应时间和流动速度物理参数的控制来提高灵敏度。该制备方法简单，制得的胶体金试纸特异性强、灵敏度高且可用性良好。灵敏度高且可用性良好。

【技术实现步骤摘要】
胶体金试纸的制备与应用


[0001]本专利技术属于免疫胶体金
，具体涉及胶体金试纸的制备与应用。

技术介绍

[0002]免疫胶体金技术的特点是简便、快速、无需辅助设备。该技术目前发展快速，在生物检测领域有着广泛的应用。经典的免疫胶体金技术包含样本垫，结合垫，包被膜，吸水垫和PVC底板。包被膜是预先在硝酸纤维素膜上包被蛋白等，样本和结合垫中的胶体金标记物先反应，之后在硝酸纤维素膜上侧向流动的过程中跟硝酸纤维素上的包被蛋白完成反应，根据包被线条的情况判断样本中是否有待检物质。
[0003]免疫胶体金技术的缺点是灵敏度不足，异嗜性抗体干扰。灵敏度跟多种因素相关，包括样本的流动速度、反应时间、标记物、背景、新的生物放大系统等，对于灵敏度要求高的一些项目比如感染性项目，往往因为灵敏度低造成漏检，带来应用的困惑。在检测中，特别是双抗体夹心法检测中，由于异嗜性抗体的存在，往往造成假阳性，常见的消除异嗜性抗体的方法是在样本垫中添加抗异嗜性抗体，样本垫对初始的样本进行初步过滤，只是过滤了较为明显的絮状物或颗粒明显物质，对异嗜性抗体反应不充分，因此对异嗜性抗体引起的干扰清除不彻底。
[0004]另外研究者尝试多种方法提升免疫胶体金的灵敏度。申请号为200880132189.2的专利“免疫层析测试中信号放大的方法以及使用该方法的免疫层析试剂盒”利用标记物不同，进行二种偶联物的级联反应实现信号放大，进而提升检测的灵敏度。申请号为201210507386.6“一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法”的专利是在反应后的检测试纸上滴加透明化试剂，降低试纸条的背景来提升灵敏度。申请号为201710046695.0“一种高灵敏度胶体金试纸及其制备方法与应用”的专利在样本垫中添加亲和素，在结合垫中添加生物素标记的抗体，利用生物素和亲和素系统进行灵敏度提高。上述专利利用标记物级联放大，降低背景信号，生物素亲和素放大系统的方法进行灵敏度提升，没有涉及样本反应时间和流动速度等侧向流关键的物理参数的优化，且现有的免疫层析试纸条设置上也存在不足。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供胶体金试纸的制备与应用。
[0006]本专利技术提供了胶体金试纸，其包括顺次设置的硝酸纤维素膜、样品垫、过滤垫、结合垫、反应垫及吸水垫。
[0007]所述过滤垫的制备原料包括过滤垫基质和过滤垫处理液：所述过滤垫基质选自玻璃纤维或聚酯纤维；所述过滤垫处理液包括水和Tris、酪蛋白、牛血清白蛋白和抗异嗜性抗体。
[0008]所述反应垫的制备原料包括反应垫基质和反应垫处理液：所述反应垫基质包括聚酯玻纤；所述反应垫处理液包括水和疏水性表面活性剂、亲水性表面活性剂、三羟甲基氨基
甲烷、氨基酸、酪蛋白、明胶和牛血清白蛋白。
[0009]本专利技术中，所述的硝酸纤维素膜包被有质控抗体和目标蛋白抗体。进一步的，所述的质控抗体包括IgG抗体，所述IgG抗体包括羊抗鼠IgG、羊抗兔IgG、羊抗人IgG、羊抗鸡IgG、兔抗人IgG、抗羊IgG、抗犬IgG、抗鼠IgG、抗鸡IgG、抗牛IgG、抗猪IgG；本专利技术实施例中，所述质控抗体使用羊抗鼠IgG抗体，浓度为1.5mg/ml。
[0010]本专利技术中，所述目标蛋白抗体选择与检测目标相关，当检测目标发生改变时，其需要根据目标进行适应性改变。所述的检测目标包括但不限于病毒、细菌、真菌、动物；所述的病毒包括但不限于疱症病毒、乙肝病毒、流感病毒、麻疹病毒、SARS病毒、脊髓灰质炎病毒、登革热病毒、巨细胞病毒、新冠病毒；所述新冠病毒的目标蛋白抗体包括新冠N蛋白抗体和新冠S蛋白抗体；本专利技术采用新冠N蛋白鼠源IgG抗体为目标蛋白抗体，用于新冠病毒的检测，浓度为1.0μl/cm。
[0011]本专利技术中，所述的样品垫的材质选自：聚酯玻纤、玻璃纤维、无纺布。本专利技术使用聚酯玻纤作为样品垫材质，更利于样品的在一定的速度和浓度下均匀层析流向硝酸纤维素膜。
[0012]本专利技术中，所述结合垫的材质选自：玻璃纤维、无纺布、无尘纸、反应膜聚酯膜或高分子复合物。本专利技术使用玻璃纤维作为结合垫的材质，其与本专利技术所述的构成胶体金试纸的其他必要技术特征一起，用于特异性强、灵敏度高的胶体金试纸的制备。
[0013]本专利技术中，所述过滤垫处理液包括水和(w/w)：6.0％Tris、0.2％酪蛋白、0.1％牛血清白蛋白和0.005％抗异嗜性抗体，pH 8.3。
[0014]所述反应垫处理液包括水和(w/w)：0.01～0.5％疏水性表面活性剂、0.01～0.5％亲水性表面活性剂、6.0％三羟甲基氨基甲烷、2％氨基酸、0.5％酪蛋白、0.2％明胶和0.1％牛血清白蛋白，pH 8.3。
[0015]进一步的，所述抗异嗜性抗体优选跟使用包被标记同源抗体。实验结果表明，与包被标记同源抗体的抗异嗜性抗体的使用可消除或减少非特异性反应。所述抗异嗜性抗体选自抗鼠源抗体，抗兔源性抗体，抗羊源性抗体或抗鸡源性抗体。更进一步的，本专利技术优选抗鼠源抗体，其与鼠IgG抗体配套使用，当体系IgG抗体发生改变时，则需要替换相应的抗异嗜性抗体。
[0016]本专利技术中，所述的表面活性剂包括亲水表面活性剂和疏水表面活性剂。本专利技术中，HBL表示了亲水基团和亲油基团的亲水亲油平衡值，表面活性剂的HBL值越大，表示分子亲水性越强。
[0017]本专利技术中，所述亲水性表面活性剂的HLB值＞24，其包括纯月桂基硫酸钠、N
‑
十六烷基
‑
N
‑
乙基吗啉基乙基硫酸钠阳离子、乙二胺
‑
草酸盐嵌段共聚物(1307)和(聚氧乙烯—聚氧丙烯)嵌段共聚物(RF68)，优选RF68，其使用浓度0.01～0.5％。
[0018]本专利技术中，所述疏水性表面活性剂的HLB＜5，其包括单硬脂酸甘油酯、羟基化羊毛脂、丙二醇脂肪酸酯、失水山梨醇单油酸酯、二乙二醇脂肪酸酯、有辛基酚乙氧基化物(CA210)和山梨糖醇酐单硬脂酸酯(60)，优选60，其使用浓度0.01～0.5％。
[0019]本专利技术中，所述的氨基酸包括甘氨酸和带电荷的极性氨基酸；所述的极性氨基酸
包括：天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、精氨酸、赖氨酸、组氨酸。本专利技术优选甘氨酸。实验表明，氨基酸的加入增加了反应的敏感性。
[0020]本专利技术中，当所述过滤垫处理液为(w/w)：6.0％Tris、0.2％酪蛋白、0.1％牛血清白蛋白和0.005％抗鼠源抗体，pH 8.3；所述反应垫处理液为(w/w)：0.01％(聚氧乙烯
‑
聚氧丙烯)嵌段共聚物、0.5％山梨糖醇酐单硬脂酸酯、6.0％三羟甲基氨基甲烷、2％甘氨酸、0.5％酪蛋白、0.2％明胶和0.1％牛血清白蛋白，pH 8.3；制得的试纸条的性能更优秀。
[0021]本专利技术在实验中发现，本专利技术所述胶体金试纸条性能的提高，与试纸条中每个组成部分的材料选择和试剂处理步骤密切相关，多种因素之间互相支持，相互作用，最终从整体上是使制得的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.胶体金试纸，其包括顺次设置的硝酸纤维素膜、样品垫、过滤垫、结合垫、反应垫及吸水垫；所述过滤垫的制备原料包括过滤垫基质和过滤垫处理液：所述过滤垫基质选自玻璃纤维或聚酯纤维；所述过滤垫处理液包括水和Tris、酪蛋白、牛血清白蛋白和抗异嗜性抗体；所述反应垫的制备原料包括反应垫基质和反应垫处理液：所述反应垫基质包括聚酯玻纤；所述反应垫处理液包括水和：疏水性表面活性剂、亲水性表面活性剂、三羟甲基氨基甲烷、氨基酸、酪蛋白、明胶和牛血清白蛋白。2.根据权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜包被有：质控抗体和目标蛋白抗体。3.根据权利要求1或2所述的胶体金试纸，其特征在于，所述质控抗体为羊抗鼠IgG抗体；所述目标蛋白抗体为新冠N蛋白IgG抗体。4.根据权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于，所述样品垫的材质为聚酯玻纤；所述结合垫的材质为玻璃纤维。5.根据权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于，所述过滤垫处理液包括水和(w/w)：6.0％Tris、0.2％酪蛋白、0.1％牛血清白蛋白和0.005％抗异嗜性抗体，pH 8.3；所述反应垫处理液包括水和(w/w)：0.01～0.5％疏水性表面活性剂、0.01～0.5％亲水性表面活性剂、6.0％三羟甲基氨基甲烷、2％氨基酸、0.5％酪蛋白、0.2％明胶和0.1％牛血清白蛋白，pH 8.3。6.根据权利要求1或5所述的胶体金试...

【专利技术属性】
技术研发人员：付清山，刘功成，于林，李静辉，王米格，刘丽君，韩艳，付光宇，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：