一种鉴定人性别的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种鉴定人性别的PCR的引物组合，所述引物组合由第一引物对和第二引物对组成，所述第一引物对包括如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7所述的核苷酸序列，所述第二引物对如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列。本发明专利技术用于鉴定人性别的PCR的引物组合，特异性好，扩增效率高，能很好的应用于人的性别鉴定；本发明专利技术的该鉴定方法操作简便，鉴定效率高，且该鉴定方法具有很高的敏感性、特异性、准确性以及应用性；本发明专利技术的鉴定方法的准确率可达到100％。达到100％。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定人性别的试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因鉴定
，更具体地，涉及一种鉴定人性别的引物、试剂盒以及方法。

技术介绍

[0002]利用PCR技术对人类个体、人源细胞株性别鉴定是目前应用最广泛的方法。PCR即聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。该技术是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增目的DNA。利用这一方法对性别特异基因(如Y染色体SRY基因)进行扩增检测，根据扩增产物在男女性别的不同片段大小或信号强弱，进行检测结果分析，以判断受检个体的性别。目前，根据扩增方法和循环参数的不同，可将常用的PCR性别鉴定方法分为普通PCR法、双重或多重PCR法、巢式PCR法，以及荧光定量PCR法等。
[0003]其中，双重或多重PCR法，即通过设计并合成一对性别特异引物和至少一对持家基因进行扩增的内参引物，以微量DNA为模板，在一定条件下将两对或多对引物同时在一个PCR反应体系中进行扩增检测，以内参引物的扩增产物作为扩增反应发生与否作为阳性对照(若内参引物条带没有出现，则认为PCR反应没有发生，检测无效)：在内参引物条带出现的前提下，同时出现男性特异条带为男性，如果出现女性特异条带则为女性。
[0004]利用双重或多重PCR法检测性别，虽然可以减少假阴性结果的发生，但同时在一个PCR反应体系中进行两对或更多对引物的扩增反应，增加了引物内部、引物间、引物与模板间竞争作用，增加了检测分析的难度，不利于性别的准确快速检测。该方法是通过设置内参引物避免了假阴性结果的发生，但在一次PCR反应中只加入男性或女性的性别特异引物，有些时候需要两次PCR来确定样本是来自男性还是女性。因此，寻求一种简单快速一次性PCR来鉴定样本性别的方法成为本领域亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]为了解决上述目的，本专利技术提供了于一步法鉴定人性别的PCR的引物组合，该引物组合特异性好，扩增效率高，能很好的应用于人性别的鉴定，避免了假阴性的出现，提高了鉴定的准确性。
[0006]本专利技术的第一个目的在于提供一种鉴定人性别的PCR的引物组合，所述引物组合包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7所述的核苷酸序列，所述第二引物对如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列。
[0007]通常说来，每增加一个核昔酸引物特异性会提高4倍，这样，大多数应用的最短引物长度为18个核昔酸。引物长度的上限并不很重要，主要与反应效率有关。一般引物的序列中，G+C含量一般为40％
‑
60％，一对引物的GC含量和Tm值应该协调。本专利技术的引物组合中的引物G+C含量均控制在适宜的范围内，且碱基分布随机，因而具有适中的解链温度，便于扩
增。
[0008]优选地，所述第一引物对扩增的目的片段为如SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列；所述第二引物对扩增的目的片段为如SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列。
[0009]本专利技术的第二个目的在于提供一种人性别的鉴定方法，具体包括如下步骤：提取待检样本的DNA作为模板，用第一引物对和第二引物对对所述DNA进行PCR扩增，扩增反应结束后将PCR产物进行电泳分析，鉴定结果为当PCR产物出现两条带时，结果为男性，出现仅一条带时，结果为女性。
[0010]该鉴定方法操作简便，鉴定效率高，且该鉴定方法具有很高的敏感性、特异性、准确性以及应用性，可良好的用于人性别的鉴定，该鉴定方法非常适于大范围广泛推广应用。
[0011]优选地，若待检样本的DNA出现一条403bp的条带为女性，若同时出现403bp和248bp的条带为男性。
[0012]优选地，所述PCR反应中，DNA浓度为15ng～15pg/μl。
[0013]优选地，所述PCR反应中，引物浓度为5～20μmol/L。
[0014]本专利技术的第三个目的在于提供用于鉴定人性别的基因，所述基因包括如SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列。本专利技术选用的目的扩增片段具有更好的特异性，使用该目的片段与本专利技术的引物结合使用能提高扩增的灵敏度和准确率，灵敏度最高可扩增出DNA浓度仅为15pg/μl的DNA模板。
[0015]本专利技术的第四个目的在于提供一种鉴定人性别的试剂盒，包括鉴定上述所述的的基因的引物组合。
[0016]优选地，所述引物组合包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7所述的核苷酸序列，所述第二引物对如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列。
[0017]本专利技术的第五个目的在于提供所述的鉴定人性别的PCR的引物组合或者上述所述的基因在鉴定人性别方面的应用。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术用于鉴定人性别的PCR的引物组合，特异性好，扩增效率高，能很好的应用于人的性别鉴定；(2)本专利技术的该鉴定方法操作简便，鉴定效率高，且该鉴定方法具有很高的敏感性、特异性、准确性以及应用性；(3)本专利技术的鉴定方法的准确率可达到100％。
附图说明
[0019]图1为本专利技术设计的引物对1的PCR扩增结果电泳图。
[0020]图2为本专利技术设计的引物对2的PCR扩增结果电泳图。
[0021]图3为本专利技术设计的引物对3的PCR扩增结果电泳图。
[0022]图4为本专利技术设计的引物对4的PCR扩增结果电泳图。
[0023]图5为本专利技术设计的引物对5的PCR扩增结果电泳图。
[0024]图6为本专利技术设计的引物对6的PCR扩增结果电泳图。
[0025]图7为本专利技术设计的引物对7的PCR扩增结果电泳图。
[0026]图8为本专利技术设计的引物对8的PCR扩增结果电泳图。
[0027]图9为本专利技术设计的引物对9的PCR扩增结果电泳图。
[0028]图10为本专利技术设计的引物对10的PCR扩增结果电泳图。
[0029]图11为本专利技术设计的引物对8的验证实验结果。
[0030]图12为48例人外周血样品PCR目的条带显示结果
[0031]图13为本专利技术引物对8不同浓度DNA模板浓度PCR扩增结果电泳图。
[0032]图14为对照组不同浓度DNA模板浓度PCR扩增结果电泳图。
具体实施方式
[0033]为了更加简洁明了的展示本专利技术的技术方案、目的和优点，下面结合具体实施例详细说明本专利技术的技术方案。如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
[0034]实施例1鉴定X，Y染色体的片段的筛选，引物设计和优化
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定人性别的PCR的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7所述的核苷酸序列，所述第二引物对如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述第一引物对扩增的目的片段为如SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列；所述第二引物对扩增的目的片段为如SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列。3.一种鉴定人性别的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待检样本的DNA作为模板，用第一引物对和第二引物对对所述DNA进行PCR扩增，扩增反应结束后将PCR产物进行电泳分析，鉴定结果为当PCR产物出现两条带时，结果为男性，出现仅一条带时，结果为女性。4.如权利要求3所述的鉴定人性别的方法，其特征在于，若待检样本的DNA出现一条403bp的条带为女性，若同时出现403bp...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵凌，赵鸣雷，商必志，
申请(专利权)人：中山大学中山眼科中心，
类型：发明
国别省市：