一种区分三角鲂性别的分子标记、试剂盒及区分方法技术

一种区分三角鲂性别的分子标记、试剂盒及区分方法，本发明专利技术区分三角鲂性别的分子标记的引物对为HLJFLf3和HLJFLr3。区分三角鲂性别的方法：一、提取待测三角鲂样本基因组DNA；二、以提取的基因组DNA为模板，以HLJFLf3和HLJFLr3为引物进行PCR扩增，获得PCR产物；三、对PCR产物进行电泳检测，电泳结果出现582bp条带的对应样本为雄性，无扩增条带的样本为雌性。本发明专利技术公开了三角鲂的性别特异性分子标记以及性别鉴定方法，能够在三角鲂早期发育阶段确定个体性别，进而控制后备亲鱼群体的性比，降低养殖和维护成本。本发明专利技术在三角鲂早期发育阶段便可确定个体性别，为研究三角鲂性别与生长等商业性状之间的关联奠定了基础。业性状之间的关联奠定了基础。业性状之间的关联奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种区分三角鲂性别的分子标记、试剂盒及区分方法


[0001]本专利技术涉及一种区分三角鲂性别的分子标记、试剂盒及区分方法。

技术介绍

[0002]鲂属鱼类是我国淡水鱼家族中的重要一员，其主要包括分布于长江中下游大型湖泊中广为人知的团头鲂(武昌鱼)、长江上游的厚颌鲂、珠江和海南水系的广东鲂以及广泛分布于多个水系的三角鲂。
[0003]三角鲂个体大、肉质好，适合不同地域消费者的烹饪及饮食习惯，且该鱼易饲养、易起捕、抗病抗逆性强，适合池塘、网箱等多种养殖方式。尽管有学者指出，三角鲂有望成为继团头鲂之后最具养殖潜力的鲂属鱼类，但不可否认的是三角鲂在养殖量、市场认可度、品种选育等方面均远不及团头鲂。目前，由于过度捕捞和环境破坏等原因，三角鲂仅存黑龙江、浙江杭州钱塘江和湖北红安金沙河水库3个自然分布的种群。利用现代分子遗传学手段，开展三角鲂的种质特性和新品种培育研究势在必行。
[0004]根据近几年的调查，野生黑龙江三角鲂需7龄方能达到性成熟。在养殖条件下，黑龙江三角鲂性成熟年龄约需5龄，南方种群需3龄。三角鲂在性成熟前的个体发育早期阶段，无明显的性别特征。对于性成熟晚、成熟时个体相对较大的养殖鱼类来说，亲鱼的培育周期长，群体养殖和维护成本较高。育种企业若能通过性别的早期鉴定随时掌控后备亲鱼群体的性比，则可适当减少亲本的培育数量，从而有效降低养殖和维护成本，提高整体经济效益。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种区分三角鲂性别的分子标记、试剂盒及区分方法。
[0006]本专利技术区分三角鲂性别的分子标记的引物对为HLJFLf3和HLJFLr3，具体序列为：
[0007]HLJFLf3：5'
‑
GATGATGGTCAAATGAACTAG
‑
3'；
[0008]HLJFLr3：5'
‑
ATGGGATGGAGCAATGCAATG
‑
3'。
[0009]进一步，黑龙江三角鲂的性别分子标记核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；钱塘江三角鲂和金沙河水库三角鲂的性别分子标记核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0010]黑龙江三角鲂的性别分子标记与钱塘江三角鲂和金沙河水库三角鲂的性别分子标记均为582bp。
[0011]区分三角鲂性别的试剂盒包括分子标记引物对HLJFLf3和HLJFLr3。HLJFLf3：5'
‑
GATGATGGTCAAATGAACTAG
‑
3'；HLJFLr3：5'
‑
ATGGGATGGAGCAATGCAATG
‑
3'。
[0012]区分三角鲂性别的方法：
[0013]一、提取待测三角鲂样本基因组DNA；
[0014]二、以提取的基因组DNA为模板，以HLJFLf3和HLJFLr3为引物进行PCR扩增，获得PCR产物；
[0015]三、对PCR产物进行电泳检测，电泳结果出现582bp条带的对应样本为雄性，无扩增
条带的样本为雌性，即完成三角鲂的性别鉴定。
[0016]本专利技术公开了三角鲂的性别特异性分子标记以及性别鉴定方法，能够在三角鲂早期发育阶段确定个体性别，进而控制后备亲鱼群体的性比，降低养殖和维护成本。
[0017]本专利技术在三角鲂早期发育阶段便可确定个体性别，为研究三角鲂性别与生长等商业性状之间的关联奠定了基础。
[0018]本专利技术可实现对现存的3个三角鲂种群(黑龙江、钱塘江和金沙河水库)性别的高效鉴定。性别鉴定准确性高达到100％，且具有操作过程简洁、用时短等优点。
附图说明
[0019]图1是实施例1中部分样品凝胶电泳检测结果图。
具体实施方式
[0020]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0021]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0022]具体实施方式一：本实施方式区分三角鲂性别的分子标记的引物对为HLJFLf3和HLJFLr3，具体序列为：
[0023]HLJFLf3：5'
‑
GATGATGGTCAAATGAACTAG
‑
3'；
[0024]HLJFLr3：5'
‑
ATGGGATGGAGCAATGCAATG
‑
3'。
[0025]黑龙江三角鲂、钱塘江三角鲂和金沙河水库三角鲂的性别分子标记均为582bp。
[0026]具体实施方式二：本实施方式区分三角鲂性别的试剂盒包括分子标记引物对HLJFLf3和HLJFLr3。HLJFLf3：5'
‑
GATGATGGTCAAATGAACTAG
‑
3'；HLJFLr3：5'
‑
ATGGGATGGAGCAATGCAATG
‑
3'。
[0027]具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二的不同点在于该试剂盒还包括去离子水、10
×
Taq Buffer、MgCl2、dNTPs和TaqDNA聚合酶。其它与具体实施方式二相同。
[0028]具体实施方式四：本实施方式区分三角鲂性别的方法：
[0029]一、提取待测三角鲂样本基因组DNA；
[0030]二、以提取的基因组DNA为模板，以HLJFLf3和HLJFLr3为引物进行PCR扩增，获得PCR产物；
[0031]三、对PCR产物进行电泳检测，电泳结果出现582bp条带的对应样本为雄性，无扩增条带的样本为雌性，即完成三角鲂的性别鉴定。
[0032]其中，步骤二中PCR扩增体系如表1所示：
[0033]表1
[0034]成分用量去离子水13.8μL10
×
Taq Buffer2μL
MgCl21.6μL10mM dNTPs0.4μL10μM引物HLJFLf30.6μL10μM引物HLJFLr30.6μL5U/μL Taq DNA聚合酶0.08μL100ng/μL基因组DNA1.0μL
[0035]其中，步骤二中PCR扩增条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s、56℃退火30s、72℃延伸30s，共30个循环；再72℃延伸5min，4℃保温。
[0036]实施例1
[0037]本实施例随机选取黑龙江三角鲂、钱塘江三角鲂和金沙河水库三角鲂各50尾，取样时间均在个体达到性成熟后的繁殖期。
[0038]一、鳍条组织每尾取样约60mg，并编号、记录性别，提取鳍条基因组DNA。将提取的鳍条基因组DNA置于装有75％乙醇的2ml EP管中放
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种区分三角鲂性别的分子标记，其特征在于该分子标记的引物对为HLJFLf3和HLJFLr3，具体序列为：HLJFLf3：5'
‑
GATGATGGTCAAATGAACTAG
‑
3'；HLJFLr3：5'
‑
ATGGGATGGAGCAATGCAATG
‑
3'。2.一种区分三角鲂性别的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括分子标记引物对HLJFLf3和HLJFLr3。3.根据权利要求2所述的区分三角鲂性别的试剂盒，其特征在于该试剂盒还包括去离子水、10
×
Taq Buffer、MgCl2、dNTPs和Taq...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡雪松，李池陶，贾智英，葛彦龙，姜晓娜，石潇丹，石连玉，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，
类型：发明
国别省市：