小片段DNA的检测方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术公开了小片段DNA的检测方法及检测试剂盒，属于基因检测技术领域。所述检测方法为：(1)针对目标检测基因，设计得到特异性正向引物、特异性反向引物和探针；在特异性的正向引物的5

Detection method and detection kit of small fragment DNA

【技术实现步骤摘要】
小片段DNA的检测方法及检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种小片段DNA的检测方法及检测试剂盒，属于基因检测


技术介绍

[0002]实时荧光定量PCR(Real
‑
Time Polymerase Chain Reaction，qPCR)是能够定量监测目的基因扩增数量的PCR技术，其原理是在PCR体系中加入荧光染料或荧光分子标记的寡核苷酸链，与PCR扩增产物结合时荧光分子在紫外线的激发下发出荧光，通过荧光信号探测器直接检测反应体系中荧光信号的变化，检测监测目的基因的拷贝数量，并据此推断目的基因的初始量。
[0003]TaqMan探针是当前使用最广泛的水解荧光探针，其5'端标记了荧光发射分子，3'端标记了荧光淬灭分子，当TaqMan水解探针处于游离状态时，两端的荧光分子相互靠近，在紫外线的激发下荧光被吸收，无法被荧光探测器检测到。随着PCR反应的进行，TaqMan探针与目的基因发生特异性结合，5'端的荧光发射分子被DNA合成酶水解，在空间上脱离了荧光受体分子的影响，在紫外线的激发下产生荧光，并被荧光信号探测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小片段DNA的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)引物和探针的设计：针对目标检测基因，设计得到特异性正向引物、特异性反向引物和探针；在特异性的正向引物的5
’
端连接一段含有延伸阻滞剂的茎环结构得到茎环引物，所述含有延伸阻滞剂的茎环结构的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其中第11、13、15位的碱基为5－甲基胞嘧啶；SEQ ID NO.1：5
’‑
AGCCATCCAGCGCGCGGCTGTGGATCGGTAGTAGGATGGCT
‑3’
；所述探针的5
’
端连接荧光基团，3
’
端连接淬灭基团BHQ；(2)QPCR检测：提取待检测样品中的小片段DNA，利用步骤(1)中设计得到的引物和探针，利用QPCR检测方法进行扩增和检测，根据检测结果，判断待检测样品中是否含有目标检测基因。2.根据权利要求1所述的小片段DNA的检测方法，其特征在于：所述目标检测基因为人SRY基因；所述茎环引物、特异性正向引物、特异性反向引物和探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.2～5所示，其所针对的是40bp的小片段DNA；SEQ ID NO.2：5
’‑
AGCCATCCAGCGCGCGGCTGTGGATCGGTAGTAGGATGGCTTCCAGGATAGAGTGAAGCGACCCA
‑3’
；SEQ ID NO.3：5
’‑
CACACGATGAATGCGT
‑3’
；SEQ ID NO.4：5
’‑
TCCAGGATAGAGTGAAGCGACCCA
‑3’
；SEQ ID NO.5：5
’‑
TAGAGTGAAGC
‑3’
。3.根据权利要求1所述的小片段DNA的检测方法，其特征在于：所述目标检测基因为人SRY基因；所述茎环引物、特异性正向引物、特异性反向引物和探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6～9所示，其所针对的是62bp的小片段DNA；SEQ ID NO.6：5
’‑
AGCCATCCAGCGCGCGGCTGTGGATCGGTAGTAGGATGGCTAGAGTGAAGCGACCCATGA
‑3’
；SEQ ID NO.7：5
’‑
GCCATCTTGCGCCTC
‑3’
；SEQ ID NO.8：5
’‑
AGAGTGAAGCGACCCATGA
‑3’
；SEQ ID NO.9：5
’‑
TCGTGTGGTCTCG
‑3’
。4.根据权利要求1所述的小片段DNA的检测方法，其特征在于：所述目标检测基因为人SRY基因；所述茎环引物、特异性正向引物、特异性反向引物和探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.10～13所示，其所针对的是84bp的小片段DNA；SEQ ID NO.10：5
’‑
AGCCATCCAGCGCGCGGCTGTGGATCGGTAGTAGGATGGCTTGGATAGTAAAATAAGTTTCG
‑3’
；SEQ ID NO.11：5
’‑
GAAGCATATGATTGCATTG
‑3’
；SEQ ID NO.12：5
’‑
TGGATAGTAAAATAAGTTTCG
‑3’
；SEQ ID NO.13：5
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GCACCTTTCAATTTTGTCG
‑3’
。5.根据权利要求1所述的小片段DNA的检测方法，其特征在于：所述待检测样品为血浆样本。6.根据权利要求1所述的小片段DNA的检测方法，其特征在于：所述QPCR检测的反应体系为：2x iTaq Probe ...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵佳，王建春，赵艳秋，陈为鑫，
申请(专利权)人：深圳市萨米医疗中心，
类型：发明
国别省市：