用于合成透明质酸和紫杉醇的缀合物的方法技术

描述了一种通过在透明质酸与紫杉醇之间引入4

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于合成透明质酸和紫杉醇的缀合物的方法
[0001]专利技术目的
[0002]本专利技术描述了根据透明质酸(HA)分子与紫杉醇之间的合成方法，通过在透明质酸与上述化学治疗剂之间引入4
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溴丁酸间隔基/连接基，根据确保呈其最终形式的缀合物的纯度的原始合成和纯化方法所获得的透明质酸
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紫杉醇缀合物的工业合成方法。
专利

[0003]紫杉醇是通过作用于细胞骨架系统的微管组织而发挥其抗增殖作用的抗癌剂：其通过抑制上述微管的去极化，阻止其在有丝分裂细胞分裂期间发生的正常动态重组(Manfredi JJ等人,J Cell Biol,1982,94:688
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696)。
[0004]紫杉醇的主要治疗适应症是其用于晚期乳腺癌的治疗，肺癌的治疗，卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌和子宫内膜癌的治疗。
[0005]紫杉醇是水不溶性化合物，因此，目前利用其的药物组合物包括将其与Cremophor EL
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乙醇(Pfeifer RW等人,Am J Hosp Pharm,1993,50:2520
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2521)以1:1比率混合，并且其在该制剂中使得其通常通过连续静脉内输注给药。Cremophor EL的存在代表通常在紫杉醇的给药期间发生的不良反应的主要原因，即荨麻疹的简单发作、呼吸困难和支气管痉挛，直至过敏性休克。出于该原因，在开始治疗之前，用紫杉醇
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Cremophor EL药物组合物治疗的所有患者必须遵循由给予地塞米松组成的用药前方案(可能与抗组胺剂有关)。
[0006]因此，我们可以声明，目前临床用途中的的制剂(以及其给药途径)构成对其治疗功效的限制。这正是为何研究目前既针对前药/水溶性紫杉醇缀合物的合成又针对上述抗癌药物的新制剂的原因。
[0007]紫杉醇是目前由来源于红豆杉(Taxus Baccata)针叶的其前体之一通过半合成获得的生物碱。化学上，它由在C4和C5位与氧基乙烷环结合的15个碳原子的紫杉烷环组成，而在C13位存在酯键，这被认为对于其抗癌活性是不可缺少的。
[0008]为了克服由于制剂的类型而引起的上述问题，已经做出了尝试，例如，将所述抗癌剂包封在脂质体，纳米囊和由聚合物壁(所述聚合物壁由诸如聚乳酸的可生物降解的共聚物、或诸如乙烯
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乙酸乙烯酯的不可生物降解的共聚物所形成)所构成的微球，或由负载有紫杉醇的聚磷酸酯所形成的微球中，以产生用于在治疗位点处延长释放药物的系统(Nuijen B等人,Investigational New Drugs,2001,19:143
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153)。
[0009]然而，用于包封紫杉醇的这些新系统存在稳定性、制备和再现性的问题。
[0010]此外，已经做出了各种尝试以用环糊精使上述药物增溶，但是新的制剂没有得到期望的结果(Nuijen B等人,Investigational New Drugs,2001,19:143
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153)。
[0011]对将会使药物更具水溶性，并同时保持其作为抗癌剂的功效不变的新的紫杉醇制剂的化学研究已经引向在C2'和C7位处修饰的新类似物的合成，此外，引向也被定义为前药的新缀合物的制备。
[0012]出于该考虑，已经做出了若干尝试以合成新的前药，其已经引向例如药物诸如乙酰基
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紫杉醇(Mellado W等人,Biochem Biophys Res Commun,1984,124(2):329
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336)的制
备或上述药物与琥珀酸、戊二酸和磺酸在C2'位处的碳上的新酯的合成，然而，该新酯被证明在水性环境中不稳定。
[0013]此外，还已知使用PEG(聚乙二醇)用于通过在C2'位处酯化紫杉醇来衍生上述化学治疗剂。这样的新分子被证明是高度水溶性的，但也具有有限的稳定性。
[0014]最后，还开发了上述药物的新的“递送系统”，其通过将紫杉醇与血清白蛋白(HSA)缀合而获得：紫杉醇
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HSA缀合物被证明是高度水溶性的，但是相对于紫杉醇本身没有可靠的功效数据(Nuijen B等人,Investigational New Drugs,2001,19:143
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153)。
[0015]最近，已经合成了用先前修饰的透明质酸(HA)酯化(即用通过酰胺键与HA的羧基基团结合的酰肼分子衍生化)的紫杉醇的新的释放系统(Luo Y等人,Biomacromolecules,2000,1(2):208
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218)(US5,874,417)。由此获得新的紫杉醇递送系统，其使得药物能够直接地到达靶肿瘤细胞的膜表面，所述靶肿瘤细胞的特征在于HA受体CD44的过表达。
[0016]在开发紫杉醇与HA的缔合的所有潜力的尝试中，最终研究并合成了HA与化学治疗剂之间的新的缀合物，其中HA和化学治疗剂通过间隔基/连接基诸如例如溴丁酸间接地彼此共价结合，这使得最终产物更具水溶性并且因此易于给药(EP2045270)。
[0017]本专利技术的范围是确定了一种用于制备和纯化的新的方法，其特别有效并且克服了以上所强调的现有技术的缺点。
[0018]专利技术详述
[0019]因此，本专利技术的目的是一种用于制备和纯化透明质酸
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紫杉醇(HA
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紫杉醇)缀合物的原始方法，其包括以下步骤或由以下步骤组成：
[0020]a)在催化剂(优选地DMAP(4
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二甲基氨基吡啶))的存在下，通过活化剂在含有4
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溴丁酸间隔基/连接基的有机溶剂(优选地二氯甲烷)中的紫杉醇的溶液中活化上述4
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溴丁酸间隔基/连接基的羧基基团，获得所述HA
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紫杉醇缀合物的中间体；
[0021]b)将从之前的步骤a)获得的所述中间体在有机溶剂(优选地正庚烷)中结晶，随后将其过滤并干燥；
[0022]c)将在之前的步骤b)中获得的所述中间体添加到在DMSO中的HA的TBA(四丁铵)盐中；
[0023]d)通过用含有NaBr盐的乙醇/水溶液沉淀，至少一次随后在乙醇/水中洗涤和在乙醇中进一步洗涤，在40℃下预干燥以及在40℃和大气压下在饱和的水蒸气室中穿过，最后在40℃下在真空下干燥，纯化由此获得的所述HA
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紫杉醇缀合物，其在HA多糖的所述羧基与所述间隔基/连接基之间具有酯键，所述间隔基/连接基又经由其羧基通过酯键结合到紫杉醇的碳C2'处的羟基基团。
[0024]本专利技术的另外的目的是具有在15％至21％w/w范围内，优选地在16％至20％w/w范围内的衍生化程度或酯化程度的HA
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紫杉醇缀合物，其中起始透明质酸具有发酵来源，具有140,000Da至250,000Da的重均分子量，所述缀合物呈细且均匀的粉末形式，具有按干燥产物的重量计大于98％的纯度并且含有按重量计小本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于制备和纯化透明质酸
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紫杉醇(HA
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紫杉醇)缀合物的方法，其包括以下步骤或由以下步骤组成：a)在催化剂(优选地DMAP(4
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二甲基氨基吡啶))的存在下，通过活化剂在含有4
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溴丁酸间隔基/连接基的有机溶剂(优选地二氯甲烷)中的紫杉醇的溶液中活化上述4
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溴丁酸间隔基/连接基的羧基基团，获得HA
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紫杉醇缀合物的中间体；b)将从之前的步骤a)获得的所述中间体在有机溶剂(优选地正庚烷)中结晶，随后将其过滤并干燥；c)将在之前的步骤b)中获得的所述中间体添加到在DMSO中的HA的TBA(四丁铵)盐中；d)通过以下步骤纯化由此获得的所述HA
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紫杉醇缀合物：用含有NaBr盐的乙醇/水溶液沉淀，至少一次随后在乙醇/水中洗涤和在乙醇中进一步洗涤，在40℃下预干燥以及在40℃和大气压下在饱和的水蒸气室中穿过，最后在40℃下在真空下干燥，所述HA
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紫杉醇缀合物在HA多糖的羧基与所述间隔基/连接基之间具有酯键，所述间隔基/连接基又经由其羧基通过酯键结合到紫杉醇的碳C2'处的羟基基团。2.根据权利要求1所述的方法，其中在活化步骤a)中，所述活化剂是碳二亚胺，优选地1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)。3.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中在活化步骤a)中，所述催化剂是4
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二甲基氨基吡啶(DMAP)。4.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中在结晶步骤b)中，所述溶剂是正庚烷。5.根据前述权利要求中一项或多项所述的方法，其中在纯化步骤d)中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：费迪亚医药股份公司，
类型：发明
国别省市：