一种简捷低成本的超微量干燥植物标本基因扩增方法技术

本发明专利技术则是打破了得到总的DNA才能得到DNA片段的固有思路，在不纯环境中抑制杂质，就能实现很多，对原始叶片的损伤比较小，并且可以获得分子标签，利用新鲜材料不保存只检测的直接PCR方式，应用到超微量干燥叶片标本的情景中，实现了0.01mg样本的基础上就能得到DNA片段序列。片段序列。片段序列。

【技术实现步骤摘要】
一种简捷低成本的超微量干燥植物标本基因扩增方法


[0001]本专利技术属于植物标本提取鉴定
，具体涉及一种简单快速低成本的超微量干燥植物标本的基因扩增方法。

技术介绍

[0002]利用DNA片段序列对植物分类鉴定、多样性与系统发育关系进行研究是目前生物学领域的研究热点之一。这些研究中多使用采集于野外的干燥植物标本作为实验材料。由于植物标本中的DNA在干燥、保藏过程中伴随着不同程度的损伤，因此相较于新鲜植物从干燥植物标本中提取DNA的难度较大、所需实验材料较多(干重30mg以上)。Yang等(2007)将直接PCR技术应用于新鲜的植物组织研究中，之后多位学者对这一方法进行优化(Bellstedt等,2010；Sharma等,2012；Biswas等,2014；Li等,2017)。该方法以植物组织的裂解液作为DNA模板(不需获得纯净的DNA)，在PCR反应过程中增添杂质抑制剂，即可完成PCR扩增。相较于传统的DNA提取方法，直接PCR所需的植物材料较少，但是目前该方法对于干燥植物标本进行实验时，成功率较低，且成本相对较高。本研究试图将直接PC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种简捷低成本的超微量干燥植物标本基因扩增方法，其特征在于，所述的基因扩增方法包括如下步骤：a、研磨：研磨干燥植物材料，得到研磨材料；b、裂解：将研磨材料放入离心管中，在离心管中加入Direct Buffer，随后漩涡震荡后离心；c、热浴：将离心管在80
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120℃环境中热浴2
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20min；d、冰浴：热浴取出后立即冰浴，不少于1min；e、二次离心：进行离心，形成上清液和沉淀，将上清液取出，作为DNA模板；f、PCR：配置混合液，混合液包括按照体积比进行混合的4
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6份耐受酶液、0.4
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0.6份前引物、0.4
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0.6份后引物、2
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4份ddH2O、0.5
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2份DNA模板混合，旋涡震荡1s以上，离心后放入PCR仪。2.根据权利要求1所述的一种简捷低成本的超微量干燥植物标本基因扩增方法，其特征在于，所述的步骤f中耐受酶液包括1
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5U Es Taq DNA酶、2
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4mM MgCl2以及300

【专利技术属性】
技术研发人员：石硕，沈风娇，赵晓彤，李琳，宋一帆，董琦，赵建成，
申请(专利权)人：河北师范大学，
类型：发明
国别省市：