本发明专利技术属生物医药领域，具体公开了一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒，包括反应膜条、封闭液、显色系统、洗涤缓冲液、样本稀释液和终止液，所述显色系统包括酶结合物、显色底物，所述显色底物为自制TMB显色液，所述自制TMB显色液包括吐温80、乳酸钠。通过加入优化配比后的非离子表面活性剂吐温80、乳酸钠，促进TMB的溶解和稳定，使单相TMB显色液可以长期稳定保存，性能极其优异，说明本发明专利技术所公开的TMB显色液具有高效稳定的特点。本试剂盒通过重复性试验、阴阳性符合率试验，证实了重复性良好，准确度较高，为自身免疫性糖尿病的临床诊断提供血清学依据，为自身免疫性糖尿病患者的病程检测及治疗后提供全面指导。及治疗后提供全面指导。及治疗后提供全面指导。
【技术实现步骤摘要】
一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒及其制备方法
[0001]本专利技术属生物医药领域，涉及一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒及其制备方法。
技术介绍
[0002]正常机体的免疫系统具有区别“自己”和“非己”的能力，对非己抗原能够发生免疫应答，对自身抗原则处于无应答或微弱应答状态，称为免疫耐受。自身免疫病是在某些内因和外因诱发下，自身免疫耐受状态被打破，持续迁延的自身免疫对自身抗原产生异常的免疫应答，造成了自身细胞破坏、组织损伤或功能异常，导致的临床病症。自身免疫性疾病突出表现为血清中多种自身抗体的形成及全身多脏器损伤。在自身免疫性疾病中，1型糖尿病较常见。
[0003]自身免疫介导的1型糖尿病一般是由于自体免疫系统破坏产生胰岛素的β细胞导致的，目前，1、2型糖尿病尚不能完全治愈，但是自从1921年医用胰岛素发现以来，糖尿病得到了很好的治疗和控制。在1型糖尿病患者血清中存在多种自身抗体，主要有胰岛细胞抗体(ICA)、谷氨酸脱羟酶抗体(GADA)、胰岛素自身抗体(IAA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA
‑
2A)、锌转运蛋白8抗体(Znt
‑
8A)等。
[0004]胰岛细胞抗体(ICA)为抗胰岛β细胞所有抗体的总称。目前认为，ICA阳性预示β细胞的自身免疫损害，只能作为糖尿病的高危指标。在儿童阳性或高水平持续阳性，对l型糖尿病才具有较高的预测率。
[0005]谷氨酸脱羧酶(GAD)是人及动物体内抑制神经递质γ
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氨基丁酸的合成酶。1型糖尿病是遗传易感个体通过自身抗原介导的免疫反应所引起胰岛β细胞破坏的自身免疫性疾病，GAD是此免疫反应关键的始动靶抗原，因此GAD
‑
Ab是糖尿病前期个体较特异的免疫指标。GAD
‑
Ab的测定意义为：
①
可作为1型糖尿病的预测；
②
从2型糖尿病患者中鉴别迟发型1型糖尿病，此类患者常可出现GAD
‑
Ab的高水平，并稳定维持，可考虑早期干预治疗；
③
可作为普查手段，以发现1型糖尿病的高危人群和个体。
[0006]胰岛素自身抗体(IAA)出现在未使用过外源性胰岛素或使用时间不超过7
‑
10天的个体中产生针对内源性胰岛素的自身抗体，与年龄呈负相关，随着增龄，IAA阳性率呈现下降趋势，被认为是持续时间最短的抗体。IAA单独测定意义不大，但与ICA、GAD等联合检测，可增加对1型糖尿病的预测程度。
[0007]蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA
‑
2A)特异性较强，在不伴有1型糖尿病的自身免疫患者中较少发现。可作为1型糖尿病高危人群筛查指标。
[0008]锌转运蛋白8抗体(Znt
‑
8A)具有高度的β细胞特异性，锌转运蛋白8(Znt
‑
8)抗原是通过影响锌离子浓度而在胰岛素合成和分泌中发挥重要作用，对糖尿病自身抗体免疫介导的1型糖尿病有着重要的诊断和预测价值。特别是其他自身抗体阴性的患者有着重要的诊断价值。
[0009]本申请针对自身免疫性1型糖尿病的多种抗体同时进行检测(采用免疫印迹法)，
利于对患者进行及时的诊断和正确的治疗，减少和延缓糖尿病并发症的发生和发展。
[0010]公开号为CN107449904A的专利公开了一种自身免疫性糖尿病检测用反应膜条、制备和使用方法，虽然能够一次性检测9种抗体，但采用了TMB作为显色液，TMB存在两个问题，一是溶解度低，容易沉淀，干扰检测结果，二是易被空气环境中氧气及溶液中过氧化物氧化，单组分TMB存在存储时间短、显色背景高的问题。
技术实现思路
[0011]本专利技术的第一目的是提供一种多项联检的自身免疫性糖尿病检测试剂盒，对显色系统进行了改进，在提高了溶解度的基础上，长时间保存也较稳定。
[0012]本专利技术的第二目的在于提供上述试剂盒的显色系统及其制备方法。
[0013]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0014]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种多项联检的自身免疫性糖尿病检测试剂盒，包括反应膜条、封闭液、显色系统、洗涤缓冲液、样本稀释液和终止液。
[0015]优选的，所述膜条上设有检测带、质控带。
[0016]所述检测带包括有包被ICA抗原的第一检测带，
[0017]包被GADA抗原的第二检测带，
[0018]包被IAA抗原的第三检测带，
[0019]包被IA
‑
2A抗原的第四检测带，
[0020]包被Znt
‑
8A抗原的第五检测带。
[0021]所述质控带包括第一质控带、第二质控带、第三质控带，所述第一质控带为强阳性质控带，第二质控带为中等阳性质控带，第三质控带为弱阳性质控带。
[0022]所述第一质控带包被浓度为30
‑
50μg/mL的人IgG。
[0023]所述第二质控带包被浓度为11
‑
29μg/mL的人IgG。
[0024]所述第三质控带包被浓度为1
‑
10μg/mL的人IgG。
[0025]优选的，所述显色系统包括酶结合物、显色底物。
[0026]优选的，所述酶结合物为辣根过氧化酶标记的鼠抗人IgG。
[0027]优选的，所述显色底物为自制TMB显色液，所述自制TMB显色液包括如下步骤：
[0028](1)称取150mg TMB粉末，溶解于5mL无水乙醇中，充分振荡10min,加入5mL吐温80继续振荡，完全溶解后加入到浓度为0.1mol/L，pH值为5.5的醋酸钠缓冲液中，得到混合液A。
[0029](2)向上述混合液A中加入2g乳酸钠、150mg过硼酸钠，充分混匀，0.22μm滤纸过滤，即得所述自制单组分TMB显色液，避光4℃保存。
[0030]本专利技术的另一方面，本专利技术提供上述显色系统的制备方法，
[0031]所述显色系统包括酶结合物、显色底物，所述酶结合物为辣根过氧化酶标记的鼠抗人IgG。所述显色底物为自制TMB显色液。
[0032]所述自制TMB显色液包括如下步骤：
[0033](1)称取150mg TMB粉末，溶解于5mL无水乙醇中，充分振荡10min,加入5mL吐温80继续振荡，完全溶解后加入到浓度为0.1mol/L，pH值为5.5的醋酸钠缓冲液中，得到混合液A。
[0034](2)向上述混合液A中加入2g乳酸钠、150mg过硼酸钠，充分混匀，0.22μm滤纸过滤，即得所述自制单组分TMB显色液，避光4℃保存。
[0035]本专利技术还提供了上述试剂盒的制备方法，包括：采用点样机在硝酸纤维膜上包被抗原、质控品，将硝酸纤维膜固定于PVC板上，切割成单人份反应膜条，另外准备酶结合物、显色底物、封闭液、洗涤缓冲液、样本稀释液和终止液，放置于容器内，作为试剂盒备用。
[0036]本本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒，其特征在于，包括反应膜条、封闭液、显色系统、洗涤缓冲液、样本稀释液和终止液；所述显色系统包括酶结合物、显色底物；所述显色底物为自制TMB显色液；所述自制TMB显色液包括吐温80、乳酸钠。2.如权利要求1所述的一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒，其特征在于，所述吐温80 为2
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20mL，乳酸钠为0.1
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10g。3.如权利要求1所述的一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒，其特征在于，所述吐温80 为5mL，乳酸钠为2g。4.如权利要求1所述的一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒，其特征在于，所述反应膜条上设有检测带、质控带；所述检测带包括有包被ICA抗原的第一检测带，包被GADA抗原的第二检测带，包被IAA抗原的第三检测带，包被IA
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2A抗原的第四检测带，包被Znt
‑
8A抗原的第五检测带。5.如权利要求4所述的一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒，其特征在于，所述质控带包括第一质控带、第二质控带、第三质控带，所述第一质控带为强阳性质控带，第二质控带为中等阳性质控带，第三质控带为弱阳性质控带；所述第一质控带包被浓度为30
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50μg/mL的人IgG；所述第二质控带包被浓度为11
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29μg/mL的人IgG；所述第三质控带包被浓度为1
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10μg/mL的人IgG。6.如权利要求1所述的一种自身免疫性糖尿病检测用试剂盒，其特征在于，所述显色系...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶瑞，谢红梅，李良智，尹嘉，
申请(专利权)人：苏州邦器生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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