【技术实现步骤摘要】
本申请涉及试剂盒领域，具体涉及一种抗核抗体谱检测试剂盒、制备方法、检测方法。
技术介绍
1、抗核抗体(ana)是以真核细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体总称。ana的靶抗原主要分布于细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。按细胞核内各个分子的性能不同，可将ana分为抗dna抗体、抗核小体抗体、抗组蛋白抗体、抗核仁抗体、抗着丝点抗体等。每一个大类又因不同抗原特性而再分为许多不同种类。因此，ana在广义上是一组各有不同临床意义的自身抗体，更确切的名称应为抗核抗体谱。ana主要存在于igg，也见于igm、iga，甚至igd及ige中。
2、临床上ana常见于系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,sle)等系统性(非器官特异性)aid患者，也可见于器官特异性aid患者，如自身免疫性肝病等。除此之外，ana还可出现于慢性感染性疾病、肿瘤及健康人群中。检测ana对aid的诊断、鉴别诊断、分型及疾病活动性监测等具有重要的临床意义。
3、其中抗核抗体谱检测的抗体包括：
4、(1)抗u1-nrnp抗体：高滴度的该抗体是混合型结缔组织病(mctd，夏普综合症)的标志，阳性率为95～100％，抗体滴度与疾病活动性相关。在30～40％的系统性红斑狼疮患者中也可检出该抗体，但几乎总是有抗sm抗体。
5、(2)抗sm抗体：系统性红斑狼疮的特异性抗体，与抗dsdna抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断标志。但阳性率仅为5～10％。
6、(3)抗ss-a抗体：与各类
7、(4)抗ss-b抗体：几乎仅见于干燥综合症(40～80％)和系统性红斑狼疮(10～20％)的女性患者中，男女比例为1：29。在干燥综合症中抗ss-a抗体和抗ss-b抗体常同时出现。
8、(5)抗scl70抗体(抗拓扑异构酶ⅰ抗体)：见于25～75％的进行性硬化症(弥散型)患者中，因实验方法和疾病活动性而异。在局限性硬化症中不出现。
9、(6)抗pm-scl抗体：常见于多肌炎与硬化症的重叠综合征中，50％的该抗体阳性患者为肌炎与硬化症的重叠综合征，抗pm-scl抗体也可见于单独的多肌炎患者中，阳性率为8％，在弥散型硬化症中的阳性率为2～5％。
10、(7)抗jo-1抗体：见于多肌炎，阳性率为25～35％，常与合并肺间质纤维化有关。
11、(8)抗着丝点(cenp-b)抗体：与局限型进行性系统性硬化症(crest综合征：钙质沉着、raynaud’s病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张)有关，阳性率为70～90％。在原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体(阳性率为10～30％)。还可出现于雷诺氏综合症中。
12、(9)抗pcna抗体：pcna为增殖性细胞核抗原，其表达与细胞周期有关。抗pcna抗体为系统性红斑狼疮的特异性抗体，但阳性率仅为3％。有文献报道，抗pcna抗体可能与系统性红斑狼疮患者发展为弥散性增殖性肾小球肾炎有关。
13、(10)抗dsdna抗体：对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗sm抗体外，抗dsdna抗体也可作为该病的一个血清学标志，阳性率为40～90％，并且抗dsdna抗体滴度与疾病的活动度相关，可用于疗效监控。
14、(11)抗核小体抗体：在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50～90％，特异型几乎为100％。核小体是细胞染色体的功能亚单位，由dna和组蛋白以特殊的方式组成。抗核小体抗体比抗dsdna抗体、抗组蛋白抗体更早出现于系统性红斑狼疮的早期，在系统性红斑狼疮的诱导和致病中有重要作用。临床资料显示，有15～19％的抗dsdna抗体阴性的sle患者中抗核小体抗体阳性。因此联合检测抗dsdna及核小体抗体可提高sle血清学检出率。
15、(12)抗组蛋白(his)抗体：抗一种或几种组蛋白抗体或抗h2a-h2b复合物抗体在药物(普鲁卡因胺、肼酞嗪以及其他药物)诱导的红斑狼疮中比较常见(阳性率为95％)。另外，在30～70％的系统性红斑狼疮和15～50％的类风湿性关节炎患者中也可检出抗组蛋白抗体。
16、(13)抗核糖体p蛋白抗体(p0)：是系统性红斑狼疮的特异性标志，阳性率为5～15％。普遍认为该抗体的滴度与sle的活动性相关，还与sle合并中枢神经系统症状、肾脏或肝脏受累相关。
17、(14)抗m2抗体：高滴度的抗线粒体2型抗体是原发性胆汁性肝硬化的标志，阳性率为85～95％，另外，在其他慢性肝脏疾病(30％)和进行性系统性硬化症(7～25％)中也可检出抗m2抗体，但滴度较低。
18、(15)抗ro52抗体：ss-a抗原是一种小核糖核蛋白，由一个rna分子和两种不同的蛋白质(分子量分别为52kda和60kda)组成，抗ss-a 60kda蛋白的抗体对于干燥综合症和系统性红斑狼疮的特异性更高，而单独抗ss-a 52kda的抗体不具有疾病的特异性，并且容易与其他抗体发生交叉反应。
19、上述抗核抗体在临床症状前就会出现，部分自身抗体还参与了疾病的发展，且某一种自身免疫性疾病可检测出多种抗核抗体，一种抗核抗体也可能涉及多种相关的自身免疫性疾病。
20、临床检测抗核抗体的常见方法包括间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、酶促化学发光法，但这些方法都存在着不足，具体如下。
21、1)间接免疫荧光法
22、该法的基本原理是用特异性抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法操作复杂，需要价格昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广且检测结果本底高，容易出现假阳性，检测灵敏度和特异性还有待提高，另外难以标准化和自动化。
23、2)酶联免疫吸附法
24、酶联免疫吸附法(elisa)已广泛应用，但检测操作多采用手工操作，试剂和样本的加量不很精确，操作过程繁琐易发生操作差错，检测项目组合有限且阳性检出率偏低的缺陷。
25、3)酶促化学发光法
26、酶促化学发光法主要有辣根过氧化物酶(hrp)和碱性磷酸酶(alp)两种，都都有一定的局限性，辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在的情况下，也会被h2o2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。碱性磷酸酶主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高，患者负担重。
27、目前，对于上述自身抗体的检测大多为单一自身抗体的单独检测。然而，由于自身免本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗核抗体谱联合检测试剂盒，其特征在于，包括检测膜条、酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、底物液以及用于检测膜条包被的包被液；
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述样本缓冲液、清洗缓冲液、酶结合液、底物液中所使用的缓冲液选用Tris缓冲液、MES缓冲液中的至少一种；
3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述增强剂为丝氨酸蛋白酶抑制剂、羧甲基纤维素钠、L-精氨酸、PEG 6000、硫代硫酸钠中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述两性离子缓冲液选用Tris缓冲液、MOPS缓冲液、CBS缓冲液、Bis-Tris缓冲液、PB缓冲液的一种或多种；所述PB缓冲液用于质控带包被。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述增强剂为羧甲基纤维素钠和丝氨酸蛋白酶抑制剂；所述羧甲基纤维素钠加入浓度为10g/L～30g/L；所述丝氨酸蛋白酶抑制剂加入浓度为0.005mg/mL～0.05mg/mL。
6.根据权利要求1或5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述增强剂为L-精氨
7.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述显色增强剂为硫代硫酸钠；所述硫代硫酸钠加入浓度：1g/L～5g/L。
8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述样本缓冲液包含：5g/L～12g/L的Tris，6g/L～9g/L的NaCl，0.5g/L～1.2g/L的EDTA，2g/L～8g/L的Tween 20，4g/L～10g/L的BSA，5g/L～20g/L的山羊血清，10g/L～30g/L的羧甲基纤维素钠，0.005mg/mL～0.05mg/mL的丝氨酸蛋白酶抑制剂，0.5g/L～2g/L的Proclin 300；
9.权利要求1～8任一项所述的一种抗核抗体谱联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
10.权利要求1～8任一项所述的一种抗核抗体谱联合检测试剂盒的检测方法，其特征在于，采用邦器全自动免疫印迹仪进行检测。
...【技术特征摘要】
1.一种抗核抗体谱联合检测试剂盒，其特征在于，包括检测膜条、酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、底物液以及用于检测膜条包被的包被液；
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述样本缓冲液、清洗缓冲液、酶结合液、底物液中所使用的缓冲液选用tris缓冲液、mes缓冲液中的至少一种；
3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述增强剂为丝氨酸蛋白酶抑制剂、羧甲基纤维素钠、l-精氨酸、peg 6000、硫代硫酸钠中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述两性离子缓冲液选用tris缓冲液、mops缓冲液、cbs缓冲液、bis-tris缓冲液、pb缓冲液的一种或多种；所述pb缓冲液用于质控带包被。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述增强剂为羧甲基纤维素钠和丝氨酸蛋白酶抑制剂；所述羧甲基纤维素钠加入浓度为10g/l～30g/l；所述丝氨酸蛋白酶抑制剂加入浓度为0.005mg/ml～0.05mg/ml。
6.根据权利要求1或5所述的检测试剂盒，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶瑞，谢红梅，何春燕，李松，彭春燕，
申请(专利权)人：苏州邦器生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。