一种抗PD-L1单域抗体及其衍生蛋白制造技术

本公开提供一种抗人PD

【技术实现步骤摘要】
一种抗PD
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L1单域抗体及其衍生蛋白
[0001]优先权信息
[0002]本申请请求2021年05月14日向中国国家知识产权局提交的、专利申请号为202110529312.1的专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入此处。


[0003]本专利技术属于抗体工程领域，具体涉及一种用于诊断或治疗肿瘤的治疗性单域抗体，特别是涉及靶向人程序性死亡配体1(PD
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L1)的单域抗体、其衍生蛋白及其用于制备药物的用途，特别是在治疗和/或预防、或诊断PD
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L1相关疾病例如肿瘤中的用途。

技术介绍

[0004]PD
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1及其配体PD
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L1是肿瘤免疫的重要靶点。PD
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1、PD
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L1是一对免疫抑制分子，是免疫系统防止自身免疫过激的重要组成部分，其通路的激活具有抑制肿瘤免疫应答、诱导肿瘤特异性T细胞凋亡的作用,与肿瘤发展关系密切。
[0005]PD
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L1全称是程序性死亡配体
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1，可以结合T细胞表面的受体PD
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1，发挥免疫抑制作用。PD
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L1属于抑制型免疫检查点分子，表达于黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、头颈部鳞癌等多种恶性肿瘤细胞表面。PD
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L1与T细胞表面的免疫抑制性受体PD
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1结合后，可诱导T细胞凋亡、失能、耗竭，进而抑制肿瘤抗原特异性T细胞的激活、增殖和抗肿瘤功能，实现肿瘤免疫逃逸。PD
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1/PD
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L1阻断型抗体可以解除PD
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L1的免疫抑制作用，增强体内免疫细胞T细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤，从而达到杀灭肿瘤的作用。目前，全球范围内已上市多个靶向PD
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1/PD
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L1的抗体类药物，在临床上对黑色素瘤、肺癌、肾癌、霍奇金淋巴瘤、头颈鳞癌和尿路上皮癌等多种肿瘤显示出不错的治疗效果。目前PD
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1/PD
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L1治疗性抗体虽然取得了一定的临床效果，但临床上使用有效率偏低，对于绝大多数癌种来说，如果不加选择地单独使用，有效率平均只有10％
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20％。因此需要开发更加有效的抗体类药物分子以满足临床需求。
[0006]目前对于PD
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L1抗体的研发，主要研究方向包括，(1)进一步开发亲和力更高，活性更好的抗体分子；(2)基于该靶点的双特异抗体或类似物；(3)初步研究表明PD
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L1阳性肿瘤患者对PD
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L1抑制剂的应答率远高于PD
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L1阴性肿瘤患者，因此需要有效的生物标志物来预测PD
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L1阳性肿瘤患者或提前筛选患者，以降低治疗费用和可能的严重不良反应；(4)为了提高应答率，联合用药成为肿瘤免疫治疗的发展趋势，如与其他肿瘤免疫药物的联用，与靶向药物、化疗或放疗的联用。(5)抗PD
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L1纳米抗体。其分子量是普通抗体的1/10，单域抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特特性，如分子质量小，稳定性强、可溶性好、易表达、靶向性强、人源化简单等，尤其是适合进行双/多特异治疗性抗体的开发和Car
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T/M/NK等疗法的开发。
[0007]单域抗体(single domain antibody，sdAb)是一类特殊的，只包含一条抗体重链的抗体。和传统双链抗体类似，它可以选择性的与特定抗原结合。单域抗体最早在骆驼科动物中被发现，之后在护士鲨等软骨鱼纲动物中也被发现。单域抗体单个重链抗体可变区
(VHH)是能完整结合抗原的单个功能域，只有12
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15kDa。VHH结构简单，在与抗原结合时具有高特异性、高亲和力、免疫原性低、渗透性好以及在进行肿瘤治疗时具有接触到不能被常规抗体接触的较为隐蔽靶点的能力等优点。此外，因为单域抗体只有一条链，所以不会产生双链抗体融合时的错配问题。基于这些优点，利用单域抗体作为双特异性抗体的抗原结合序列具有很大的优势，逐渐成为研发热点(Serge Muyldermans(2013)，Annu.Rev.Biochem.82:775
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797)。单可变域抗体是目前最小的抗体分子，也称为纳米抗体，最初由比利时科学家Hamers，R在骆驼血液中发现，它是工程化抗体产品中备受关注的一类。单可变域抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特的功能特性，如分子质量小，稳定性强、可溶性好、易表达、靶向性强、人源化简单等，尤其是适合进行双/多特异治疗性抗体的开发和Car
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T/M/NK等疗法的开发。目前单可变域抗体和/或基于单可变域抗体的双/多特异性抗体开发已成为研发热点。
[0008]目前抗PD
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L1抗体以完整的全抗体为主，纳米抗体的抗PD
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L1纳米抗体目前仅有一个作为孤儿药资格获批的Envafolimab(KN035)。Envafolimab(KN035)是由康宁杰瑞开发的重组人源化PD
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L1单域抗体Fc融合蛋白，也是全球首个进入临床的PD
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L1单域抗体(单域抗体)。KN035在安全性、便利性、依从性等方面和已上市的同类药物相比，具有显著的差异化优势，可切实改善病人生活品质。目前在中国、美国和日本针对多个肿瘤适应症同步开展临床试验，并在2020年1月18日被美国食品和药物管理局(FDA)授予KN035(Envafolimab)晚期胆道癌的孤儿药资格(Orphan Drug Designation，ODD)。尽管PD
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L1抑制剂在临床上被成功用于多种肿瘤的治疗，但整体的临床响应率、疗效和使用量等方面仍有待提高。

技术实现思路

[0009]本公开提供一种靶向人程序性死亡配体1(PD
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L1)的单域抗体及其衍生蛋白。以人PD
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L1重组蛋白作为免疫原，分离PBMC构建单域抗体重链可变区噬菌体表面展示抗体库，以人PD
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L1重组蛋白进行固相筛选获得可结合人PD
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L1重组蛋白的噬菌体展示驼源单域抗体VHH
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B6。制备人
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驼嵌合抗体chB6，并对其进行人源化改造获得hzB6。在hzB6的基础上进行亲和力成熟，获得了27株人源化单域抗体的变体，在此基础上进一步筛选获得对人PD
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L1亲和力高、对人PD
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L1与其受体PD
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1结合阻断活性强、体内半衰期长、动物模型中肿瘤治疗效果好的人源化单域抗体变体。在细胞实验和动物模型上证实，人源化抗人PD
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L1单域抗体能够有效阻断PD
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L1/PD
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1信号通路，能够以剂量依本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人PD
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L1抗体，其特征在于，包括至少一个单域抗体，所述单域抗体中的CDR1具有EYIGDRYCAG(SEQ ID NO:33)或GFTFDRYCAG(SEQ ID NO:34)所示的氨基酸序列；CDR2具有MIDRHGIVRYKDSVEG(SEQ ID NO:35)所示的氨基酸序列，CDR3具有X1X2X3X4TX5X6X7PCRX8X9YPDMDY，其中X1选自E、D，X2选自R、E，X3选自D、S，X4选自P、R、S，X5选自N、S、A、Q、D、T，X6选自V、P，X7选自T、I、L、A、Y、Q，X8选自P、A，X9选自E、T、S。2.如权利要求1所述抗体，其特征在于，所述单域抗体为驼源单域抗体、嵌合单域抗体或人源化单域抗体。3.如权利要求2所述抗体，其特征在于，其包括选自SEQ ID NO:1、4和6
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32中的任一氨基酸序列。4.如权利要求1
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3任一项所述抗体，其特征在于，所述抗人PD
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L1抗体为同源多聚体或异源多聚体，且包括至少一个所述单域抗体。5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述多聚体为二聚体、三聚体和四聚体。6.如权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述多聚体至少包括两个所述单域单体，并且所述至少包括两个所述单域单体的人PD
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L1结合域相互作用使所述多聚体能够特异性结合人PD
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L1。7.一种免疫偶联物，其特征在于，包括：(1)权利要求1
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6中任一项所述的抗人PD
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L1抗体；以及(2)偶联部分。8.如权利要求7所述的免疫偶联物，其特征在于，所述偶联部分为可检测标记物、细胞毒性分子或生物活性分子。9.如权利要求8所述的免疫偶联物，其特征在于，所述可检测标记包括化学发光标记、荧光标记、酶标记、放射性标记、量子点和纳米颗粒。任选地，所述细胞毒性分子包括白喉毒素、绿脓杆菌外毒素和蓖麻毒素。任选地，所述生物活性分子包括细胞因子、酶、化疗剂、脂质体和病毒颗粒。10.一种组合物，其包含1
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6中任一项所述的抗人PD
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L1抗体或权...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾大地，刘大涛，王荣娟，焦莎莎，张畅，张姣，王双，
申请(专利权)人：迈威上海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：