一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒，应用于人全血样本中环孢霉素A、他克莫司、依维莫司、雷帕霉素等多种免疫抑制剂药物的释放，便于后续的LC

【技术实现步骤摘要】
一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及微量化合物检测
，具体为一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]免疫抑制剂药物是一类通过抑制细胞及体液免疫反应，从而使组织损伤得以减轻的生物或化学物质，目前，广泛应用于器官移植抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗。
[0003]现有技术的不足：
[0004]目前，市面上各种基于化学发光法的免疫抑制剂药物检测试剂盒，多是直接检测人全血中的免疫抑制剂药物含量，但受限于方法学的灵敏度和特异性，致使检测结果不能精确地反映人全血中的免疫抑制剂药物含量，不能为临床诊断提供更加有效的信息。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒及其使用方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒，本预处理试剂盒应用于人全血样本中环孢霉素A、他克莫司、依维莫司、雷帕霉素等多种免疫抑制剂药物的释放，便于后续的LC
‑
MS/MS的检测，本试剂盒包括有A液和C液，其中：
[0007]A液中包括有用于破碎全血样本中的红细胞，释放目标化合物，同时重金属盐能使蛋白质变性的硫酸锌；
[0008]C液中包括有用于上清液复溶，减少溶剂效应的甲醇。
[0009]本专利技术还公开了一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒的使用方法，本方法包括以下步骤：S1、一次振荡混匀；S2、离心处理；S3、加入C液；S4、二次振荡，其中：
[0010]S1、一次振荡混匀：量取定量的免疫抑制剂标线1～8、质控和内标储备液，精密吸取全血样品或标线或质控40
‑
45μL到1.5mL离心管中，加入180
‑
220μL A液和380
‑
420μL内标工作液，室温振荡5分钟，转速为1000
‑
1100rpm；
[0011]S2、离心处理：将步骤S1中振荡后的混合物放置到离心设备中进行离心，其中：离心温度为4℃
‑
7℃，转速为1000
‑
1400rpm；
[0012]S3、加入C液：吸取步骤S2中离心后混合液的上清液90
‑
120μL于96孔板，加入100
‑
110μL C液；
[0013]S4、二次振荡：将步骤S3中加入C液的混合液振荡5分钟转速为1000
‑
1100rpm。
[0014]作为本专利技术的进一步改进，本方法步骤S1中量取的免疫抑制剂标线1～8、质控和内标储备液需先进行恢复至室温，振荡混匀处理。
[0015]作为本专利技术的进一步改进，本方法步骤S1中的内标工作液由内标储存液经用甲醇
稀释制得。
[0016]作为本专利技术的进一步改进，本方法步骤S1中加入180
‑
220μL A液和380
‑
420μL内标工作液后先经过手动摇匀，超声波震动处理30秒，再进行振荡处理。
[0017]作为本专利技术的进一步改进，本方法步骤S1和S4中振荡处理均采用旋涡振荡器旋涡振荡。
[0018]作为本专利技术的进一步改进，本方法S4中振荡完成后上机采用LC
‑
MS方法进行检测。
[0019]作为本专利技术的进一步改进，所述A液和C液均采用不透光的玻璃瓶进行封装。
[0020]作为本专利技术的进一步改进，所述标准曲线C1～C8为环孢霉素A线性范围为：10～1000ng/mL，依维莫司线性范围为：2～200ng/mL，他克莫司线性范围为：2～200ng/mL，西罗莫司线性范围为：2～200ng/mL；
[0021]所述质控品LQC、MQC、HQC为环孢霉素A的浓度为：20、400、800ng/mL，依维莫司的浓度为：4、80、160ng/mL，他克莫司的浓度为：4、80、160ng/mL，西罗莫司的浓度为：4、80、160ng/mL；
[0022]所述内标工作液浓度为环孢霉素A内标浓度为：200ng/mL，依维莫司内标浓度为：20ng/mL，他克莫司内标浓度为：20ng/mL，西罗莫司内标浓度为：20ng/mL。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0024]1、本专利技术中A液中包括有用于破碎全血样本中的红细胞，释放目标化合物，同时重金属盐能使蛋白质变性的硫酸锌，能破碎全血样本中的红细胞，释放目标化合物，同时重金属盐能使蛋白质变性，该试剂能够比较安全有效地使蛋白质析出沉淀，相比固相萃取法处理全血更简便；
[0025]2、本专利技术中C液中包括有用于上清液复溶，减少溶剂效应的甲醇，快速简单，去除以往繁琐的前处理步骤，缩短检测时间，有效提高检测通量，使用耗材少，成本低，具有特异性好，灵敏度高，检测限更低的显著优势，具有更广阔的应用前景。
附图说明
[0026]图1为本专利技术一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒及其使用方法的流程图。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例1
[0029]请参阅图1，本专利技术提供如下技术方案：一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒，本预处理试剂盒应用于人全血样本中环孢霉素A、他克莫司、依维莫司、雷帕霉素等多种免疫抑制剂药物的释放，便于后续的LC
‑
MS/MS的检测，本方法试剂盒包括有A液和C液，其中：
[0030]A液中包括有用于破碎全血样本中的红细胞，释放目标化合物，同时重金属盐能使
蛋白质变性的硫酸锌；
[0031]C液中包括有用于上清液复溶，减少溶剂效应的甲醇；
[0032]A液和C液均采用不透光的玻璃瓶进行封装。
[0033]本专利技术还提供了一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒的使用方法，本方法包括以下步骤：
[0034]S1、一次振荡混匀，
[0035]量取定量的免疫抑制剂标线1～8、质控和内标储备液，先进行恢复至室温，振荡混匀处理，使用甲醇稀释内标储存液得到内标工作液；
[0036]其中，标准曲线C1～C8为环孢霉素A线性范围为：10～1000ng/mL，依维莫司线性范围为：2～200ng/mL，他克莫司线性范围为：2～200ng/mL，西罗莫司线性范围为：2～200ng/mL；
[0037]质控品LQC、MQC、HQC为环孢霉素A的浓度为：20、400、800ng/mL，依维莫司的浓度为：4、80、160ng/mL，他本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒，本预处理试剂盒应用于人全血样本中环孢霉素A、他克莫司、依维莫司、雷帕霉素等多种免疫抑制剂药物的释放，便于后续的LC
‑
MS/MS的检测，其特征在于：本试剂盒包括有A液和C液，其中：A液中包括有用于破碎全血样本中的红细胞，释放目标化合物，同时重金属盐能使蛋白质变性的硫酸锌；C液中包括有用于上清液复溶，减少溶剂效应的甲醇。2.根据权利要求1所述的检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒的使用方法，其特征在于：本方法包括以下步骤：S1、一次振荡混匀；S2、离心处理；S3、加入C液；S4、二次振荡，其中：S1、一次振荡混匀：量取定量的免疫抑制剂标线1～8、质控和内标储备液，精密吸取全血样品或标线或质控40
‑
45μL到1.5mL离心管中，加入180
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220μL A液和380
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420μL内标工作液，室温振荡5分钟，转速为1000
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1100rpm；S2、离心处理：将步骤S1中振荡后的混合物放置到离心设备中进行离心，其中：离心温度为4℃
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7℃，转速为1000
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1400rpm；S3、加入C液：吸取步骤S2中离心后混合液的上清液90
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120μL于96孔板，加入100
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110μL C液；S4、二次振荡：将步骤S3中加入C液的混合液振荡5分钟转速为1000
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1100rpm。3.根据权利要求2所述的检测人全血中多种免疫抑制剂药物的预处理试剂盒的使用方法，其特征在于：本方法步骤S1中量取的免疫抑制剂标线1～8、质控和内标储备液需先进行恢复至室温，...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙纯朴，薛良，马嘉欣，
申请(专利权)人：江苏格诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：