增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的方法及用途技术

本发明专利技术公开增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的方法及用途。该方法包括使T淋巴细胞在物理电刺激条件下进行培养的步骤，其中，T淋巴细胞包括初始T细胞或修饰的T淋巴细胞。本发明专利技术的方法不涉及复杂、筛选流程长的传统基因编辑手段，能够快速有效增强T淋巴细胞抗肿瘤功能，可用于促进CAR

【技术实现步骤摘要】
增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的方法及用途


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地涉及利用物理电刺激来增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的方法及由此得到的T淋巴细胞及应用。

技术介绍

[0002]随着传染病死亡率的大幅下降，癌症已成为威胁人类健康的第二大死因。并且，癌症的发病率呈逐年上升和年轻化趋势。肿瘤的常规治疗方法包括手术、放疗、化疗、介入等。虽然这些方法对于减轻肿瘤负荷见效快，但是存在治疗不彻底，对机体毒副作用较大等弊端。随着生物技术研究的进展，肿瘤免疫疗法在肿瘤治疗中取得重大突破。肿瘤免疫治疗包含免疫检查点抑制剂、过继性细胞疗法以及肿瘤疫苗等。嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor， CAR)
‑
T细胞疗法是目前最受关注的过继性细胞治疗，在治疗血液系统肿瘤方面表现出巨大潜力，尤其在治疗复发或难治性急、慢性白血病上已取得突破性进展。
[0003]CAR
‑
T细胞疗法的一般流程是：首先从肿瘤患者体内分离获得T淋巴细胞，人工合成CAR，之后利用病毒载体将设计好的CAR转入T淋巴细胞中，并进行体外筛选与扩增，最后回输到患者体内，通过CAR
‑
T细胞表面表达的抗体特异性识别肿瘤细胞，并同时激活下游信号通路，从而实现CAR
‑
T细胞活化增殖以及对肿瘤细胞特异性杀伤的作用。相较于传统T细胞过继疗法，CAR
‑
T细胞不需要MHC分子参与，能够直接对肿瘤细胞发挥杀伤作用。
[0004]尽管CAR
‑
T细胞疗法对于血液系统肿瘤治疗效果显著，但是CAR
‑
T细胞进入受体患者后存在存活时间短、杀伤功能差、肿瘤微环境中浸润不足等问题，使其疗效受限。因此，维持CAR
‑
T细胞的体内存活、优化CAR
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T结构、改善肿瘤微环境状态是提高T细胞靶向肿瘤的精确性、增强抗肿瘤效果的关键。随着研究的深入，修饰细胞因子、细胞因子受体、趋化因子、趋化因子受体和嵌合激活受体等免疫调节分子的CAR
‑
T逐渐开发出来，从而增强T淋巴细胞的持久性和杀伤性。通过基因编辑的方式来改造T淋巴细胞存在耗时长、效率低等缺点，基因片段随机性插入还会涉及生物安全性问题。改善肿瘤微环境的策略受到肿瘤患者个体差异的影响，不具有普遍意义。
[0005]
技术介绍
中的信息仅仅在于说明本专利技术的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0006]为解决现有技术中的技术问题，尤其是现有利用基因编辑手段增强CAR
‑
T细胞疗法耗时长、效率低、筛选流程较长的技术问题，本专利技术提供一种增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的方法。具体地，本专利技术包括以下内容。
[0007]本专利技术的第一方面，提供一种增强T淋巴细胞功能的方法，其包括使T淋巴细胞在物理电刺激条件下进行培养的步骤。
[0008]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其中，所述物理电刺激通过带电基质、导电基质、直流电、交流电、脉冲电、磁电或铁电活性材料产生。此
时，本专利技术的方法也可称作基于材料电学特征增强T淋巴细胞功能的方法。优选地，所述铁电活性材料的压电常数为1
‑
40 pC/N。
[0009]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其中，所述铁电活性材料包括有机铁电聚合物，其包括聚酯类、聚偏氟乙烯、聚偏氟
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三氟乙烯、聚偏氟乙烯
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六氟丙烯、聚偏氟乙烯
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四氟乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯和聚二甲基硅氧烷中的至少一种或其组合。
[0010]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其中，所述铁电活性材料包括无机铁电颗粒，其包括钛酸钡、钛酸锶钡、铌酸锂、铌酸钾钠和羟基磷灰石中的至少一种或其组合。
[0011]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其中，所述无机铁电颗粒表面包覆多巴胺层。
[0012]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其中，进一步包括对T淋巴细胞进行活化和扩增的步骤。
[0013]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其中，增强T淋巴细胞功能包括选自下述至少之一：a. 存活时间更长；b. 增殖性增强；c. 抗肿瘤活性提高；d. CD25和/或DCFDA表达升高。
[0014]本专利技术的第二方面，提供一种功能增强的T淋巴细胞，其通过第一方面所述的方法制备得到。
[0015]在某些实施方案中，根据本专利技术所述的功能增强的T淋巴细胞，其中，所述T淋巴细胞包括效应T细胞、细胞毒性T细胞、初始T细胞及修饰的T淋巴细胞，其中所述修饰的T淋巴细胞包括CAR
‑
T。
[0016]本专利技术的第三方面，提供一种药物组合物，其包括第二方面所述的功能增强的T淋巴细胞。
[0017]本专利技术的方法不涉及复杂、筛选流程长的传统基因编辑手段，能够快速有效增强T淋巴细胞抗肿瘤功能。因此，本专利技术可用于促进CAR
‑
T细胞疗法。
附图说明
[0018]图1示例性地示出了增强T淋巴细胞抗肿瘤功能的实验过程。
[0019]图2为铁电纳米复合膜材料压电常数d
33
。
[0020]图3为实施例1和比较例的铁电纳米复合膜材料与T淋巴细胞在肿瘤体积中的结果。
[0021]图4为流式细胞术检测OT
‑
1小鼠CD8
+ T淋巴细胞表面标志的表达水平结果。其中MFI表示平均荧光强度，DCFDA表示细胞活性氧探针。
[0022]图5为不同带电量的铁电纳米复合膜材料对T细胞体外杀伤能力检测结果。
具体实施方式
[0023]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0024]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0025]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则%为基于重量的百分数。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种增强T淋巴细胞功能的方法，其特征在于，包括使T淋巴细胞在物理电刺激条件下进行培养的步骤。2. 根据权利要求1所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其特征在于，物理电刺激通过带电基质、导电基质、直流电、交流电、脉冲电、磁电或铁电活性材料产生，且所述铁电活性材料的压电常数为1
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40 pC/N。3.根据权利要求2所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其特征在于，所述铁电活性材料包括有机铁电聚合物，其包括聚酯类、聚偏氟乙烯、聚偏氟
‑
三氟乙烯、聚偏氟乙烯
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六氟丙烯、聚偏氟乙烯
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四氟乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯和聚二甲基硅氧烷中的至少一种或其组合。4.根据权利要求2或3所述的增强T淋巴细胞功能的方法，其特征在于，所述铁电活性材料包括无机铁电颗粒，其包括钛酸钡、钛酸锶钡、铌酸锂、铌酸钾钠和羟基磷灰石...

【专利技术属性】
技术研发人员：张学慧，邓旭亮，吕丹，宋佳，
申请(专利权)人：北京大学口腔医学院，
类型：发明
国别省市：