一种解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌检测的试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于分子生物学检测领域，具体涉及一种解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌检测的试剂盒及方法。本发明专利技术对引物和探针序列进行了设计，得到了新的引物对，并提供了包含该引物对的试剂盒。将这些试剂或试剂盒用于PCR检测的方法包括如下步骤：将待检测样品在上述引物对的作用下，进行PCR扩增后，检测。本发明专利技术还对退火条件和引物添加量等检测条件进行了优化。本发明专利技术的方法具有优异的特异性、灵敏度和精密度。在解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌的临床检测中具有良好的应用前景。检测中具有良好的应用前景。检测中具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌检测的试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于分子生物学检测领域，具体涉及一种解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌检测的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]近年来，性传播疾病的发病率逐年升高，根据世界卫生组织的数据，每年全球估计有5亿人患有梅毒、淋病、衣原体感染或滴虫病。性传播疾病对个人、社区和国家的公共健康产生不利影响。在性病感染的非病毒原因中，解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)、淋球菌(NG)是引起性传播疾病的常见致病菌。这些致病菌导致多种临床综合征，如尿道炎、宫颈炎、前列腺炎和阴道炎，可能导致严重并发症和长期后遗症，包括盆腔炎、不孕症、慢性骨盆疼痛、异位妊娠、成人神经和心血管疾病、早产、新生儿死亡、婴儿严重残疾或失明。
[0003]目前沙眼衣原体、解脲支原体和淋球菌的实验室检测方法主要有分离培养法、免疫学方法、基于核酸检测的分子生物方法等。培养法的特异性和敏感性高，但其具有临床检测时间过长(至少需要24h～48h，甚至更长时间)，过程繁琐，需要使用特殊的培养介质以及易受杂菌影响等缺陷，不适用于大范围检测。免疫学方法简便快捷，但特异性差、灵敏度不高。
[0004]针对传统分离培养的耗时繁琐的操作，近年来，聚核酶链式反应(PCR)法渐渐显现了其在检测上的优势。荧光PCR技术是基于传统PCR技术并结合光谱技术而发展起来的一种更灵敏、更特异、更精确的核酸检测技术，其检测结果准确，重复性高，能动态反应病原体变化及与临床的关系，且整个过程中避免了传统PCR需后处理的问题，减少了污染。
[0005]目前已有一些基于实时荧光定量PCR技术检测沙眼衣原体、解脲支原体或淋球菌DNA的试剂盒产品已面向市场，但普遍存在特异性差、灵敏度低的问题，并且大部分是针对沙眼衣原体、解脲支原体或淋球菌单一的检测试剂盒，对于多种病原体微生物混合的检测效果尤其差，并且处理过程繁琐。但是，由于性病的混合感染即同时感染两种或两种以上的性病的患者的比例较高，建立同时检测上述病原体的方法能提高临床诊断效率，具有非常重要的意义。
[0006]针对多种性病病原菌的混合感染，已有文献报道基于PCR扩增，再进行不同产物长度的电泳来区别各个不同的性病病原菌，但是由于经过PCR扩增后还要进行电泳，这个过程不仅耗时长还增加了因开盖操作带来的实验室污染的风险。
[0007]中国专利技术专利申请“CN202010329650.6淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体的三联检引物组、产品及应用”公开了一种三联检测引物组，该引物组能够用于淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体三种病原体的同时检测。然而，该专利申请中提供的引物对淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体的特异性不足，例如，其沙眼衣原体引物可以扩增肺炎衣原体基因组，导致检测结果的准确性不足。

技术实现思路

[0008]针对现有技术的缺陷，本专利技术提供一种解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌检测的试剂盒及方法，目的在于：对解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌检测的引物进行改进，提高其特异性，从而增加检测的准确性。
[0009]一种检测试剂盒，包括用于检测解脲支原体的引物对、用于检测沙眼衣原体的引物对和用于检测淋球菌的引物对中的至少一种；所述引物对包括正向引物和反向引物；
[0010]所述用于检测解脲支原体的引物对是如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4所述的核苷酸序列或者与前述序列具有95％同源性的核苷酸序列；
[0011]所述用于检测沙眼衣原体的引物对是如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5所述的核苷酸序列或者与前述序列具有95％同源性的核苷酸序列；
[0012]所述用于检测淋球菌的引物对是如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所述的核苷酸序列或者与前述序列具有95％同源性的核苷酸序列。
[0013]优选的，所述用于检测解脲支原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1
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3:1
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3；
[0014]和/或，所述用于检测沙眼衣原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1
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3:1
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3；
[0015]和/或，所述用于检测淋球菌的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1
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3；
[0016]和/或，所述用于检测解脲支原体的正向引物、用于检测沙眼衣原体的正向引物、用于检测淋球菌的正向引物的用量摩尔比为1
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3:1
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3。
[0017]优选的，所述用于检测解脲支原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1:1；
[0018]和/或，所述用于检测沙眼衣原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1:1；
[0019]和/或，所述用于检测淋球菌的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1:1；
[0020]和/或，所述用于检测解脲支原体的正向引物、用于检测沙眼衣原体的正向引物、用于检测淋球菌的正向引物的用量摩尔比为1:1:1。
[0021]优选的，所述试剂盒还包括探针组，所述探针组包括用于检测解脲支原体的探针、用于检测沙眼衣原体的、用于检测淋球菌的探针中的至少一种；
[0022]所述用于检测解脲支原体的探针具有如SEQ ID NO.7所述的核苷酸序列，或与前述核苷酸序列具有至少95％同源性的核苷酸序列；
[0023]所述用于检测沙眼衣原体的探针具有如SEQ ID NO.8所述的核苷酸序列，或与前述核苷酸序列具有至少95％同源性的核苷酸序列；
[0024]所述用于检测淋球菌的探针具有如SEQ ID NO.9所述的核苷酸序列，或与前述核苷酸序列具有至少95％同源性的核苷酸序列。
[0025]优选的，所述探针组中的探针均独立地含有互不相同的荧光报告基团和荧光猝灭基团。
[0026]优选的，所述荧光猝灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3或Dabcyl；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、CY5、VIC、TET或TAMRA。
[0027]优选的，所述用于检测解脲支原体的正向引物、反向引物和探针的用量摩尔比为1
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3:1
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4；
[0028]和/或，所述用于检测沙眼衣原体的正向引物、反向引物和探针的用量摩尔比为1
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3:1
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4；
[0029]和/或，所述用于检测淋球菌的正向引物、反向引物和探针的用量摩尔比为1
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4；
[0030]和/或，所述用于检测解脲支原体的探针、用于检测沙眼衣原体的探针、用于检测淋球菌的探针的用量摩尔比为1
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3:1
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4。
[0031]优选的，所述用于检测解脲支原体的正向引物、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测试剂盒，其特征在于：包括用于检测解脲支原体的引物对、用于检测沙眼衣原体的引物对和用于检测淋球菌的引物对中的至少一种；所述引物对包括正向引物和反向引物；所述用于检测解脲支原体的引物对是如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4所述的核苷酸序列或者与前述序列具有95％同源性的核苷酸序列；所述用于检测沙眼衣原体的引物对是如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5所述的核苷酸序列或者与前述序列具有95％同源性的核苷酸序列；所述用于检测淋球菌的引物对是如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所述的核苷酸序列或者与前述序列具有95％同源性的核苷酸序列。2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述用于检测解脲支原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1
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3；和/或，所述用于检测沙眼衣原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1
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3；和/或，所述用于检测淋球菌的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1
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3；和/或，所述用于检测解脲支原体的正向引物、用于检测沙眼衣原体的正向引物、用于检测淋球菌的正向引物的用量摩尔比为1
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3。3.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述用于检测解脲支原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1:1；和/或，所述用于检测沙眼衣原体的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1:1；和/或，所述用于检测淋球菌的正向引物和反向引物的用量摩尔比为1:1；和/或，所述用于检测解脲支原体的正向引物、用于检测沙眼衣原体的正向引物、用于检测淋球菌的正向引物的用量摩尔比为1:1:1。4.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括探针组，所述探针组包括用于检测解脲支原体的探针、用于检测沙眼衣原体的、用于检测淋球菌的探针中的至少一种；所述用于检测解脲支原体的探针具有如SEQ ID NO.7所述的核苷酸序列，或与前述核苷酸序列具有至少95％同源性的核苷酸序列；所述用于检测沙眼衣原体的探针具有如SEQ ID NO.8所述的核苷酸序列，或与前述核苷酸序列具...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘靳波，张章，张丽梅，李宝林，
申请(专利权)人：西南医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：