E.coli残留DNA检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及G01N33/68领域，具体为E.coli残留DNA检测试剂盒及其使用方法。本发明专利技术试剂盒至少包括E.coli DNA定量参考品、E.coliPrimer

【技术实现步骤摘要】
E.coli残留DNA检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及G01N33/68领域，具体为E.coli残留DNA检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]生物制品可用于预防和治疗疾病，关系到患者和健康人的用药安全，所以产品质量必须得到保障。生物制品中宿主细胞残留DNA具有潜在致瘤和传染风险，所以各国药品监管部门对DNA杂质的限量要求非常严格。
[0003]qPCR反应目前在生物
应用十分广泛：不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于临床上疾病的诊断、药物疗效考核、肿瘤基因检测等，qPCR技术可以用于任何DNA、RNA相关的检测。
[0004]qPCR的标准的反应体系包括：标准品、引物探针、预混液、DNA稀释液、反应体系，以上所述为qPCR反应包括的五大要素。目前，市面上售卖的试剂盒在实际操作时，需要操作者在上机检测前进行PCR反应液的配置，该过程繁琐，且操作者很难保证不同批配置的反应液是完全一样的，因此，某些项目若是用于比较进行工艺开发需要比较样本的前后差异，如E.coli DNA残留量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.E.coli残留DNA检测试剂盒，其特征在于，至少包括E.coli DNA定量参考品、E.coliPrimer&Probe MIX、qPCR Reaction Buffer、DNA稀释液。2.根据权利要求1所述的E.coli残留DNA检测试剂盒，其特征在于，所述E.coliPrimer&Probe MIX至少包括ECDNA
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F4、ECDNA
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R3、ECDNA
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probe
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F4。3.一种采用权利要求1或2所述的试剂盒检测E.coli残留DNA的方法，其特征在于，包括：试剂前处理、qPCR反应液处理、qPCR程序参数设置、qPCR结果分析。4.根据权利要求3所述的试剂盒检测E.coli残留DNA的方法，其特征在于，所述试剂前处理具体包括以下步骤：S1、将E.coli DNA定量参考品、DNA稀释液放在冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，瞬时离心；S2、取6支干净的1.5ml离心管，分别标记为STD0，STD1，STD2，STD3，STD4，STD5；S3、在STD0管中用DNA稀释液将E.coli DNA定量参考品稀释10倍，得到STD0，振荡混匀后短时间快速离心10s；S4、在STD1，STD2，STD3，STD4，STD5管中分别加入10μL STD0，STD1，STD2，STD3，STD4和90μLDNA稀释液。5.根据权利要求3所述的试剂盒检测E.coli残留DNA的方法，其特征在于，所述qPCR反应液处理具体包括以下步骤：S1、根据所要检测的标准曲线及待测样本数量，计算所需反应孔数；S2、根据反应孔数计算测试所需的qPCR MIX总量；S3、将E.coliPrimer&Probe MIX、qPCR Reaction Buffer取出后放在冰上融化，轻微振荡混匀，按照体积比配制qPCR MIX；S4、进行各反应孔加样，加样完成后每孔总体积为20μL，将孔板轻微振荡混匀，短时间快速离心10s后放入qPCR仪。6.根据权利要求5所述的试剂盒检测E.coli残留DNA的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽美，李查，张天扬，张煜晗，郑孟韬，蔡宇卿，
申请(专利权)人：江苏谱新生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：