一种基于CRISPR/Cas12a-LAMP快速检测青枯菌的方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR/Cas12a

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas12a
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LAMP快速检测青枯菌的方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及病原微生物检测领域，特别是涉及一种基于CRISPR/Cas12a
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LAMP快速检测青枯菌的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]植物细菌性青枯病(Bacterial wilt of plants)，是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum，简称青枯菌)引起的一种世界性重大病害。作为一种生物分类学复杂的复合菌种，青枯菌寄主范围广泛，可侵染54个科的450余种植。其中经济上重要的寄主包括马铃薯、西红柿、辣椒、茄子、烟草、生姜、桑树和香蕉等。
[0003]目前最为常用的青枯菌检测方法是平板划线分离技术，该方法简单廉价，但费时费力，且操作人员需具备准确识别青枯菌菌落形态的能力。血清学检测技术是基于抗原与抗体的专一性识别与结合，它利用抗体与抗原产生的凝集反应、沉淀反应等对靶标病原菌作出快速有效的诊断与鉴定。已报道用于青枯菌检测的血清学方法，包括酶联免疫吸附(ELISA)、免疫萤光(IF)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种青枯菌的LAMP检测引物组，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1所示的上游外引物F3、如SEQ ID NO.2所示的下游外引物B3、如SEQ ID NO.3所示的上游内引物FIP和如SEQ ID NO.4所示的下游内引物BIP。2.一种基于CRISPR/Cas12a
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LAMP快速检测青枯菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的LAMP检测引物组、如SEQ ID NO.7所示的crRNA、Lba Cas12a和修饰荧光基团和淬灭基团的如SEQ ID NO.8所示的ssDNA探针。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团和淬灭基团为FAM和BHQ基团。4.一种非疾病诊断目的的基于CRISPR/Cas12a
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LAMP快速检测青枯菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样品中的基因组DNA；(2)以所述基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的LAMP检测引物组进行LAMP扩增；(3)将步骤(2)得到的扩增产物在CRISPR/Cas12a反应体系中反应后，进行荧光检测，出现荧光信号，即为含有所述青枯菌；所述CRISPR/Cas12a反应体系包括如SEQ ID NO.7所示的crRNA、LbaCas12a和修饰荧光基团和淬灭基团的如SEQ ID NO.8所示的ssDNA探针。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅余霞，范智玉，梁运祥，陈振民，李英俊，刘洋洋，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：