N-Boc-哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法技术

本发明专利技术公开了N

【技术实现步骤摘要】
N
‑
Boc
‑
哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，特别是涉及N
‑
Boc
‑
哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法。

技术介绍

[0002]伏硫西汀为抗抑郁药，作用机制尚不完全明确，但被认为与抑制5
‑
羟色胺(5
‑
HT)再摄取导致的血清素活性增强有关。伏硫西汀还具有其他一些活性，包括5
‑
HT3受体拮抗作用和5
‑
HT
1A
受体激动作用，这些活性在伏硫西汀发挥抗抑郁效应中的作用尚未确定。伏硫西汀结构式如下所示：
[0003][0004]作为合成伏硫西汀的起始物料N
‑
Boc
‑
哌嗪，结构式如下所示：
[0005][0006]作为合成N
‑
Boc
‑
哌嗪的起始物料哌嗪，结构如式所示：
[0007][0008]N
‑
Boc
‑
哌嗪为合成伏硫西汀的起始物料，有必要对其有关物质及其杂质传递进行研究。哌嗪为合成N
‑
Boc
‑
哌嗪的起始物料，反应不完全可能会残留到N
‑
Boc
‑
哌嗪中，因此需进行研究。
[0009]通过相关文献及专利调研发现：哌嗪几乎无紫外吸收，且极性较大，无法用常规的反相高效液相色谱法检测，多数报道采用离子色谱法、气相色谱法、拉曼光谱法或衍生化等方法检测哌嗪或其结构类似物的含量。通过分析方法考察试验发现：文献及相关专利报道的离子色谱法、气相色谱法及衍生化等方法并不适用于测定N
‑
Boc
‑
哌嗪中哌嗪的含量，相关方法存在专属性差、重现性差、准确度低、可操作性及系统适用性差的问题。
[0010]黄川徽等在《南京工业大学学报》2005年3月发表论文《紫外分光光度法快速测定哌嗪》中指出，哌嗪紫外吸收弱，最强峰对应波长处吸光度线性范围窄，对不同浓度下浓度
‑
吸光度数据进行最小二乘线性拟合，计算线性相关系数，结果在最强峰对应波长(228.5nm)处，虽然灵敏度大，但线性很差(线性相关系数仅为0.7328)，而在244～275nm波长范围内，线性有改善，但灵敏度低；公开专利申请“一种哌嗪水溶液定量检测的方法”(申请号：CN201911365151.6)提供了采用对苯醌作为显色剂，与哌嗪分子发生氧化还原反应从而检测哌嗪含量的方法。然而，该方法准确性较低。且以上两者均采用紫外分光光度法，为非专属性方法。
[0011]而哌嗪作为N
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Boc
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哌嗪中的杂质，在药物分析工作中，需要采用专属性、灵敏度、精密度、准确度较高的检测方法，现有文献中均未有较为满意的方法公开。

技术实现思路

[0012]为了解决现有技术的以上问题，本专利技术提供了N
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Boc
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哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，具备专属性、灵敏度、线性、精密度、准确度及耐用性良好等优势。本专利技术的技术方案如下所述：
[0013]N
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Boc
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哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，检测波长为205nm，以磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B；采用紫外检测器；磷酸盐缓冲液的pH值为6.4～6.6。
[0014]本专利技术在研究试验中偶然发现，哌嗪在不同pH的磷酸盐缓冲液中，紫外吸收存在明显差异：酸性稀释剂(pH 3.5～6.0)中，在紫外区几乎无明显吸收，哌嗪供试液采用紫外分光光度法测得的紫外全波长扫描图(190～400nm)基本一致；当稀释剂pH调整至6.5附近时，λ
max
发生红移，哌嗪在205nm处的紫外吸收增强；当稀释剂pH调整至11.0时，λ
max
红移至214nm处。
[0015]哌嗪的pka为9.83，当流动相pH调整至11.0时，哌嗪在紫外区检测的灵敏度较高，但试验中发现，该pH的流动相条件下液相色谱图中的峰型较差，且在反相色谱柱中无保留，无法满足定量要求。通过将流动相pH调整为6.5，并在流动相A中增加离子对试剂辛烷磺酸钠，哌嗪在反相色谱中保留且检测灵敏度增强。
[0016]优选的，N
‑
Boc
‑
哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，流动相采用如下梯度程序洗脱：
[0017]在0～8分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持80～90:10～20不变；在8.0～8.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由80～90:10～20线性渐变至30:70；在8.1～23分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持30:70不变；在23～23.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由30:70线性渐变至80～90:10～20；在23.1～40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持80～90:10～20不变，即为色谱柱平衡时间。
[0018]优选的，流动相A中所述磷酸盐缓冲液配制方法为：取1
‑
辛烷磺酸钠2.16g，磷酸二
氢钾2.72g，加水1000ml使溶解，调pH至6.4～6.6。
[0019]进一步的，所述磷酸盐缓冲液用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至6.5。
[0020]优选的，所述色谱柱选自：Waters XBridge C18，4.6
×
100mm，5μm；或Agilent ZORBAX Extend C18，4.6
×
100mm，5μm。
[0021]优选的，柱温选自30～40℃，优选为35℃。
[0022]优选的，流动相流速选自0.8～1.2m/min，优选1.0ml/min。
[0023]优选的，溶剂采用乙腈
‑
水溶液。
[0024]优选的，流动相洗脱梯度为：
[0025]在0～8分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持85:15不变；在8.0～8.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由85:15线性渐变至30:70；在8.1～23分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持30:70不变；在23～23.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由30:70线性渐变至85:15；在23.1～40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持85:15不变，即为色谱柱平衡时间。
[0026]优选的，采用乙腈
‑
水(50∶50)作为溶剂配制对照品溶液及供试品溶液，哌嗪对照品溶液浓度为0.1mg/ml，N
‑
Boc
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哌嗪供试品溶液浓度为10mg/ml。
[0027]进一步的，所述检测方法为：
[0028](1)色谱条件为：
[0029]仪器：高效液相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.N
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Boc
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哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，采用高效液相色谱法，其特征在于，色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，检测波长为205nm，以磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B；采用紫外检测器；所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.4～6.6。2.根据权利要求1所述的N
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Boc
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哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，其特征在于，流动相采用如下梯度程序洗脱：在0～8分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持80～90:10～20不变；在8.0～8.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由80～90:10～20线性渐变至30:70；在8.1～23分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持30:70不变；在23～23.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由30:70线性渐变至80～90:10～20；在23.1～40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持80～90:10～20不变，即为色谱柱平衡时间。3.根据权利要求1所述的N
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Boc
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哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，其特征在于，流动相A中所述磷酸盐缓冲液配制方法为：取1
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辛烷磺酸钠2.16g，磷酸二氢钾2.72g，加水1000ml使溶解，调pH。4.根据权利要求1所述的N
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Boc
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哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至6.5。5.根据权利要求1所述的N
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Boc
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哌嗪中有关物质哌嗪的检测方法，其特征在于，所述色谱柱选自：Waters XBridge C18，4.6
×
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【专利技术属性】
技术研发人员：赵林，乔金凤，张振玲，郭晓，孙迎基，
申请(专利权)人：山东京卫制药有限公司，
类型：发明
国别省市：