一种量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法技术

一种量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法，包括以下步骤：（1）将木屑试管母种转接到空白的PDA加富平板培养基中心，进行培养；（2）培养基满皿后，以整块培养基为单位进行筛选；（3）在筛选出的培养基中取菌种块，转接到空白的PDA加富平板培养基中心，进行培养；（4）培养基满皿后，以整块培养基为单位进行筛选；（5）在筛选出的培养基中取菌种块，转接到摇瓶液体培养基，培养，得摇瓶种；（6）筛选，获得摇瓶原种。本发明专利技术方法能够量化、可视化地获得高质量的杏鲍菇液体摇瓶原种，通过目测就能完成筛选；不同摇瓶之间生物量的一致性大幅度提高，锁状联合数目及清晰度大幅度提高；从而获得更高高质量和高产量的食用菌。高高质量和高产量的食用菌。高高质量和高产量的食用菌。

【技术实现步骤摘要】
一种量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法


[0001]本专利技术涉及一种杏鲍菇液体摇瓶原种的生产方法，具体涉及一种可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种的生产方法。

技术介绍

[0002]目前杏鲍菇生产用的有三种形式的菌种，一种是固体菌种、一种是液体菌种、一种是固体液化的还原性菌种；经过反复证实在大规模生产上，固体菌种已经满足不了大规模的工业化生产，现在大规模工厂化生产过程中基本都是液体菌种；而液化菌种属于具有潜力的新一代技术，目前还没有获得大规模应用。
[0003]虽然目前的液体菌种发展非常快，但其工艺成熟度和操作的简便程度上还存在着严重缺陷，尤其是在摇瓶液体原种阶段，没有固定、高效、简洁、可视化的操作工艺流程，在不同三角瓶之间甚至同一个三角瓶中间都有较大差异，随机性高，造成在制作发酵罐栽培种的过程中，不同罐菌种的菌丝球大小、菌丝球密度、菌丝生物量、锁状联合的清晰度和密度有较大差异，制出来的同一批菌种质量和菌丝生物量的误差较大，严重影响到最后生产出的杏鲍菇摇瓶菌种的质量和生物量。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法，能明显提高同一批菌种的一致性。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法，包括以下步骤：（1）将木屑试管母种转接到空白的PDA加富平板培养基中心，进行培养；（2）步骤（1）的PDA加富平板培养基满皿后，以整块培养基为单位进行第一次筛选；（3）在步骤（2）筛选出的培养基中取菌种块，转接到空白的PDA加富平板培养基中心，进行培养；（4）步骤（3）的PDA加富平板培养基满皿后，以整块培养基为单位进行第二次筛选；（5）在步骤（4）筛选出的培养基中取菌种块，转接到摇瓶液体培养基，进行培养，得摇瓶种；（6）以整个摇瓶液体培养基为单位进行摇瓶种的筛选，获得摇瓶原种；步骤（3）中，所述转接的过程为：在清洁无菌的环境中，取步骤（2）筛选出的培养基，刮除培养基表面的气生菌丝，用打孔器在每个培养基上打孔取大小相同的圆柱形菌种块，每个取菌种块的位置到接种点的距离都相等；取菌种块相应个数的空白PDA加富平板培养基，在每个空白PDA加富平板培养基中心打一个孔洞，将每块菌种块转移到一个空白PDA加富平板培养基的中心孔洞中，将转接后的培养皿封好；该转接方式获得的菌种块条件一致，可以规避菌丝的旺长和不一致对菌丝生长初始速度不一致的影响，做到培养基表面菌丝和培养基内菌丝生长一致，并预防过多不必要
气生菌丝的产生（气生菌丝多的情况下，容易形成单核菌丝，最终影响的菌丝生长一致性和育菇产量）。提供了完全一致的起跑线，有利于筛选出最优秀的菌株。
[0006]步骤（5）中，所述转接的过程为：在清洁无菌的环境中，取步骤（4）筛选出的培养基，刮除培养基表面的气生菌丝，用打孔器在每个培养基上打孔取大小相同的圆柱形菌种块，每个取菌种块的位置到接种点的距离都相等，每个培养基取的菌种块个数相同；取培养基相应个数的装有摇瓶液体培养基的摇瓶，从一个培养基中取得的菌种块全部转接到同一个摇瓶中，不同培养基中取得的菌种块转接到不同摇瓶中，封摇瓶口。每个摇瓶对应的菌种块个数、菌种块大小完全一致，确保摇瓶开始的接种量一致。
[0007]这样筛选的出来的菌种，菌丝锁状联合的比率可增加20%以上，产量可增加百分之十左右；锁状联合是杏鲍菇等担子菌特有的特征，锁状联合多少直接关系到菌丝质量，与后面育菇的均匀一致性及产量都有直接关系。杏鲍菇菌种是生物，不可能像工业品一样，每一个出来都完全一致，只有优中选优才能够保证遗传稳定性和性状表现的一致性，预防菌种老化、退化及变异，不大量精准的对比筛选很难保障所用于生产上的菌种是最优的，最终影响到生产是否稳定；这个看似很普通的环节被大部分食用菌工厂化液体种企业所忽视，主要没有深刻认清菌种细胞核的异质性，及培养方式和环境对菌种退化变异影响的理论基础，所以很难在这个环节投入过多的关注和优化创新，最终影响到食用菌液体种生产技术成熟，及薄弱环节技术突破；专利技术人经过大量的定向、定量试验，终于实现了这些关键步的精准化操作。
[0008]优选地，所述PDA加富平板培养基使用的培养皿直径为70
‑
100mm，每个培养皿倒灭菌的PDA加富培养基20
‑
30ml。
[0009]优选地，倒完PDA加富培养基后，将每4
‑
6个培养皿叠放成一摞，在洁净环境中让培养皿内部的水珠和水汽挥发掉。在倒培养皿时，温差难以避免，皿盖产生的水汽容易滴落到培养皿培养基表面，如果这些培养皿培养基表面或皿盖上的水分没有彻底挥发掉，接种后可能增加杂菌污染几率，同时菌丝生长出现弱菌丝现象，在观察的时候皿盖也容易影响对菌丝的观察。为了避免水汽对培养皿内部湿度环境的影响，在倒培养皿时，尽量较少温差，减少冷凝水的产生；使培养皿培养基表面光滑、无水汽、不开裂、透明度高；避免因为培养皿中的含水汽量不一致，而影响到后续菌丝生长的一致性、健壮程度、感染率，以及对菌丝观察和对比筛选。可以采用超净工作台提供洁净环境，超净工作台的净化风也可用于促进水汽和水珠快速挥发。
[0010]优选地，摇瓶液体培养基的配方为：土豆280
‑
340g；葡萄糖20
‑
30 g；蛋白胨3.8
‑
4.4 g；磷酸二氢钾2.0
‑
3.0 g；硫酸镁1.0
‑
1.5 g；水：1000 ml。
[0011]优选地，摇瓶液体培养基的制作方法为：土豆按制作常规PDA培养基的方法在水中煮熟，取滤液；补加水到配方量，加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁，溶解均匀后分装到摇瓶中，摇瓶装液量为40~70%，把摇瓶口封好；放入高温、高压灭菌锅中，灭菌温度为123
‑
126℃，灭菌时间为30
‑
40min。
[0012]优选地，步骤（1）中，所述转接的过程为：在清洁无菌的环境中，从木屑试管母种中勾取绿豆粒大小的菌种块，放置到空白的PDA加富平板培养基的中心位置，将转接后的培养皿封好。
[0013]优选地，步骤（1），所述培养的方式为：把每8
‑
11个培养皿叠放成一摞，放到一个干
净塑料袋中，在22.5
‑
24.0℃恒温培养9
‑
12天。
[0014]优选地，步骤（3）中，所述菌种块的底面直径为5.5~6.5mm。
[0015]优选地，步骤（3）中，空白PDA加富平板培养基中心所打的孔洞直径比菌种块的底面直径大1
‑
2mm优选地，步骤（3）中，在培养基上取菌种块的位置符合以下条件：菌种块所在圆柱的上底面圆到接种点的最远距离为3.5
‑
4.5cm。
[0016]优选地，步骤（3）中，每个培养基取17
‑
18个菌种块。
[0017本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将木屑试管母种转接到空白的PDA加富平板培养基中心，进行培养；（2）步骤（1）的PDA加富平板培养基满皿后，以整块培养基为单位进行第一次筛选；（3）在步骤（2）筛选出的培养基中取菌种块，转接到空白的PDA加富平板培养基中心，进行培养；（4）步骤（3）的PDA加富平板培养基满皿后，以整块培养基为单位进行第二次筛选；（5）在步骤（4）筛选出的培养基中取菌种块，转接到摇瓶液体培养基，进行培养，得摇瓶种；（6）以整个摇瓶液体培养基为单位进行摇瓶种的筛选，获得摇瓶原种；步骤（3）中，所述转接的过程为：在清洁无菌的环境中，取步骤（2）筛选出的培养基，刮除培养基表面的气生菌丝，用打孔器在每个培养基上打孔取大小相同的圆柱形菌种块，每个取菌种块的位置到接种点的距离都相等；取菌种块相应个数的空白PDA加富平板培养基，在每个空白PDA加富平板培养基中心打一个孔洞，将每块菌种块转移到一个空白PDA加富平板培养基的中心孔洞中，将转接后的培养皿封好；步骤（5）中，所述转接的过程为：在清洁无菌的环境中，取步骤（4）筛选出的培养基，刮除培养基表面的气生菌丝，用打孔器在每个培养基上打孔取大小相同的圆柱形菌种块，每个取菌种块的位置到接种点的距离都相等，每个培养基取的菌种块个数相同；取培养基相应个数的装有摇瓶液体培养基的摇瓶，从一个培养基中取得的菌种块全部转接到同一个摇瓶中，不同培养基中取得的菌种块转接到不同摇瓶中，封摇瓶口。2. 根据权利要求1所述的量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法，其特征在于，所述PDA加富平板培养基使用的培养皿直径为70
‑
100mm，每个培养皿倒灭菌的PDA加富培养基20
‑
30ml；倒完PDA加富培养基后，将每4
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6个培养皿叠放成一摞，在洁净环境中让培养皿内部的水珠和水汽挥发掉；摇瓶液体培养基的配方为：土豆280
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340g；葡萄糖20
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30 g；蛋白胨3.8
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4.4 g；磷酸二氢钾2.0
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3.0 g；硫酸镁1.0
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1.5 g；水：1000 ml。3.根据权利要求2所述的量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法，其特征在于，摇瓶液体培养基的制作方法为：土豆按制作常规PDA培养基的方法在水中煮熟，取滤液；补加水到配方量，加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁，溶解均匀后分装到摇瓶中，摇瓶装液量为40~70%，把摇瓶口封好；放入高温、高压灭菌锅中，灭菌温度为123
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126℃，灭菌时间为30
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40min。4.根据权利要求1~3中任一项所述的量化、可视化的杏鲍菇液体摇瓶原种生产方法，其特征在于，步骤（1）...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬建军，阳国秀，沈凡超，易恢满，唐伍平，蒋路翔，谢海鹰，
申请(专利权)人：湖南果秀食品有限公司，
类型：发明
国别省市：