一种具有菌幕的食用菌孢子制种技术制造技术

本发明专利技术涉及一种具有菌幕的食用菌孢子制种技术。将具有内菌幕（蜜环菌、香菇、大球盖菇、双胞磨菇等）、外菌幕（草菇、竹荪、冬荪等）的子实体在即将开裂之时，采摘消毒放入无菌箱中，待菌幕破裂并让孢子弹射到有粘性的无菌水中、液体培养基中，或无菌滤纸上，形成孢子悬浮液，吸取（或挑取）适量的孢子接入液体三角瓶中，培养5

【技术实现步骤摘要】
一种具有菌幕的食用菌孢子制种技术


[0001]本专利技术涉及一种具有内、外菌幕的食用菌孢子制种技术，属于食用菌(包括药用菌)制种及种植领域。

技术介绍

[0002]在食用菌菌种的育种、制种和栽培中，通常采用两种方法分离菌种：一是组织分离，即使用子实体的某一部分来分离菌种的方法。属无性繁殖。优点：简便，能保持原菌株的特性。所获菌种不发生遗传重组等变异，能保持原菌株的优良特性，遗传性较稳定，变异小或后代不易发生变异。因此生产上常采用此法。缺点：无性繁殖几代或多代后，菌种活力易退化，抗性下降，产量降低。二是孢子分离，即是采取子实体上成熟的有性孢子萌发培养成纯菌丝，再进一步培养成菌种的方法。属于有性繁殖。优点：可获得生命力强、菌龄短的菌丝体，所得菌种生活力旺盛。该方法的另一个优点是分离得到的有性孢子兼有双亲的遗传特性，可用于杂交育种和选育新品种。缺点：变异率高，产量不稳定。孢子间不仅存在个体差异，还存在较普遍的自然分化现象，出现的变异较大，必须经过出菇试验后才能用于生产中。
[0003]用无性时期的料材获得的菌种在生产上易退化，用有性时期的材料获得的菌种能恢复和提高物种的活力和抗性，但后代变异率高，在产量和质量上表现出不同程度的不稳定性。怎样才能保持有性繁殖的活力和优势，在农作物育种中的一个主要的方法就是纯化培育自交系，再进行杂交育种。
[0004]我国食用菌制种工艺流程、配方和技术可分两个历程或阶段：
[0005]一是传统的固体培养基配方及阶段。即三级菌种制种均是使用固体培养基。母种(一级种，常用试管)—原种(二级种，常用菌种瓶)—栽培种(三级种，常用菌种瓶或菌种袋)。其中母种的常用培养基或配方是PDA，即马铃署200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml。原种、栽培种常用的培养基或配方是，锯木屑78％，麸皮18％，糖1％，石膏1％。含水量60％。目前我国绝大部分的菌种厂家仍是采用这种传统的制种模式和配方。
[0006]二是液体培养基配方及阶段。此阶段是在生产母种(一级种，用三角瓶)—原种(二级种，用发酵罐)—栽培种(三级种，用菌种瓶或菌种袋)。栽培种配方同上。三角瓶、发酵罐液体培养基配方之一：玉米粉5份，黄豆粉3份，麸皮1份，)酵母膏2份，葡萄糖或蔗糖20份，水1000ml。在二十世纪末期，食用菌制种业参照发酵工业的工艺成熟技术，工厂化生产厂家逐渐使用液体菌种制作栽培种。自2010年以来，已能用液体菌种直接、大规模、工厂化方式栽培金针菇、杏鲍菇、蟹味菇、黑木耳等。近三、四年，国内已有四、五个厂家用液体菌种每年生产蜜环菌种达600万袋左右。
[0007]两个阶段的效果对比。用固体培养基生产栽培种(三级种)，要用时间140天左右，用液体培养基生产栽培种，所用时间65天左右。从有性繁育的角度算起，生产工艺流程和时间是，用子实体—孢子(组织)分离试管母种15天—试管母扩繁一次15天—原种50天—栽培种30
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60天。此种方法仍是我国食用菌培育和制种的主要方法。本文称常规方法，即固体基
质培养法。本专利技术的制种方法，用液体基质培养法，生产工艺流程和时间是，用子实体—孢子分离三角瓶液体菌种培养7天—发酵罐培养7天—栽培种30
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50天。用液体基质生产菌种，正品率高，生长快，能较大幅度的节省时间和有效利用人、财、物。液体菌种的培养纯度，生长速度，生产活力要高于固体菌种。但液体菌种的生产和操作的精细度、精确度和难度要多于和高于固体菌种。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是提供一种具有内、外菌幕的食用菌制种和育种的工艺，所述工艺包括以下步骤：
[0009]一种具有内、外菌幕的食用菌制种的工艺，所述工艺包括以下步骤：
[0010]1)选取在生产中大面积推广应用的菌株作种源培养出子实体；
[0011]2)采取子实体：有内菌幕种类的食用菌，在内菌幕即将开裂的3
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5小时之前，采摘完整的子实体剪柄并消毒，放入无菌箱中；有外菌幕的食用菌的子实体，在外菌幕有开裂之痕迹时即采摘去掉根部泥土或培养基并消毒，放入无菌箱中；
[0012]3)孢子分离：在无菌箱里把菌盖放在装有粘性的无菌水或液体培养基的瓶口上，或放在无菌滤纸上，菌褶向下，弹射、收集孢子；
[0013]4)孢子稀释或三角瓶液体菌种培养：将收集到含有孢子的无菌水进行摇晃，使其形成孢子液，用吸管吸取孢子液接入三角瓶培养得到孢子悬浮液；在滤纸上的孢子用接种针挑取接入无菌水中，摇晃培养得到孢子悬浮液；如果是步骤3)将孢子弹射到液体菌种培养基上，可将三角瓶在振荡下培养，直接培养成一代母种(一级种)，备用；
[0014]5)发酵罐或原种培养：将上述步骤3)经过三角瓶培养获得的孢子悬浮液接入发酵罐中，培养，并得到液体菌种(母种，一级种)；如步骤4)中采用的是液体菌种培养基已获得一代母种(一级种)，本步骤可转扩到固体培养基制作成原种(二级种)；
[0015]6)栽培种培养：将步骤5)在发酵罐中培养好的液体菌种，接入固体培养基制作成栽培种；或步骤5)得到的原种，置于通风、避光、适温下培养；待菌丝体长满袋/瓶后，用于栽培；
[0016]完成具有内、外菌幕食用菌菌种制种。
[0017]优选地，所述步骤1)优良菌株为自交2
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3代的菌株(如M1)。
[0018]优选地，所述步骤2)采取子实体过程中，采取有内菌幕的子实体时，菌盖、菌柄表面用酒精擦试消毒，孢子被内菌膜包裹呈无菌状态；采取有外菌幕的子实体时，整个外菌幕表面用酒精擦试消毒，孢子被外菌膜包裹呈无菌状态。
[0019]优选地，所述步骤3)弹射时间在10
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20小时，温度调控在18
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32℃℃。
[0020]优选地，所述步骤3)中三角瓶液体培养基制备方法：将玉米粉5份、黄豆粉3份、麸皮1份、酵母膏2份、葡萄糖20份、水1000ml，在100℃中煮沸15min后过滤；将过滤液定量至1000ml，在120℃中灭菌40min，冷却，备用。
[0021]优选地，所述步骤4)三角瓶液体培养中培养条件为：置于22～30℃，以145
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155r/min振荡培养130
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150h时。
[0022]优选地，所述步骤5)液体发酵罐的培养基制备方法：将玉米粉5份、黄豆粉3份、淀粉1份、酵母膏2份、蔗糖20份、水1000ml，根据发酵罐的大小按比例扩大后，加入适量的消泡
剂，在121～124℃中灭菌1.5h，待温度降至25℃备用。
[0023]优选地，所述步骤5)发酵罐培养中培养条件为：22～30℃(不同种类温度略有差异)，气压0.05mpa，培养145h。
[0024]优选地，所述步骤6)每袋接5ml即可，置于18～30℃中培养。
[0025]优选地，所述内菌幕种类的食用菌为蜜环菌、香菇、大球盖菇或双胞磨菇或其他，外菌幕的食用菌为草菇、竹荪或冬荪或其他。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有菌幕的食用菌制种的工艺，其特征在于，所述工艺包括以下步骤：1）选取在生产中大面积推广应用的菌株作种源培养出子实体；2）采取子实体：有内菌幕种类的食用菌，在内菌幕即将开裂的3
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5小时之前，采摘完整的子实体剪柄并消毒，放入无菌箱中；有外菌幕的食用菌的子实体，在外菌幕有开裂之痕迹时即采摘去掉根部泥土或培养基并消毒，放入无菌箱中；3）孢子分离：在无菌箱里把菌盖放在装有粘性的无菌水或液体培养基的瓶口上，或放在无菌滤纸上，菌褶向下，弹射、收集孢子；4）孢子稀释或三角瓶液体菌种培养：将收集到含有孢子的无菌水进行摇晃，使其形成孢子液，用吸管吸取孢子液接入三角瓶培养得到孢子悬浮液；在滤纸上的孢子用接种针挑取接入无菌水中，摇晃培养得到孢子悬浮液；如果是步骤3）将孢子弹射到液体菌种培养基上，可将三角瓶在振荡下培养，直接培养成一代母种，通过试管或显微镜进行检测，合格备用；5）发酵罐或原种培养：将上述步骤3）经过三角瓶培养获得的孢子悬浮液接入发酵罐中，培养，并得到液体菌种；如步骤4）中采用的是液体菌种培养基已获得一代母种，本步骤可转扩到固体培养基制作成原种；6）栽培种培养：将步骤5）在发酵罐中培养好的液体菌种，接入固体培养基制作成栽培种；或步骤5）得到的原种，置于通风、避光、适温下培养；待菌丝体长满袋/瓶后，用于栽培；完成具有内、外菌幕食用菌菌种制种。2.根据权利要求1所述具有菌幕食用菌制种的工艺，其特征在于，所述步骤1）优良菌株为自交2
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3代的菌株。3.根据权利要求1所述的具有菌幕食用菌制种的工艺，其特征在于，所述步骤2）采取子实体过程中，采取有内菌幕的子实体时，菌盖、菌柄表面用酒精擦试消毒，孢子被内菌膜包裹呈无菌状态；采取有外菌幕的子实体时，整个...

【专利技术属性】
技术研发人员：张升明，王绍柏，赵菁，张小平，
申请(专利权)人：武汉易菇网络股份有限公司，
类型：发明
国别省市：