异氰酸甲酯的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种异氰酸甲酯的检测方法，包括以下步骤：1)样品前处理：取待测样品，加入盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀；加热降解，反应结束后冷却至室温；反应产物用甲醇水溶液定容，得到样品溶液；在固相萃取孔板内加入含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将样品溶液加入固相萃取孔板内，并混匀；在固相萃取孔板上方施加正压力，使样品溶液通过固相萃取孔板的填料以进行净化；收集固相萃取孔板下方流出的净化后的溶液，作为测试样；2)采用液相色谱串联质谱法对测试样进行检测，然后利用标准曲线计算得到待测样品中异氰酸甲酯的含量。本发明专利技术的方法可以去除内源性干扰物，基质效应小，操作简单，效率高，且具有很高的准确度及精密度。且具有很高的准确度及精密度。且具有很高的准确度及精密度。

【技术实现步骤摘要】
异氰酸甲酯的检测方法


[0001]本专利技术涉及微量化合物检测
，特别涉及一种异氰酸甲酯的检测方法。

技术介绍

[0002]二甲基甲酰胺(N,N
‑
Dimethylformamide，DMF)，为无色透明或淡黄色液体，有鱼腥味，易挥发，属于低毒溶剂，能与水混溶，可与多数有机溶剂混溶，是一种性能优使用广泛的化工原料，主要作为有机合成和人造皮革等工业原料。工作场所使用DMF主要有吸入、食入、经皮吸收进入体内。当DMF进入机体后，对多脏器有损伤，但主要靶器官为肝脏，临床发现有肝脏肿大，肝区痛，黄疸和肝功能异常，增加了肿瘤发生率。
[0003]DMF在人体中经过一系列的反应部分生成的中间产物异氰酸甲酯(MIC)，其能与血液中的血红蛋白相互作用生成活性中间产物N
‑
甲基甲酰氨蛋白加合物(MIC蛋白复合物)，这种复合物在体内能维持较长时间的稳定，可以作为接触DMF的生物标志物。所以通过检测异氰酸甲酯可以间接实现二甲基甲酰胺中毒的检测，而对于异氰酸甲酯的检测，现有的方案普遍存在灵敏度不高、特性异性较差等问题，所以现在需要提供一种更可靠的方案。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种异氰酸甲酯的检测方法。本专利技术先将MIC蛋白复合物经过埃德曼降解法降解为3
‑
甲基
‑5‑
异丙基海因(MVH)，再通过两步法使用杂质吸附性固相萃取进行样品净化，使用高灵敏度、高特异性液相色谱串联质谱(LC
‑
MS/MS)进行样品测试，从而能够实现异氰酸甲酯的高灵敏度、快速检测，可应用于二甲基甲酰胺中毒检测。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种异氰酸甲酯的检测方法，包括以下步骤：
[0006]1)样品前处理：
[0007]1‑
1)取待测样品，加入盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀；
[0008]1‑
2)加热降解，反应结束后冷却至室温；
[0009]1‑
3)反应产物用甲醇水溶液定容，得到样品溶液；
[0010]1‑
4)在固相萃取孔板内加入含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将步骤1
‑
3)得到的样品溶液加入固相萃取孔板内，并混匀；
[0011]1‑
5)在固相萃取孔板上方施加正压力，使样品溶液通过固相萃取孔板的填料以进行净化；
[0012]1‑
6)收集固相萃取孔板下方流出的净化后的溶液，作为测试样；
[0013]2)采用液相色谱串联质谱法对测试样进行检测，然后利用标准曲线计算得到待测样品中异氰酸甲酯的含量。
[0014]优选的是，所述步骤1)具体包括：
[0015]1‑
1)取待测样品置于离心管中，加入盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀1
‑
6min；
[0016]1‑
2)于70
‑
100℃下加热降解0.2
‑
1h，反应结束后冷却至室温；
[0017]1‑
3)反应产物用甲醇水溶液定容，得到样品溶液；
[0018]1‑
4)在固相萃取孔板内加入含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将步骤1
‑
3)得到的样品溶液加入固相萃取孔板内，并混匀；
[0019]1‑
5)在固相萃取孔板上方施加正压力，使样品溶液通过固相萃取孔板的填料以进行净化，控制样品溶液流速为0.5
‑
2mL/min；
[0020]1‑
6)收集固相萃取孔板下方流出的净化后的溶液，作为测试样。
[0021]优选的是，所述步骤1)具体包括：
[0022]1‑
1)取0.02
‑
0.1g待测样品置于5
‑
30ml的离心管中，加入1
‑
6mL盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀1
‑
6min；
[0023]1‑
2)于70
‑
100℃下加热降解0.2
‑
1h，反应结束后冷却至室温；
[0024]1‑
3)反应产物用甲醇水溶液定容，得到样品溶液；
[0025]1‑
4)在固相萃取孔板内加入200
‑
1000μL的含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将100
‑
400μL步骤1
‑
3)得到的样品溶液加入固相萃取孔板内，并混匀；
[0026]1‑
5)在固相萃取孔板上方施加正压力，使样品溶液通过固相萃取孔板的填料以进行净化，控制样品溶液流速为0.5
‑
2mL/min；
[0027]1‑
6)收集固相萃取孔板下方流出的净化后的溶液，作为测试样。
[0028]优选的是，所述步骤1)具体包括：
[0029]1‑
1)取0.05g待测样品置于15ml的离心管中，加入3mL盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀3min；
[0030]1‑
2)于90℃下加热降解0.5h，反应结束后冷却至室温；
[0031]1‑
3)反应产物用甲醇水溶液定容至5mL，得到样品溶液；
[0032]1‑
4)在固相萃取孔板内加入500μL的含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将200μL步骤1
‑
3)得到的样品溶液加入固相萃取孔板内，并混匀；
[0033]1‑
5)在固相萃取孔板上方施加正压力，使样品溶液通过固相萃取孔板的填料以进行净化，控制样品溶液流速为1mL/min；
[0034]1‑
6)收集固相萃取孔板下方流出的净化后的溶液，作为测试样。
[0035]优选的是，盐酸和醋酸的混合溶液中，盐酸和醋酸的体积比为1:1。
[0036]优选的是，含有甲酸的乙腈甲醇混合液为含有质量分数为0.5％甲酸的乙腈甲醇混合液，且乙腈和甲醇的体积比为1:1。
[0037]优选的是，甲醇水溶液中，甲醇和水的体积比为1:1。
[0038]优选的是，其中，待测样品为血红蛋白样品。
[0039]优选的是，所述步骤2)中，液相色谱条件为：
[0040]色谱柱：Venusil MP C18；
[0041]流动相：A相为含有质量分数0.1％甲酸的甲酸水，B相为乙腈；
[0042]梯度洗脱程序：0
‑
0.2min，15％B；0.2
‑
3min，85％B；3
‑
3.2min，100％B；3
‑
4min，100％B；4
‑
4.1min，15％B；4.1
‑
5.5min，15％B；
[0043]流速：0.6mL/min；进样量：20μL；柱温：40℃。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种异氰酸甲酯的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)样品前处理：1
‑
1)取待测样品，加入盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀；1
‑
2)加热降解，反应结束后冷却至室温；1
‑
3)反应产物用甲醇水溶液定容，得到样品溶液；1
‑
4)在固相萃取孔板内加入含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将步骤1
‑
3)得到的样品溶液加入固相萃取孔板内，并混匀；1
‑
5)在固相萃取孔板上方施加正压力，使样品溶液通过固相萃取孔板的填料以进行净化；1
‑
6)收集固相萃取孔板下方流出的净化后的溶液，作为测试样；2)采用液相色谱串联质谱法对测试样进行检测，然后利用标准曲线计算得到待测样品中异氰酸甲酯的含量。2.根据权利要求1所述的异氰酸甲酯的检测方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：1
‑
1)取待测样品置于离心管中，加入盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀1
‑
6min；1
‑
2)于70
‑
100℃下加热降解0.2
‑
1h，反应结束后冷却至室温；1
‑
3)反应产物用甲醇水溶液定容，得到样品溶液；1
‑
4)在固相萃取孔板内加入含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将步骤1
‑
3)得到的样品溶液加入固相萃取孔板内，并混匀；1
‑
5)在固相萃取孔板上方施加正压力，使样品溶液通过固相萃取孔板的填料以进行净化，控制样品溶液流速为0.5
‑
2mL/min；1
‑
6)收集固相萃取孔板下方流出的净化后的溶液，作为测试样。3.根据权利要求2所述的异氰酸甲酯的检测方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：1
‑
1)取0.02
‑
0.1g待测样品置于5
‑
30ml的离心管中，加入1
‑
6mL盐酸和醋酸的混合溶液，震荡混匀1
‑
6min；1
‑
2)于70
‑
100℃下加热降解0.2
‑
1h，反应结束后冷却至室温；1
‑
3)反应产物用甲醇水溶液定容，得到样品溶液；1
‑
4)在固相萃取孔板内加入200
‑
1000μL的含有甲酸的乙腈甲醇混合液，然后将100
‑
400μL步骤1
‑
3)得到的样品溶液加入固相萃取孔板内...

【专利技术属性】
技术研发人员：覃素姿，魏勇，李艳杰，周玉松，张怡铭，楚士颖，李艳，胡玮，程文播，
申请(专利权)人：天津国科医工科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：