抗MET抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及激动性抗MET抗体及其在疾病治疗性处理中的应用。所述抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合人MET蛋白(hMET)并且以高亲和力结合小鼠MET蛋白(mMET)，其中，所述抗体或其抗原结合片段是hMET激动剂和mMET激动剂。本发明专利技术的抗体或抗原结合片段产生类似于HGF结合作用的分子和细胞效应。用的分子和细胞效应。用的分子和细胞效应。

【技术实现步骤摘要】
抗MET抗体及其应用
[0001]本申请是申请日为2017年6月23日，申请号为201780040456.2，专利技术名称为“抗MET抗体及其应用”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及以高亲和力结合人和小鼠肝细胞生长因子(HGF)受体(也被称为MET)的抗体和抗原结合片段。该抗体和抗原结合片段是人和小鼠中MET的激动剂，从而产生类似于HGF结合作用的分子和细胞效应。本专利技术还涉及抗体和抗原结合片段作为MET激动剂的治疗用途。

技术介绍

[0003]HGF是间充质来源的多效细胞因子，其介导包括细胞增殖、运动、分化和存活的生物功能特征性阵列。HGF受体，也被称为MET，由多种组织表达，多种组织包括：所有上皮细胞、内皮细胞、肌细胞、神经元细胞、成骨细胞、造血细胞以及免疫系统的各种组分。
[0004]HGF和MET信号传导在胚胎发育过程中起着重要作用，它可以引导前体细胞的迁移并决定细胞的存活或死亡。在成人中，HGF/MET信号传导通常是静止的并且在伤口愈合和组织再生期间恢复。一些癌症和肿瘤篡夺HGF/MET信号传导，以促进肿瘤在宿主生物体中的存活和增殖。因此，尽管成功有限，但抑制HGF
‑
MET轴已成为抗癌治疗的流行靶标。
[0005]由于其在组织愈合和再生中的作用，重组HGF也已被研究用于治疗许多病症，包括：退行性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、代谢疾病和移植相关病症。然而，重组HGF具有差的药理学性质：它需要蛋白水解活化以具有生物活性；一旦激活，它具有极短的体内半衰期；并且其工业制造复杂且昂贵。
[0006]已经提出了以模拟HGF的方式激活MET的激动性抗MET抗体作为替代物。
[0007]已经描述了至少部分模拟HGF活性的以下抗体：(i)3D6小鼠抗人MET抗体(美国专利第6,099,841号)；(ii)5D5小鼠抗人MET抗体(美国专利第5,686,292号)；(iii)NO
‑
23小鼠抗人MET抗体(美国专利第7,556,804B2号)；(iv)B7人幼稚抗人MET抗体(美国专利申请第2014/0193431 A1号)；(v)DO
‑
24小鼠抗人MET抗体(Prat等人,Mol Cell Biol.11,5954
‑
5962,1991；Prat等人,J Cell Sci.111,237
‑
247,1998)；以及(vi)DN
‑
30小鼠抗人MET抗体(Prat等人,Mol Cell Biol.11,5954
‑
5962,1991；Prat等人,J Cell Sci.111,237
‑
247,1998)。

技术实现思路

[0008]迄今为止产生的激动性抗MET抗体，例如
技术介绍
部分中描述的那些，经常作为旨在识别拮抗性分子的过程的副产物而被获得，并且未被明确设计成为治疗用途的激动剂分子。此外，现有技术抗MET抗体的最显著限制是它们已在小鼠系统中产生(除了使用人幼稚噬菌体文库识别的B7外)；结果，这些抗体不太可能展示与小鼠MET发生的交叉反应性。即使与自身抗原的微小交叉反应性原则上是可能的，这些相互作用也通常具有非常低的亲和
力。
[0009]虽然没有交叉反应性不是小鼠癌症模型的关注(因为他们使用人异种移植物)，但是人和小鼠MET之间的抗体的交叉反应性是再生医学或非肿瘤学人疾病的临床前小鼠模型的重要需求，这需要抗体在小鼠组织和细胞上发挥作用。
[0010]不仅需要激动性抗MET抗体与小鼠MET交叉反应以便在临床前模型中评估抗体，而且还期望抗体以与其对人MET的亲和力相同或者相似的亲和力结合小鼠MET，以及抗体在小鼠系统中引发与其在人系统中引起的效果相同或相似的效果——否则在临床前模型中进行的实验将不能预测人的情况。如实施例中所证明的，现有技术的抗MET激动性抗体都没有表现出对小鼠MET的亲和力，并且当然现有技术抗体都没有在小鼠和人系统中表现出相同或相似的结合和激动作用。
[0011]本申请提供了通过设计以高亲和力结合人和小鼠MET而制备的抗MET激动性抗体。这些抗体：(i)在人和小鼠MET生物系统中表现出激动活性——即它们诱导MET信号传导——一些具有与HGF相比相似或更高的效力；(ii)引发全谱的HGF诱导的生物活性，因此代表重组HGF的有效替代物；(iii)当与现有技术抗体直接比较时表现出优秀的与小鼠MET的结合；(iv)在低至1pM的浓度下表现出生物学上显著的激动活性；(v)在小鼠中表现出数日的血浆半衰期，剂量为1μg/kg时已经达到药理学饱和浓度，这对于治疗性抗体来说是非常低的；(vi)在急性肾损伤的小鼠模型中保持肾功能和肾完整性；(vii)在急性肝损伤小鼠模型中预防肝功能衰竭并且拮抗肝细胞损伤；(viii)在慢性肝损伤的小鼠模型中表现出抗纤维化、抗炎和促再生活性；(ix)在溃疡性结肠炎的小鼠模型和炎性肠病的小鼠模型中预防体重减轻、减轻肠出血、保持结肠完整性、抑制炎症并且促进上皮再生；(x)在I型糖尿病的小鼠模型中促进胰岛素依赖性葡萄糖摄取；(xi)在II型糖尿病的小鼠模型中克服胰岛素抵抗；(xii)在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的小鼠模型中改善脂肪肝、抑制纤维化并且恢复肝功能；(xiii)在糖尿病性溃疡的小鼠模型中加速伤口愈合；(xiv)与褐家鼠(Rattus norvegicus)MET和食蟹猴(Macaca fascicularis)MET交叉反应，从而允许在申请首次人试验之前需要的对这两种脊椎动物进行毒理学和药理学研究；(xv)识别在人、小鼠、大鼠和食蟹猴中保守的表位，从而在动物模型中提供更大的效用。
[0012]因此，在第一方面，本专利技术提供了一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合人MET蛋白(hMET)，并且以高亲和力结合小鼠MET蛋白(mMET)，其中，所述抗体或其抗原结合片段是hMET激动剂和mMET激动剂。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个重链可变域(VH)和至少一个轻链可变域(VL)，其中，所述VH和VL域，当作为Fab片段进行测试时，对hMET表现出1
×
10
‑3s
‑1至1
×
10
‑2s
‑1、任选地1
×
10
‑3s
‑1至6
×
10
‑3s
‑1的解离速率(通过Biacore测得的k
解离
)，并且对mMET表现出1
×
10
‑3s
‑1至1
×
10
‑2s
‑1、任选地1
×
10
‑3s
‑1至6
×
10
‑3s
‑1的解离速率(通过Biacore测得的k
解离
)。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段对hMET和mME本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合人MET蛋白(hMET)并且以高亲和力结合小鼠MET蛋白(mMET)，其中，所述抗体或其抗原结合片段是hMET激动剂和mMET激动剂。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段符合以下条件中的一个或多个：
‑
所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个重链可变域(VH)和至少一个轻链可变域(VL)，其中，当所述VH和VL域作为Fab片段进行测试时，所述VH和VL对hMET表现出1
×
10
‑3s
‑1至1
×
10
‑2s
‑1、任选地1
×
10
‑3s
‑1至6
×
10
‑3s
‑1的解离速率(通过Biacore测得的k
解离
)，并且对mMET表现出1
×
10
‑3s
‑1至1
×
10
‑2s
‑1、任选地1
×
10
‑3s
‑1至6
×
10
‑3s
‑1的解离速率(通过Biacore测得的k
解离
)；所述抗体或其抗原结合片段对hMET和mMET具有等价的亲和力；所述抗体或其抗原结合片段诱导hMET的磷酸化，并且诱导mMET的磷酸化；所述抗体或抗原结合片段以小于3.0nM、任选地小于2.0nM的EC
50
(通过磷酸化MET ELISA测得)诱导hMET的磷酸化，并且以小于3.0nM、任选地小于2.0nM的EC
50
(通过磷酸化MET ELISA测得)诱导mMET的磷酸化；所述抗体或其抗原结合片段等价地诱导hMET和mMET的磷酸化；所述抗体或其抗原结合片段对hMET表现出高的磷酸化效力，并且对mMET表现出高的磷酸化效力；所述抗体或其抗原结合片段以小于1nM的EC
50
和/或至少80％的E
max
(以磷酸化MET ELISA中HGF诱导激活的百分比表示)诱导hMET的磷酸化，并且以小于1nM的EC
50
和/或至少80％的E
max
(以磷酸化MET ELISA中HGF诱导激活的百分比表示)诱导mMET的磷酸化；所述抗体或其抗原结合片段对hMET表现出低的磷酸化效力，并且对mMET表现出低的磷酸化效力；所述抗体或其抗原结合片段以1nM～5nM的EC
50
和/或60～80％的E
max
(以磷酸化MET ELISA中HGF诱导激活的百分比表示)诱导hMET的磷酸化，并且以1nM～5nM的EC
50
和/或60～80％的E
max
(以磷酸化MET ELISA中HGF诱导激活的百分比表示)诱导mMET的磷酸化。3.根据权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段在与人细胞接触时诱导HGF样细胞应答，并且在与小鼠细胞接触时诱导HGF样细胞应答。4.根据权利要求3所述的抗体或抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段在与人细胞接触时和在与小鼠细胞接触时完全诱导HGF样细胞应答，或所述抗体或其抗原结合片段在与人细胞接触时和在与小鼠细胞接触时部分诱导HGF样细胞应答。5.根据权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段，其中，
‑
HGF样细胞应答的完全诱导在出现以下中的一者、任何两者或全部情况时是可测量的：(i)在细胞分散检测中，当所述抗体或其抗原结合片段的浓度为0.1～1.0nM时，所述抗体或其抗原结合片段诱导与最大HGF诱导的分散相当的细胞分散；(ii)在抗凋亡细胞检测中，所述抗体或其抗原结合片段表现出EC
50
小于HGF的EC
50
的1.1倍，和/或E
max
(以非凋亡对照细胞的总ATP含量的％来测量)大于对HGF观察到的E
max
的90％；和/或
(iii)在分枝化形态发生检测中，用所述抗体处理的细胞表现出每个由相同(非零)浓度的HGF诱导的球状体大于90％的分枝数；以及
‑
HGF样细胞应答的部分诱导在出现以下(i)
‑
(iii)的情况时是可测量的：(i)在细胞分散检测中，当所述抗体的浓度为1nM或更低时，所述抗体或其抗原结合片段诱导的细胞分散是由0.1nM同源HGF诱导的细胞分散的至少25％；(ii)在抗凋亡细胞检测中，所述抗体或其抗原结合片段表现出EC
50
不大于HGF的EC
50
的7.0倍，和/或E
max
细胞存活率为对HGF观察到的E
max
细胞存活率的至少50％；和/或(iii)在分枝化形态发生检测中，用所述抗体处理的细胞表现出每个由相同(非零)浓度的HGF诱导的球状体至少25％的分枝数；并且所述抗体或抗原结合片段不完全诱导HGF样细胞应答。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段是HGF竞争剂。7.根据权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段满足以下条件中的一个或多个：
‑
所述抗体或其抗原结合片段以不大于5nM的IC
50
和/或至少50％的I
max
与hHGF竞争结合hMET，并且以不大于5nM的IC
50
和/或至少50％的I
max
与mHGF竞争结合mMET；所述抗体或其抗原结合片段与hHGF和mHGF等价地竞争；所述抗体或其抗原结合片段是完全HGF竞争剂；所述抗体或其抗原结合片段是完全HGF竞争剂，其以小于2nM的IC
50
和/或大于90％的I
max
与hHGF竞争，并且以小于2nM的IC
50
和/或大于90％的I
max
与mHGF竞争；所述抗体或其抗原结合片段是部分HGF竞争剂；所述抗体或其抗原结合片段是部分HGF竞争剂，其以2～5nM的IC
50
和/或50％～90％的I
max
与hHGF竞争，并且以2～5nM的IC
50
和/或50％～90％的I
max
与mHGF竞争。8.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段识别位于人MET的第123位氨基酸残基至第223位残基、人MET的第224位氨基酸残基至第311位残基、人MET的第314位残基至第372位残基或者人MET的第546位残基至第562位残基的区域中的人MET的表位。9.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段：
‑
识别MET的胞外域中的表位，所述MET的胞外域包括在人和小鼠MET中保守的一个或多个氨基酸；
‑
识别人MET的表位，所述人MET的表位包括人MET的氨基酸残基Ile367和/或Asp372，任选地其中，所述表位位于人MET的第314位氨基酸残基至第372位残基的区域中；或
‑
识别人MET的表位，所述人MET的表位包括人MET的氨基酸残基Thr555，任选地其中，所述表位位于人MET的第546位氨基酸残基至第562位残基的区域中。10.根据权利要求8或9所述的抗体或抗原结合片段，其是根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或抗原结合片段。11.一种抗体或抗原结合片段[71G2]，其包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包括H
‑
CDR1、H
‑
CDR2和H
‑
CDR3，所述轻链可变域包括L
‑
CDR1、L
‑
CDR2和L
‑
CDR3，其中：H
‑
CDR1包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列；H
‑
CDR2包含SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；
H
‑
CDR3包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列；L
‑
CDR1包含SEQ ID NO:121所示的氨基酸序列；L
‑
CDR2包含SEQ ID NO:123所示的氨基酸序列；并且L
‑
CDR3包含SEQ ID NO:125所示的氨基酸序列。12.根据权利要求11所述的抗体或抗原结合片段[71G2]，其中，所述重链可变域包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:167的氨基酸序列至少90％同一性的序列；并且所述轻链可变域包含SEQ ID NO:168的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:168的氨基酸序列至少90％同一性的序列，或所述抗体或抗原结合片段为根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或抗原结合片段。13.一种抗体或抗原结合片段[71G3]，其包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包括H
‑
CDR1、H
‑
CDR2和H
‑
CDR3，所述轻链可变域包括L
‑
CDR1、L
‑
CDR2和L
‑
CDR3，其中：H
‑
CDR1包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；H
‑
CDR2包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；H
‑
CDR3包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；L
‑
CDR1包含SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列；L
‑
CDR2包含SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列；并且L
‑
CDR3包含SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列。14.根据权利要求13所述的抗体或抗原结合片段[71G3]，其中，所述重链可变域包含SEQ ID NO:157的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:157的氨基酸序列至少90％同一性的序列；并且所述轻链可变域包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:158的氨基酸序列至少90％同一性的序列，或其中，所述抗体或抗原结合片段为根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或抗原结合片段。15.一种抗体或抗原结合片段[76H10]，其包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包括H
‑
CDR1、H
‑
CDR2和H
‑
CDR3，所述轻链可变域包括L
‑
CDR1、L
‑
CDR2和L
‑
CDR3，其中：H
‑
CDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；H
‑
CDR2包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；H
‑
CDR3包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；L
‑
CDR1包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列；L
‑
CDR2包含SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列；并且L
‑
CDR3包含SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列。16.根据权利要求15所述的抗体或抗原结合片段[76H10]，其中，所述重链可变域包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:155的氨基酸序列至少90％同一性的序列；并且所述轻链可变域包含SEQ ID NO:156的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:156的氨基酸序列至少90％同一性的序列，或其中，所述抗体或抗原结合片段为根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或抗原结合片段。17.一种抗体或抗原结合片段[71C3]，其包含重链可变域和轻链可变域，所述重链可变域包括H
‑
CDR1、H
‑
CDR2和H
‑
CDR3，所述轻链可变域包括L
‑
CDR1、L

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗，
申请(专利权)人：阿戈马布治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：