抗HLA-G抗体、包含抗HLA-G抗体的组合物和使用抗HLA-G抗体的方法技术

本文提供了选择性结合到HLA

【技术实现步骤摘要】
抗HLA
‑
G抗体、包含抗HLA
‑
G抗体的组合物和使用抗HLA
‑
G抗体的方法
[0001]本申请是PCT申请号为PCT/US2019/053158的申请进入中国国家阶段后申请号为201980074775.4、申请日为2019年09月26日，专利技术名称为“抗HLA
‑
G抗体、包含抗HLA
‑
G抗体的组合物和使用抗HLA
‑
G抗体的方法”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求于2018年9月27日提交的美国临时申请号62/737,666的优先权，该美国临时申请以引用方式整体并入本文。


[0004]本文提供了对HLA
‑
G具有结合特异性的抗体和包含所述抗体的组合物，包括药物组合物、诊断组合物和试剂盒。还提供了将抗HLA
‑
G抗体用于治疗和诊断目的的方法。

技术介绍

[0005]HLA
‑
G组织相容性抗原I类G(也被称为人白细胞抗原G(HLA
‑
G))是人中由HLA
‑
G基因编码的蛋白质。HLA
‑
G属于HLA非经典I类重链旁系同源物。HLA
‑
G是由重链和轻链组成的异型二聚体(β
‑
2微球蛋白)。HLA
‑
G有膜结合形式和可溶形式。
[0006]HLA
‑
G通常在母体
‑
胎儿界面和其他免疫豁免(immune
‑
privileged)位点处表达。HLA
‑
G可能在妊娠中的免疫耐受中发挥作用，在胎盘中由绒毛外滋养层细胞表达，而经典的MHC I类基因(HLA
‑
A和HLA
‑
B)则不然。由于HLA
‑
G首先在胎盘样品中被鉴别，因此许多研究评价了其在妊娠病症(诸如先兆子痫和反复妊娠丢失(recurrent pregnancy loss))中的作用。参见Michita,Rafael Tomoya等，Human Immunology.2016,77(10):892
‑
897，其以引用方式整体(包括任何图)并入本文。
[0007]HLA
‑
G已被证明是免疫阻抑性的。通过结合各种髓样和淋巴样细胞上表达的受体，HLA
‑
G可直接抑制NK细胞、细胞毒性T
‑
淋巴细胞、B细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞的功能。HLA
‑
G还抑制T细胞和NK细胞的增殖以及溶细胞活性。HLA
‑
G阻抑吞噬并诱导调控性T细胞的产生或扩增。
[0008]HLA
‑
G通过至少三种含ITIM的抑制性受体(ILT2、ILT4和KIR2DL4)介导免疫功能。例如，在淋巴样细胞和髓样细胞上，HLA
‑
G通过ILT2介导功能。在髓样细胞上，HLA
‑
G通过ILT4介导功能。在蜕膜NK细胞上，HLA
‑
G通过KIR2DL4和ILT2介导免疫功能。
[0009]HLA
‑
G是免疫检查点靶标。HLA
‑
G可通过受体结合和/或胞啃(trogocytosis)和趋化性损伤直接抑制免疫细胞功能。HLA
‑
G可赋予肿瘤细胞较高的侵袭和转移潜力。HLA
‑
G促进肿瘤免疫监视的逃避，并增强恶性肿瘤的转移和进展。在肿瘤进展期间，HLA
‑
G具有其他作用，诸如抑制免疫细胞的细胞溶解、诱导免疫细胞的凋亡、和/或通过受体结合和/或胞啃产生调控细胞。
[0010]HLA
‑
G表达在广泛的肿瘤中上调，并且与不良预后和疾病进展相关。血清HLA
‑
G水平在乳腺癌、肺癌、结直肠癌(CRC)、胃癌、食道癌、成神经细胞瘤、宫颈癌和血液癌症中升
高。HLA
‑
G还被发现与晚期疾病中的临床参数(诸如肿瘤转移、不良预后、免疫逃避和肿瘤侵袭性)相关。
[0011]HLA
‑
G是用于疾病(诸如例如癌症)的有吸引力的靶标。

技术实现思路

[0012]本文提供了选择性结合HLA
‑
G的抗体。在一些实施方案中，所述抗体结合人HLA
‑
G。在一些实施方案中，所述抗体包含至少一个由本公开中提供的共有序列限定的CDR序列。在一些实施方案中，所述抗体包含本公开中所提供的例示性CDR、V
H
或V
L
序列或其变体中的一种或多种。在一些方面，所述变体是具有一个或多个保守氨基酸取代的变体。
[0013]还提供了包含所述抗体的组合物和试剂盒。在一些实施方案中，所述组合物是药物组合物。可使用任何适合的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物是用于胃肠外施用的组合物。
[0014]本公开还提供了使用本文所提供的抗HLA
‑
G抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法是治疗方法。在一些实施方案中，所述方法是分析方法。在一些实施方案中，所述方法是纯化和/或定量HLA
‑
G的方法。
[0015]在一些实施方案中，所述方法是诊断方法。在一些实施方案中，所述诊断方法包括检测肿瘤表达的HLA
‑
G，或由检测肿瘤表达的HLA
‑
G组成。在一些实施方案中，所述诊断方法包括检测可溶性HLA
‑
G，或由检测可溶性HLA
‑
G组成。在一些实施方案中，所述检测方法包括检测免疫细胞上的HLA
‑
G表达，或由检测免疫细胞上的HLA
‑
G表达组成。
[0016]在一些实施方案中，使用所述抗体来治疗疾病或病况。在一些方面，所述疾病或病况选自癌症、自身免疫性疾病和感染。一些方面提供了本文所提供的任何抗体或药物组合物用于治疗选自癌症、自身免疫性疾病和感染的疾病或病况的用途。
[0017]附图简单说明
[0018]图1提供了显示抗HLA
‑
G抗体对重组HLA
‑
G蛋白质的亲合亲和力和单体亲和力的表。
[0019]图2A和图2B提供了显示抗HLA
‑
G抗体的生物层干涉测量传感器图，所述抗HLA
‑
G抗体结合到HLA
‑
G，并且可基于它们在以成对方式被测试结合时相互交叉阻断的能力，将它们分成三个生化箱。
[0020]图3提供了生物层干涉测量传感器图，其显示了以不同水平的有效性结合HLA
‑
G并阻断HLA
‑
G与ILT2和ILT4的相互作用的抗体。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特异性结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)并且能够实现以下中的1项、2项、3项、4项、5项、6项、7项、8项、9项、10项、11项、12项、13项、14项、15项、16项或17项：a)抑制HLA
‑
G免疫阻抑功能；b)阻断HLA
‑
G与ILT2的相互作用和/或结合；c)阻断HLA
‑
G与ILT4的相互作用和/或结合；d)阻断HLA
‑
G与KIR2DL4的相互作用和/或结合；e)抑制HLA
‑
G介导的对NK细胞的阻抑；f)抑制HLA
‑
G介导的对细胞毒性T淋巴细胞的阻抑；g)抑制HLA
‑
G介导的对B细胞的阻抑；h)抑制HLA
‑
G介导的对中性粒细胞的阻抑；i)抑制HLA
‑
G介导的对单核细胞的阻抑；j)抑制HLA
‑
G介导的对巨噬细胞的阻抑；k)抑制HLA
‑
G介导的对树突细胞的阻抑；l)抑制HLA
‑
G介导的对NK和/或T细胞的细胞溶解和/或增殖的阻抑；m)抑制髓样细胞的HLA
‑
G阻抑；n)抑制HLA
‑
G介导的对吞噬的阻抑；o)抑制所述HLA
‑
G介导的调节性T细胞的产生、扩增或功能；p)抑制转移；或q)通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或吞噬(ADCP)抑制肿瘤生长。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体具有以下特征中的1个、2个、3个、4个、5个、6个或7个：a)是单克隆抗体；b)是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体；c)是双特异性抗体、多特异性抗体、双抗体或多价抗体；d)属于IgG1型、IgG2型、IgG3型、IgG4型或IgM型；e)是结合抗原的抗体片段；f)是Fab片段、Fab
’
片段、F(ab
’
)2片段或Fv片段；和/或g)是单链抗体、单结构域抗体或纳米抗体。3.一种药物组合物，其包含有效量的结合到hHLA
‑
G并具有以下特征中的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个或17个的抗体：a)抑制HLA
‑
G免疫阻抑功能；b)阻断HLA
‑
G与ILT2的相互作用和/或结合；c)阻断HLA
‑
G与ILT4的相互作用和/或结合；d)阻断HLA
‑
G与KIR2DL4的相互作用和/或结合；e)抑制HLA
‑
G介导的对NK细胞的阻抑；f)抑制HLA
‑
G介导的对细胞毒性T淋巴细胞的阻抑；g)抑制HLA
‑
G介导的对B细胞的阻抑；h)抑制HLA
‑
G介导的对中性粒细胞的阻抑；i)抑制HLA
‑
G介导的对单核细胞的阻抑；
j)抑制HLA
‑
G介导的对巨噬细胞的阻抑；k)抑制HLA
‑
G介导的对树突细胞的阻抑；l)抑制HLA
‑
G介导的对NK和/或T细胞的细胞溶解和/或增殖的阻抑；m)抑制髓样细胞的HLA
‑
G阻抑；n)抑制HLA
‑
G介导的对吞噬的阻抑；o)抑制所述HLA
‑
G介导的调节性T细胞的产生或扩增；p)抑制转移；或q)通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或吞噬(ADCP)抑制肿瘤生长。4.一种药物组合物，其包含根据权利要求1或权利要求2所述的抗体。5.根据权利要求4所述的药物组合物，其进一步包含有效量的以下中的至少一种a)抗ILT2抗体；b)抗ILT3抗体；c)抗ILT4抗体；d)抗KIR2DL4抗体；e)抗HLA
‑
E抗体；f)抗NKG2A抗体；f)抗HLA
‑
F抗体；f)抗PD
‑
L1抗体；g)抗PD
‑
1抗体；h)抗CD38抗体；i)抗CD39抗体；j)抗CD73抗体；k)抗A2A受体抗体；l)抗A2B受体抗体；m)抗A2A/A2B双受体抗体或其组合；n)抗CD47抗体；o)小分子抑制剂；p)双特异性T细胞接合剂和/或CAR
‑
T疗法和/或CAR
‑
NK疗法、CAR
‑
巨噬细胞疗法q)溶瘤病毒；r)化学疗法；s)使用诸如以下的效应子(增强或其他)活性抗体的有ADCC能力的疗法：抗CD19、抗CD20、抗EGFR、抗Her2、抗SLAMF7、抗CD52、抗BCMA、抗GD2或抗CCR4。6.根据权利要求4或权利要求5所述的药物组合物，其进一步包含以下中的一种或两种a)针对免疫抑制受体或配体的抗体，和/或b)针对免疫刺激受体或配体的抗体。7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体以小于约20nM的K
D
结合到人HLA
‑
G多肽或其变体。8.一种抗体，其与参考抗体竞争或能够竞争与人HLA
‑
G的结合，其中所述参考抗体是根据权利要求1所述的抗体。
9.一种抗体，其结合到人HLA
‑
G或能够与参考抗体竞争结合到人HLA
‑
G，其中所述参考抗体结合到人HLA
‑
G多肽上SEQ ID NO:342的195位、197位和/或198位的表位。10.根据权利要求1所述的抗体，其包含人重链恒定区或其片段或变体和/或轻链恒定区或其片段或变体，其中所述恒定区或其片段或变体包含来自SEQ ID NO:170
‑
200和/或SEQ ID NO:204
‑
228所述的任何序列的最多20个保守修饰的氨基酸取代。11.一种能够结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)的分离的抗体分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH和/或VL包含以下中的1个、2个、3个、4个、5个或6个：a)VHCDR1，其具有SEQ ID NO：1
‑
14或SEQ ID NO：18
‑
34中所述的序列，b)VHCDR2，其具有SEQ ID NO：38
‑
50或SEQ ID NO：54
‑
71中所述的序列，c)VHCDR3，其具有SEQ ID NO:76
‑
101中所述的序列，d)VLCDR1，其具有SEQ ID NO:105
‑
124中所述的序列，e)VLCDR2，其具有SEQ ID NO:128
‑
145中所述的序列，和f)VLCDR3，其具有SEQ ID NO:149
‑
166中所述的序列。12.一种能够结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)的分离的抗体分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH包含：a)VHCDR1，其具有SEQ ID NO：1
‑
14或SEQ ID NO：18
‑
34中所述的序列，b)VHCDR2，其具有SEQ ID NO：38
‑
50或SEQ ID NO：54
‑
71中所述的序列，和c)VHCDR3，其具有SEQ ID NO:76
‑
101中所述的序列；并且所述VL包含：a)VLCDR1，其具有SEQ ID NO:105
‑
124中所述的序列，b)VLCDR2，其具有SEQ ID NO:128
‑
145中所述的序列，和c)VLCDR3，其具有SEQ ID NO:149
‑
166中所述的序列。13.一种能够结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)的分离的抗体分子，其包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，所述VH包含至少一个SEQ ID NO:170
‑
200中任一个中所述的序列并且所述VL包含至少一个SEQ ID NO:204
‑
228中任一个中所述的序列。14.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1、权利要求12或权利要求13所述的抗体。15.一种表述载体，其包含根据权利要求14所述的核酸。16.一种原核或真核宿主细胞，其包含根据权利要求15所述的载体。17.一种溶瘤病毒，其编码根据权利要求14
‑
16中任一项所述的核酸。18.一种用于生产重组蛋白质的方法，其包括步骤：在原核或真核宿主细胞中表达根据权利要求14或权利要求15所述的核酸以及从所述细胞或细胞培养物上清液中回收所述蛋白质。19.一种用于治疗患癌症、慢性感染或炎性疾病的受试者的方法，其包括步骤：向所述受试者施用包含有效量的根据权利要求1所述的抗体的药物组合物或根据权利要求3所述的药物组合物。20.一种用于治疗患癌症、慢性感染或炎性疾病的受试者的方法，其包括步骤：向所述受试者施用包含有效量的根据权利要求1所述的抗体的药物组合物或根据权利要求3所述的的药物组合物，所述药物组合物与抗体或包含有效量的以下物质的药物组合物的组合：
a)抗ILT2抗体；b)抗ILT3抗体；c)抗ILT4抗体；d)抗KIR2DL4抗体；e)抗HLA
‑
E抗体；0抗NKG2A抗体g)抗HLA
‑
F抗体h)抗PD
‑
L 1抗体；i)抗PD
‑
1抗体；j)抗CD38抗体；k)抗CD39抗体；l)抗CD73抗体；m)抗A2A受体抗体；n)抗A2B受体抗体；o)抗A2A/A2B双受体抗体和/或组合；p)抗CD47抗体；q)抗CTLA
‑
4抗体；r)抗LAG3抗体；s)抗TIM
‑
3抗体；t)抗TIGIT抗体；u)抗VISTA抗体；w)抗CD94抗体；x)小分子抑制剂；y)双特异性T细胞接合剂、CART疗法、CAR
‑
NK疗法、CAR
‑
巨噬细胞疗法、工程改造的细胞疗法和/或适应性T细胞疗法z)溶瘤病毒；aa)化学疗法；和/或ab)使用诸如以下的效应活性抗体的有ADCC能力的疗法：抗CD19、抗CD20、抗EGFR、抗Her2、抗SLAMF7、抗CD52、抗BCMA、抗GD2和/或抗CCR4。21.根据权利要求19或权利要求20所述的方法，其中所述癌症是实体癌症。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是血液癌症。23.一种用于调节有需要的受试者的免疫系统功能的方法，其包括在使得所述免疫系统被调节的条件下，使所述受试者的免疫细胞群体与包含有效量的如权利要求1所述的抗体的药物组合物接触的步骤。24.根据权利要求22所述的方法，其中所述受试者是人受试者。25.根据权利要求23所述的方法，其中所述抗体包括双特异性抗体或复合抗体。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述抗体、所述双特异性抗体或所述复合抗体以足以在所述受试者中实现以下中的1项、2项、3项、4项、5项、6项或7项的量被施用：a)免疫阻抑的抑制；
b)调节性T细胞的水平的降低；c)髓样细胞、细胞毒性T淋巴细胞、NK细胞、B细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和/或树突细胞活性的增加；d)吞噬活性的增加；e)转移的抑制；f)肿瘤生长的抑制；和/或g)肿瘤消退的诱导。27.根据权利要求20所述的方法，其中所述方法进一步包括以下中的一种或多种：a)施用化学疗法；b)施用辐射疗法；和/或c)施用一种或多种另外的治疗剂。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂包括一种或多种免疫刺激剂。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包括对免疫细胞的抑制性受体的拮抗剂。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述抑制性受体为ILT2、ILT3、ILT4、KIR2DL4、CTLA
‑
4、PD
‑
1、CD39、CD73、PD
‑
L1、PD
‑
L2、LAG
‑
3、Tim3、TIGIT、B7
‑
H3、B7
‑
H4、神经突蛋白、BTLA、CECAM
‑
1、CECAM
‑
5、VISTA、LAIR1、CD160、2B4、TGF
‑
B、NKG2A和/或杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)中的至少一种。31.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包括免疫细胞的共刺激受体的激动剂。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述共刺激受体是以下中的至少一种：OX40、CD2、CD27、ICAM
‑
1、LFA
‑
1、ICOS(CD278)、4
‑
1BB(CD137)、GITR、CD28、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp30、NKp46、NKp80、CD160和/或CD83配体。33.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包括ADCC活性抗体，或由ADCC活性抗体组成，所述ADCC活性抗体包括抗CD19抗体、抗CD20抗体、抗EGFR抗体、抗Her2抗体、抗SLAMF7抗体、抗CD52抗体、抗BCMA抗体、抗GD2抗体、抗CD38抗体和/或抗CCR4抗体，或由抗CD19抗体、抗CD20抗体、抗EGFR抗体、抗Her2抗体、抗SLAMF7抗体、抗CD52抗体、抗BCMA抗体、抗GD2抗体、抗CD38抗体和/或抗CCR4抗体组成。34.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包括细胞因子。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述细胞因子是以下中的至少一种：IL
‑
1、IL
‑
2、IL
‑
5、IL
‑
7、IL
‑
10、IL
‑
12、IL
‑
15、IL
‑
21和/或IL
‑
27。36.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包括溶瘤病毒。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述溶瘤病毒是单纯疱疹病毒、水疱性口炎病毒、腺病毒、新城疫病毒、牛痘病毒或马拉巴病毒。38.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包括嵌合抗原工程化T细胞。39.根据权利要求29所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包括双特异性或多特异性的T细胞定向抗体。
40.一种能够结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)的分离的抗体分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH包含以下中的1个、2个或3个：a)VHCDR1，其具有与SEQ ID NO：1
‑
14或18
‑
34中所述的序列至少90％同一性的氨基酸序列，b)VHCDR2，其具有与SEQ ID NO：54
‑
71中所述的序列至少90％同一性的氨基酸序列，和c)VHCDR3，其具有与SEQ ID NO：76
‑
101中所述的序列至少90％同一性的氨基酸序列；并且所述VL包含以下中的1个、2个或3个：a)VLCDR1，其具有与SEQ ID NO：105
‑
124中所述的序列至少90％同一性的氨基酸序列，b)VLCDR2，其具有与SEQ ID NO：128
‑
145中所述的序列至少90％同一性的氨基酸序列，和c)VLCDR3，其具有与SEQ ID NO：149
‑
166中所述的序列至少90％同一性的氨基酸序列。41.一种能够结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)的分离的抗体分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，VH包含以下中的1个、2个或3个：a)VHCDR1，其具有与SEQ ID NO:1
‑
14或SEQ ID NO:18
‑
34中所述的序列同源的氨基酸序列，b)VHCDR2，其具有与SEQ ID NO:38
‑
50或SEQ ID NO:54
‑
71中所述的序列同源的氨基酸序列，和c)VHCDR3，其具有与SEQ ID NO:76
‑
101中所述的序列同源的氨基酸序列，并且VL包含以下中的1个、2个或3个：a)VLCDR1，其具有与SEQ ID NO:105
‑
124中所述的序列同源的氨基酸序列，b)VLCDR2，其具有与SEQ ID NO:128
‑
145中所述的序列同源的氨基酸序列，和c)VLCDR3，其具有与SEQ ID NO:149
‑
166中所述的序列同源的氨基酸序列。42.一种能够结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)的分离的抗体分子，其包含重链和轻链，所述重链包含一个或多个具有由SEQ ID NO:232
‑
262或SEQ ID NO:266
‑
296中的一个组成的序列的分子，并且所述轻链包含一个或多个具有由SEQ ID NO:300
‑
330中的一个组成的序列的分子。43.一种能够结合到人HLA
‑
G(hHLA
‑
G)的分离的抗体分子，其包含重链和轻链，a)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：232组成的序列，并且所述轻链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：300组成的序列；b)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：233组成的序列，并且所述轻链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：301组成的序列；c)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：234组成的序列，并且所述轻链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：302组成的序列；d)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：235组成的序列，并且所述轻链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：303组成的序列；e)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：236组成的序列，并且所
述轻链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：304组成的序列；f)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：237组成的序列，并且所述轻链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：305组成的序列；g)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：238组成的序列，并且所述轻链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：306组成的序列；h)所述重链包含一个或多个分子，每个分子具有由SEQ ID NO：239组...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：提泽纳治疗公司，
类型：发明
国别省市：