一种负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂，其中牛奶外泌体作为载体负载二甲双胍，该负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂的制备方法包括：(1)利用新鲜牛乳提取得到牛奶外泌体；(2)将牛奶外泌体与二甲双胍冰浴超声混合，冷冻离心制备得到所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂。本发明专利技术利用牛奶外泌体作为二甲双胍的药物递送载体，可以潜在地增强二甲双胍药物在肝脑中的分布，提高药物的功效，从而提高二甲双胍在酒精性肝脑损伤中的治疗效果，开发的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂成本低廉、易于获取、且具有高生物相容性和安全性，可以通过经鼻递送增强生物利用度，在治疗肝氧化损伤和/或脑氧化损伤方面应用前景广泛。景广泛。景广泛。

【技术实现步骤摘要】
一种负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于药物制剂领域，具体涉及一种负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]过量饮酒及酗酒会导致人体多器官、多系统损害，其中以肝、脑受损最为严重。酒精性肝损伤是由于长期大量饮酒所致的慢性肝病，初期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化，严重酗酒时可诱发广泛肝细胞坏死甚至肝功能衰竭。酒精作为亲脂性中枢神经系统抑制剂，与中枢神经系统也具有较强的亲和力，急性过度摄入会对中枢神经系统造成不可逆的永久损伤。酒精及其代谢产物乙醛能够通过血脑屏障，与脑部蛋白质结合造成神经细胞损伤，直接影响中枢神经系统及大脑正常功能。酒精暴露还会激活炎性因子的表达，影响神经系统胶质细胞的激活，导致神经炎症相关的信号传递异常并引起细胞损伤。目前尚无治疗酒精中毒所致肝脑损伤的有效药物，因而探索有效的治疗手段是现在的研究热点。
[0003]二甲双胍是从山羊豆(Galega officinalis L.)中提取的双胍类化合物，除了作为2型糖尿病的一线治疗药物外，大量研究表明二甲双胍具有抗炎、抗肿瘤、抗凋亡的作用。例如，二甲双胍在肝脏缺血模型中能够通过抗氧化作用和抗炎症作用来保护肝脏，通过抑制炎症因子的水平而减轻脂多糖诱导的肝炎，还可以改善阿尔兹海默症和帕金森患者的认知功能。
[0004]外泌体是细胞由于环境刺激或自我激活而分泌的纳米尺寸的细胞外囊泡(直径30
‑
150nm)。外泌体是细胞间极为重要的媒介体系，富含蛋白质、脂质、复合多糖、核酸、细胞粘附分子等，可以实现细胞间的物质交换和信息交流。近年来，外泌体负载小分子化学药物、蛋白质、肽、核酸药物等药物载体递送系统的研究备受关注。但目前细胞来源的外泌体收集效率低，成本高，并且存在一定的毒性风险。牛奶作为日常生活中用来补充营养的天然饮品，含有大量的外泌体，牛奶外泌体的双层膜可以在体外长期完整保持，是一种潜在优良药物载体。
[0005]公开号为CN112791092A的中国专利文献公开了一种牛奶外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂，制备方法包括：首先以新鲜牛乳为原料制备牛奶外泌体悬浮液，再在室温下以体积比1：9混合淫羊藿苷与外泌体悬浮液；冷冻干燥制得的该外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂。该外泌体负载淫羊藿苷纳米制剂具有增强成骨修复的能力。
[0006]公开号为CN112656836A的中国专利文献公开了一种透皮肽修饰的粉葛外泌体纳米制剂在制备抗皮肤衰老产品中的应用，该专利技术首先制备得到粉葛外泌体重悬液，再将其与棕榈酸修饰的透皮肽混合制备得到透皮肽修饰的粉葛外泌体纳米制剂，该纳米制剂能有效穿透皮肤角质层，具有显著的抗皮肤(细胞)衰老的功能。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂，其中牛奶外泌体作为载体负载二甲双胍，牛奶外泌体的脑靶向性能够提高二甲双胍治疗酒精性肝脑损伤的疗效，而且该负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂成本低廉、易于获取、具有高生物相容性和安全性。
[0008]具体采用的技术方案如下：
[0009]一种负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂，包括牛奶外泌体和二甲双胍，牛奶外泌体作为载体负载二甲双胍，牛奶外泌体和二甲双胍的质量比为1：1
‑
3。
[0010]牛奶外泌体性质稳定、生物相容性好、成本低、毒性小，具有脑靶向性，本专利技术利用牛奶外泌体作为二甲双胍的药物递送载体，可以潜在地增强二甲双胍药物在肝脑中的分布，提高药物的功效，从而提高二甲双胍肝脑损伤中的治疗效果。
[0011]本专利技术还提供了所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0012](1)利用新鲜牛乳提取得到牛奶外泌体；
[0013](2)将牛奶外泌体与二甲双胍冰浴超声混合，冷冻离心制备得到所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂。
[0014]优选的，所述的牛奶外泌体的制备方法为：
[0015](1)将新鲜牛乳在0
‑
10℃下离心取中层乳清，离心条件为2000
‑
3000g，15
‑
20min；
[0016](2)将中层乳清与枸橼酸钠溶液混合均匀，0
‑
10℃离心取上清液得到脱脂乳清；离心条件为10000
‑
12000g，60
‑
90min；
[0017](3)0
‑
10℃下，将脱脂乳清35000
‑
40000g离心60
‑
90min取上清液后，随后，再于70000
‑
80000g离心60
‑
90min取上清液，然后，于100000
‑
135000g离心120
‑
180min后取沉淀得到牛奶外泌体。
[0018]进一步优选的，所述的牛奶外泌体的制备方法为：
[0019](1)将新鲜牛乳在4℃下离心取中层乳清，离心条件为3000g，15min；
[0020](2)将中层乳清与等体积2wt％枸橼酸钠溶液混合均匀，4℃离心取上清液得到脱脂乳清；离心条件为12000g，60min；
[0021](3)4℃下，将脱脂乳清35000g离心60min，取上清液，随后，再于70000g离心60min，取上清液；再于100000g离心60min、135000g离心120min取沉淀得到牛奶外泌体沉淀。
[0022]优选的，所述的牛奶外泌体的平均粒径为100
‑
200nm。上述方法制得的牛奶外泌体粒径范围合适，适于负载二甲双胍制备得到经鼻给药的纳米制剂。
[0023]步骤(2)中，所述的牛奶外泌体与二甲双胍在PBS缓冲液中以质量比1：1
‑
3冰浴超声混合。
[0024]优选的，步骤(2)中，所述的牛奶外泌体与二甲双胍在PBS缓冲液中以质量比1：1，在冰浴下以90
‑
110W的功率下超声5
‑
10min混合。
[0025]优选的，步骤(2)中，0
‑
10℃冷冻离心100000
‑
135000g，60
‑
180min。
[0026]本专利技术还提供了所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂在治疗肝氧化损伤和/或脑氧化损伤中的应用，特别是在治疗酒精性肝脑损伤中的应用。
[0027]所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂的给药方式为经鼻递送。经鼻递送可
以增强所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂的生物利用度。
[0028]在酒精性肝脑损伤动物模型，经鼻递送负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂作用于动物模型，以肝指数、血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)水平验证得到该负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂能够减轻肝细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂，其特征在于，包括牛奶外泌体和二甲双胍，牛奶外泌体作为载体负载二甲双胍，牛奶外泌体和二甲双胍的质量比为1：1
‑
3。2.根据权利要求1所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用新鲜牛乳提取得到牛奶外泌体；(2)将牛奶外泌体与二甲双胍冰浴超声混合，冷冻离心制备得到所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂。3.根据权利要求2所述的负载二甲双胍的牛奶外泌体纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述的牛奶外泌体的制备方法为：(i)将新鲜牛乳在0
‑
10℃下离心取中层乳清，离心条件为2000
‑
3000g，15
‑
20min；(ii)将中层乳清与枸橼酸钠溶液混合均匀，0
‑
10℃离心取上清液得到脱脂乳清；离心条件为10000
‑
12000g，60
‑
90min；(iii)0
‑
10℃下，将脱脂乳清35000
‑
40000g离心60
‑
90min取上清液后，随后，再于70000
‑
80000g离心60
‑
90min取上...

【专利技术属性】
技术研发人员：高建青，顾月婷，周彦军，
申请(专利权)人：浙江寰领医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：