一种多杀菌素的提取纯化方法技术

本发明专利技术提供一种多杀菌素的提取纯化方法，涉及制药技术领域。该方法包括步骤：发酵液的预处理、浸提、反萃取、大孔树脂吸附层析、结晶、精制。本发明专利技术的优点在于多杀菌素提取工艺简单，产品质量好，收率高，适合大规模工业生产。使用本发明专利技术的方法最终获得的产品纯度达到95％以上，总收率达到80％以上。总收率达到80％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种多杀菌素的提取纯化方法


[0001]本专利技术属于制药
，尤其涉及一种多杀菌素的提取纯化方法。

技术介绍

[0002]多杀菌素(Spinosad)是一种具有高价值和复杂的化学结构的广谱生物杀虫剂，是由土壤放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)经有氧发酵产生的胞内次级代谢产物。其主要活性成分是Spinosyn A和Spinosyn D，通常实用化产品是二者的混合物，故称其为Spinosad。
[0003]多杀菌素作为新型的大环内酯类抗生素，却和一般的大环内酯类抗生素不同，多杀菌素没有抑菌活性，却有杀虫活性。它具有破坏烟碱乙酰胆碱受体的独特作用模式，对鳞翅目幼虫以及一些双翅目、鞘翅目、胸腺翅目和膜翅目等害虫具有高水平的毒杀功效，但对其他昆虫只有有限的活性，对哺乳动物和其他野生动物表现出低毒性。因其具有高效、低毒、低残留、对昆虫天敌安全、自然分解快等优良特性，在防治农林害虫、储粮害虫、卫生害虫以及牲畜寄生虫上发挥重要作用，被认为是一种很有开发前景的绿色杀虫剂。
[0004]目前，关于多杀菌素的提取纯化方法主要是溶媒萃取法和大孔树脂吸附法。溶媒萃取主要是使目标化合物由一种溶剂转移到另外一种与原来溶剂不相溶的溶剂中，按照分溶定律达到萃取平衡，从而起到提取纯化的目的。该方法耗时较长，要经过多次萃取，需要大量的有机溶剂，且在萃取过程中容易出现乳化现象，增加工作难度，在大规模生产中，增加成本和能耗。大孔树脂吸附法主要是利用分子间作用力和氢键的作用，根据相似相溶原理来进行物质的吸附和洗脱来完成的。该方法操作简单，提高了提取效率，所用有机溶剂较少，大孔树脂可以反复使用，降低了生产成本。
[0005]相关技术公开了一种多杀菌素的提取工艺：将发酵液的pH调节至8.5
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9.5，得到预处理的发酵液，将预处理后的发酵液过滤并收集滤饼，然后用甲醇
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水溶液对得到的滤饼进行搅拌浸提，过滤得到浸提液，将得到的浸提液过强碱性阴离子树脂脱色并浓缩至无甲醇流出，得到脱色浓缩液，在得到的脱色浓缩液中加入非水溶性有机溶剂萃取，收集负载有机相，然后向得到的负载有机相中加入酸水反萃取，收集反萃取相，搅拌状态下，调节得到的反萃取相至pH为9.0
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10.0，使多杀菌素以结晶形式沉淀出来，过滤，烘干，得到多杀菌素粉末。该专利技术所得到的产品纯度较高，但在整个过程工艺较为复杂，溶剂种类多，消耗量大，产品收率低，成本高，不利于工业化生产。
[0006]目前，国内现有多杀菌素的工业化生产存在溶媒使用量大，工艺复杂，成本较高，产品收率和纯度低等问题，因此，需要继续深入研究并优化多杀菌素的生产工艺，降低生产成本，提高产品质量，从而提高生产水平。

技术实现思路

[0007]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种多杀菌素的提取纯化方法，能够使得产品收率高的同时保证产品质量。
[0008]根据本专利技术提出的一种多杀菌素的提取纯化方法，包括如下步骤：
[0009]S1：预处理，将发酵液与助滤剂混合，压滤，收集菌渣；
[0010]S2：浸提，用有机溶剂对S1所述菌渣浸提，得到浸提液；
[0011]S3：反萃取，将酸水和S2所述浸提液混合，静置分层，得到酸水相；
[0012]S4：柱层析，使用径高比为1:2～3的大孔吸附树脂对S3所述酸水相进行柱层析，洗脱，收集洗脱液，合并洗脱液；
[0013]S5：结晶，向S4所述合并后的洗脱液中加入结晶剂，得到结晶粉；
[0014]S6：精制，重结晶S5所述结晶粉，得到多杀菌素成品。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，S1中所述助滤剂为珍珠岩、硅藻土、纤维素中的至少一种。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述助滤剂与所述发酵液的质量体积比为(1～5)kg：100L。
[0017]进一步地，所述助滤剂与所述发酵液的质量体积比为(1～3)kg：100L。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，S1所述压滤为板框压滤、箱式压滤、隔膜压滤中的至少一种。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，S2所述有机溶剂选自甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丁酸乙酯中的至少一种，优选为乙酸乙酯。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，S2所述有机溶剂与所述菌渣的用量比为(2～5)L：1kg。
[0021]进一步地，S2所述有机溶剂与所述菌渣的用量比为(2～3)L：1kg。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，S2所述浸提时间为1h～5h。
[0023]进一步地，S2所述浸提时间为3h～4h。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，S3所述酸水包括柠檬酸、草酸、酒石酸、乳酸中的至少一种的水溶液，优选为包括酒石酸的水溶液。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，S3所述酸水的浓度为0.1mol/L～0.5mol/L。
[0026]进一步地，S3所述酸水的浓度为0.1mol/L～0.2mol/L。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，S3所述酸水的体积与所述浸提液的体积比为1:2～5。
[0028]进一步地，S3所述酸水的体积与所述浸提液的体积比为1:3～4。
[0029]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S3所述混合为搅拌混合，所述搅拌的时间为1h～3h，优选为1h～2h。
[0030]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S3所述静置的时间为1h～5h，优选为1h～2h。
[0031]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S3所述反萃取可操作1～3次。
[0032]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S4所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂。
[0033]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S4还包括将酸水相稀释配成上样液，所述稀释的比例为1:0.5～1.5。
[0034]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S4所述洗脱的洗脱剂为60％～80％甲醇水溶液，优选为70％～75％甲醇水溶液。
[0035]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S4所述洗脱的流速为1BV/h～3BV/h，优选为1.5BV/h～2BV/h。
[0036]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S4所述洗脱剂的用量为5BV～6BV。
[0037]在本专利技术的一些优选的实施方式中，S4所述收集洗脱液具体为每0.1BV～0.2BV收集1个容器。
[0038]在本专利技术的一些更优选的实施方式中，S4所述合并洗脱液的标准为经过HPLC检测的纯度大于85％，多杀菌素单位大于5000mg/L。
[0039]在本专利技术的一些更优选的实施方式中，S5所述结晶剂选自双蒸水或纯化水。
[0040]在本专利技术的一些更优选的实施方式中，S5所述结晶剂的加入量为所述洗脱液体积的0.4～0.5倍。
[0041]在本专利技术的一些更优选的实施方式中，S5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多杀菌素的提取纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：预处理，将发酵液与助滤剂混合，压滤，收集菌渣；S2：浸提，用有机溶剂对S1中所述菌渣浸提，得到浸提液；S3：反萃取，将酸水和S2中所述浸提液混合，静置分层，得到酸水相；S4：柱层析，使用径高比为1:(2～3)的大孔吸附树脂对S3中所述酸水相进行柱层析，洗脱，收集洗脱液，合并洗脱液；S5：结晶，向S4中所述合并后的洗脱液中加入结晶剂，得到结晶粉；S6：精制，重结晶S5中所述结晶粉，得到多杀菌素成品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S4中所述洗脱采用浓度为60％～80％甲醇水溶液进行。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S4中所述洗脱的流速为1BV/h～3BV/h。4.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张勇，司宇飞，李云飞，李敬辉，
申请(专利权)人：丽珠集团新北江制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：