铁皮石斛叶中分离制备两种芹菜素糖苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛叶中分离制备两种芹菜素糖苷的方法，所述方法包括：以铁皮石斛叶为原料，经过超声提取、液液萃取、液液色谱分离，得到芹菜素

【技术实现步骤摘要】
铁皮石斛叶中分离制备两种芹菜素糖苷的方法


[0001]本专利技术涉及铁皮石斛叶中分离制备芹菜素
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吡喃葡萄糖
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木糖苷和芹菜素
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木糖
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阿拉伯糖苷的方法。

技术介绍

[0002]芹菜素(Apigenin)，是一种天然的类黄酮化合物，一种天然抗氧化剂，有降血压和舒张血管、预防动脉粥样硬化、抑制肿瘤等作用。研究发现它通过在G2/M阶段阻止细胞周期来抑制细胞增殖。芹菜素可溶于二甲基亚砜(DMSO)及稀KOH溶液等，但难溶于水，限制了其广泛应用。但它可与其他糖基相连接，因而表现多种生物学活性和药理作用。
[0003]铁皮石斛叶是生产铁皮石斛鲜条(枫斗)的副产品。铁皮石斛叶的生物量大，产量仅次于茎，每年可达上千吨，但是由于缺乏针对其化学成分与药理功效的系统研究，对其功能价值认识不足，每年会造成大量铁皮石斛叶浪费。
[0004]芹菜素
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吡喃葡萄糖
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木糖苷(Vicenin
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3，化合物1)和芹菜素
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木糖
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阿拉伯糖苷(Apigenin
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xylopyranosyl
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arabinopyranoside，化合物2)为铁皮石斛叶中含量较高的两种化合物，结构十分相似，不易分离，结构式如下。糖基的连接使得芹菜素的脂溶性降低，能够有效地提高生物利用度和药效挥发，因此具有非常广阔的应用前景。
[0005][0006]研究发现，由于这两个化合的结构相似，因此其在液相色谱的硅胶柱上很难分离，峰形有部分重叠。液液色谱(Countercurrent Chromatography)，是一种连续的不需要固体载体的现代色谱分离技术，结合液
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固相色谱选择性和液
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液萃取载样能力，充分发挥混合动力学的优势，大大提高了制备性分离性能，相比高效液相色谱而言，进样量大，溶剂体系组成多样化，避免了不可逆吸附和变性，解决固体固定相构象限制和非特异性相互作用等问题，生产成本低，是分离纯化同分异构体的一种理想的制备色谱技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种应用液液色谱从铁皮石斛叶中分离制备芹菜素
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吡喃葡萄糖
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木糖苷和芹菜素
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木糖
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阿拉伯糖苷的方法，利用天然产物中各组分的分配行为差异从而快速分离纯化这两种化合物，具有更强的目的性，快捷高效，工艺简单。
[0008]本专利技术的技术方案如下：
[0009]一种铁皮石斛叶中分离制备两种芹菜素糖苷的方法，包括以下步骤：
[0010](1)原料铁皮石斛叶烘干后粉碎，用70％(v/v)甲醇的水溶液超声提取，得到甲醇粗提物；
[0011]具体的，所述超声提取的方法为：将粉碎后的铁皮石斛叶用其10～20倍干重的70％甲醇的水溶液超声提取，提取温度25～35℃，提取时间1h，趁热过滤，滤渣重复提取1～3次，合并提取液，真空回收溶剂得到甲醇粗提物；
[0012](2)甲醇粗提物用纯水溶解，用石油醚萃取，弃去上相石油醚萃取液，下相用乙酸乙酯萃取，弃去上相乙酸乙酯萃取液，下相用正丁醇萃取，将正丁醇萃取液真空回收溶剂，得到正丁醇萃取物；
[0013](3)在分液漏斗中加入水、正丁醇和乙酸乙酯，组成混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相作为液液色谱的固定相，下相作为流动相；
[0014]所述混合溶剂体系中，水、正丁醇和乙酸乙酯的体积份数分别为4～6份、2～4份、1～3份，优选分别为5份、3份、2份；
[0015](4)取步骤(2)所得正丁醇萃取物用步骤(3)所述固定相和流动相溶解，得到样品溶液；
[0016]所述固定相和流动相的体积相等，两者合计用量以铁皮石斛叶正丁醇萃取物样品的质量计为0.10～0.14mL/mg；
[0017](5)取固定相注满液液色谱仪的分离柱，开启速度控制器，使分离柱正转，在500～1000r/min转速下，以0.5～5mL/min的流速注入流动相，等到柱尾端流出流动相时，表明两相已达到平衡，这时将样品溶液由进样阀注入分离柱，波长210～280nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，收集得到的洗脱液通过高效液相进行检测，分别合并与芹菜素
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吡喃葡萄糖
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木糖苷标准品、芹菜素
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木糖
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阿拉伯糖苷标准品保留时间相同的洗脱液，减压蒸除溶剂，得到芹菜素
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吡喃葡萄糖
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木糖苷、芹菜素
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木糖
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阿拉伯糖苷；
[0018]所述样品溶液的进样体积通常小于分离柱柱体积的30％，优选进样体积为分离柱柱体积的5～10％；
[0019]在用高效液相色谱检测洗脱液中的目标物质时，检测条件为：H&E SP ODS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛叶中分离制备两种芹菜素糖苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)原料铁皮石斛叶烘干后粉碎，用70％甲醇的水溶液超声提取，得到甲醇粗提物；(2)甲醇粗提物用纯水溶解，用石油醚萃取，弃去上相石油醚萃取液，下相用乙酸乙酯萃取，弃去上相乙酸乙酯萃取液，下相用正丁醇萃取，将正丁醇萃取液真空回收溶剂，得到正丁醇萃取物；(3)在分液漏斗中加入水、正丁醇和乙酸乙酯，组成混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相作为液液色谱的固定相，下相作为流动相；(4)取步骤(2)所得正丁醇萃取物用步骤(3)所述固定相和流动相溶解，得到样品溶液；(5)取固定相注满液液色谱仪的分离柱，开启速度控制器，使分离柱正转，在500～1000r/min转速下，以0.5～5mL/min的流速注入流动相，等到柱尾端流出流动相时，表明两相已达到平衡，这时将样品溶液由进样阀注入分离柱，波长210～280nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，收集得到的洗脱液通过高效液相进行检测，分别合并与芹菜素
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吡喃葡萄糖
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木糖苷标准品、芹菜素
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阿拉伯糖苷标准品保留时间相同的洗脱液，减压蒸除溶剂，得到芹菜素
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈素红，林婷婷，李波，童胜强，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：