一种乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法技术

本发明专利技术涉及乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法。本发明专利技术通过加热法去除蛋白质，如果需要，再利用有机溶剂进一步去除干扰成分或脂质，得乳制品供试液，采用高效液相色谱法进行乳制品供试液检测，根据标准曲线对乳制品中的人乳寡糖进行定性定量分析。本发明专利技术提供了一种乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法，该方法能够准确、快速的检测乳制品中的人乳寡糖。快速的检测乳制品中的人乳寡糖。

【技术实现步骤摘要】
一种乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法


[0001]本专利技术属于乳制品中人乳寡糖的检测领域，涉及乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法，具体涉及乳制品中乳糖
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N
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四糖和乳糖
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N
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三糖的定性定量检测方法。

技术介绍

[0002]人乳寡糖又称母乳低聚糖(HMOs)，其被发现是一类存在于母乳中的独特低聚糖，母乳中未被消化的低聚糖部分刺激了结肠中双歧杆菌的生长，并且这些双歧杆菌对保护、预防肠道感染有益，因此，母乳低聚糖是先天免疫系统的主要成分。人乳寡糖含量的差别是导致母乳喂养较奶粉喂养更有优势的重要原因之一。其中，乳糖
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N
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四糖(Lacto
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N
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tetraose，LNT)和乳糖
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N
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三糖(Lacto
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N
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tetriaose II，LNTII)是母乳低聚糖(HMOs)中的主要成分，具有多种生理功能，可以减少感染的发生，促进肠道有益菌群的增殖和活性，间接抑制有害菌群生长，维持肠道微生态平衡，从而保护婴儿肠道免受致病菌侵袭。
[0003]值得注意的是，在山羊奶、绵羊奶以及牛奶等乳制品中几乎没有发现这些人乳寡糖，并且。目前，市售乳制品并不含有人乳寡糖，婴儿配方奶粉中添加的大都是低聚乳糖 (Galactooligosaccharides，GOS) 和低聚果糖 (fructooligosaccharide，FOS)，以此来模拟人乳寡糖的部分功能。然而，低聚乳糖和低聚果糖对婴儿的健康生长作用远不及人乳寡糖。所以，向人造奶或乳制品中添加具有生理功能的人乳寡糖，具有明显的社会和经济效益。
[0004]人乳寡糖的种类超过200多种，结构复杂，不同种类人乳寡糖之间的检测方法差异较大。目前，人乳寡糖的检测方法耗时较长，操作复杂，如中国专利文献CN111239313A（申请号CN201811441066.9）公开了一种人乳寡糖的快速轮廓分析方法，该专利技术样品经过低温离心脱脂，加入有机溶剂沉淀除蛋白后，经亲水作用色谱柱分离，以质谱为检测器，得到人乳寡糖组成、结构和含量信息。但是此方法存在着分析仪器昂贵、分析工序耗时不低于3小时、对操作人员要求高等问题。
[0005]乳制品中人乳寡糖含量的测定尚没有成熟的分析方法，天然寡糖对人乳寡糖的检测也存在一定的干扰。中国专利文献CN107192771A（申请号CN201710308499.6）公开了一种母乳低聚糖快速定性定量的方法，主要包括以下步骤：步骤1、样品前处理：取150
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250μL母乳，去除脂肪和蛋白质，得最终上清液，加超纯水稀释，得上样样品；步骤2、对标准品采用超高效液相色谱、质谱，建立标准曲线；步骤3、采用超高效液相色谱将所述上样样品内母乳低聚糖进行不同组分的分离，并利用质谱结合标准曲线，进行定量分析，即得母乳低聚糖含量。上述专利技术在94~106 min范围内可检测12种母乳低聚糖，并对12种母乳低聚糖进行了定量。
[0006]中国专利文献CN107621399A（申请号CN201610556457.X）公开了一种检测母乳中低聚糖的方法，包括对母乳样品进行前处理的步骤，所述前处理具体为：取母乳样品，离心除去上层脂肪，取下层液体并加入醇类溶剂，于﹣40℃～﹣100℃冷冻5
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15min后，离心，取上清液即得；采用液质法对前处理后的母乳中的低聚糖进行定性和定量检测。检测时间为70~
145 min。
[0007]综上，现有技术中，对母乳及动物乳的前处理方法，脱除蛋白质的方法主要有两种，分别是乙醇沉淀法和乙腈沉淀法，脱除脂质的方法主要为离心沉淀法，上述前处理方法对于乳制品中人乳寡糖的检测效果不佳，不能快速准确地对乳制品中的人乳寡糖进行定性定量分析，相对于乳制品中的天然寡糖，乳制品中添加的人乳寡糖含量相对较少，检测其含量时，需避免天然寡糖的干扰，以提高检测准确率。对于人乳及动物乳的后处理检测方法，多采用液质联用法，但是该检测方法存在分析仪器昂贵、分析耗时长、对操作人员要求高等问题。到目前为止还没有报道快速地对乳制品中人乳寡糖进行定性定量的检测方法。

技术实现思路

[0008]专利技术目的：针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种乳制品中人乳寡糖的定性定量检测方法，为乳制品的质量控制提供准确、快速的检测方法。
[0009]术语说明：室温：具有本
公知的含义，一般是指25
±
2℃。
[0010]本专利技术的技术方案：一种乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，首先通过加热法去除乳制品中的蛋白质，对于含有多重复杂成分的乳制品，可以再用与水互溶的有机溶剂进一步除蛋白，或再利用有机溶剂提取法去除脂质，得乳制品供试液，具体如下：一种乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，包括：步骤A. 取乳制品样品，加入 1
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10 倍体积的超纯水混匀，加热至 80
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100℃热处理10
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30 min 后，降至室温，在0
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10℃范围内，2000
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20000
×
g 离心 5
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50 min，收集清液作为供试液。
[0011]优选的，步骤A加入超纯水后，加热至85
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100℃热处理 20
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30 min；更优选加热至90
‑
100℃。
[0012]优选的，步骤A离心条件为 0
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5℃范围内，5000
‑
15000
×
g 离心 5
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30 min；更优选为 4℃，10000
‑
15000
×
g 离心 10
‑
20 min。
[0013]优选的，如果乳制品成分复杂，本专利技术所述乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，还包括：步骤B.向步骤A所述供试液中，加入有机溶剂，振荡或涡旋混匀，于 0
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10℃范围内离心，2000
‑
20000
×
g 离心 5
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50 min 除去沉淀，收集清液作为供试液，所述有机溶剂与水互溶，选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈中的一种或多种；优选的，所述有机溶剂的加入量为步骤A超纯水体积的0.5
‑
1倍。
[0014]优选的，所述离心条件为 0
‑
5℃，5000
‑
15000
×
g 离心 5
‑
30 min；更优选为 4℃， 10000
‑
15000
×
g 离心 10
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20 min。
[0015]优选的，如果乳制品成分复杂，本专利技术所述乳制品中人乳寡糖检测的预处理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，其特征在于，通过加热法后离心的方法得供试液，包括：步骤A. 取乳制品样品，加入 1
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10 倍体积的超纯水混匀，加热至 80
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100℃热处理10
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30 min 后，降至室温，在0
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10℃范围内，离心，收集清液作为供试液。2.如权利要求1所述乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，其特征在于，还包括步骤B：向步骤A所得供试液中，加入有机溶剂，振荡或涡旋混匀，于 0
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10℃范围内离心，收集清液作为供试液，所述有机溶剂与水互溶；优选的，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈中的一种或多种；优选的，所述有机溶剂的加入量为步骤A超纯水体积的0.5
‑
1倍。3.如权利要求1或2所述乳制品中人乳寡糖检测的预处理方法，其特征在于，还包括步骤C. 向所述供试液中，加入有机溶剂，振荡或涡旋混匀，于 0
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10℃范围内离心，收集水相作为供试液；所述有机溶剂选自丁醇、二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯中的一种或多种；优选的，所述有机溶剂的加入量为步骤A超纯水体积的0.7
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1.5倍。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的预处理方法，其特征在于，满足以下条件之一项或多项：i. 步骤A加入超纯水后，加热至85
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100℃热处理20
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30 min；ii. 步骤A加入超纯水后，加热至90
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100℃热处理20
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30min；iii.. 步骤B所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈中的一种或多种；iv. 步骤A和步骤B所述离心条件为0
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5℃，5000
‑
15000
×
g 离心5
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30 min；v. 步骤A和步骤B所述离心条件为4℃，10000
‑
15000
×
g 离心10
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20 min；vi. 步骤C所述有机溶剂选自丁醇、二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯中的一种或多种；vii.所述人乳寡糖包括乳糖
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N

【专利技术属性】
技术研发人员：方诩，牛康乐，姜福娇，黄爱玲，宋江辉，
申请(专利权)人：山东恒鲁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：