重组酵母菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及用于生成乳糖

【技术实现步骤摘要】
重组酵母菌及其应用


[0001]本专利技术涉及用于生成乳糖
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三糖的重组酵母及其应用，属于生物工程领域。

技术介绍

[0002]母乳低聚糖（Human milk oligosaccharides，HMOs）是一类复合低聚糖，由单糖及衍生物、唾液酸等结构单元通过糖苷键连接而成。然而，人们对它的认知却历经一百多年。
[0003]早在1886年，澳大利亚儿科医生和微生物学家Escherich就发现婴儿肠道细菌与消化功能存在联系。1900年，Moro和Tissier两位研究者分别证实母乳喂养和人工喂养的婴儿粪便中细菌组成不同。是否母乳中特殊存在的成分是导致婴儿肠道细菌不同的原因，基于此，1926年， Sch
ö
nfeld发现母乳的乳清中含有促进两歧双歧杆菌生长的益生因子。那么，究竟是乳清中的那些成分是促进双歧杆菌的生长的因素。1930年，法国科学家Polonowski和Lespagnol从母乳乳清中检测到具有碳水化合物特征的组分，命名为“gynolactose（乳寡糖）”。1954年，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于生成乳糖
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三糖的酶，根据Carbohydrate
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Active
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Enzymes即CAZy数据库分类，属于糖苷水解酶28家族的酶。2.如权利要求1所述用于生成乳糖
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三糖的酶，所述糖苷水解酶28家族的酶，其特征在于，为乙酰氨基葡萄糖基转移酶β
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acetylglucosaminyl transferase；优选的，所述生成乳糖
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三糖的酶，包括氨基酸序列与SEQ ID NO:1、或SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3具有至少70%、至少71%、至少72%、至少73%、至少74%、至少75%、至少76%、至少77%、至少78%、至少79%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少100%的序列一致性的酶，且具有产生乳糖
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三糖的活性。3.如权利要求1
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2所述用于生成乳糖
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三糖的酶，其特征在于，为来源于脑膜炎奈瑟氏菌Neisseria meningitidis的乙酰氨基葡萄糖基转移酶β
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acetylglucosaminyl transferase；所述用于生成乳糖
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三糖的乙酰氨基葡萄糖基转移酶，优选的，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；或包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1具有至少70%的氨基酸序列相同性，或包含与SEQ ID NO:1具有至少70%的氨基酸序列相同性。4.如权利要求1
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2所述用于生成乳糖
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三糖的酶，其特征在于，为来源于幽门螺旋杆菌Helicobacter pylori的乙酰氨基葡萄糖基转移酶β
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acetylglucosaminyl transferase；所述用于生成乳糖
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三糖的乙酰氨基葡萄糖基转移酶，优选的，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；或包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2具有至少70%的氨基酸序列相同性，或包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:2具有至少70%的氨基酸序列相同性。5.如权利要求1
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2所述用于生成乳糖
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三糖的酶，其特征在于，为来源于肠道沙门氏菌 (Salmonella enterical) 的乙酰氨基葡萄糖基转移酶β
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acetylglucosaminyl transferase；所述用于生成乳糖
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三糖的乙酰氨基葡萄糖基转移酶，其具有SEQ ID NO:3 所示氨基酸序列；或与SEQ ID NO:3具有至少70%的氨基酸序列一致性，或包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO:3具有至少70%的氨基酸序列一致性。6.一种生成乳糖
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三糖（lacto
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triose II）的重组酵母，其特征在于，含有权利要求1
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5所述的乙酰氨基葡萄糖基转移酶β
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acetylglucosaminyl transferase的氨基酸序列及其编码核酸序列；所述重组细胞是酵母细胞 ，优选的，包括假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属、或耶氏酵母属细胞；进一步优选的，为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxinus)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、禾本红酵母 (Rhodotorula graminis) 、巴氏酵母 (Saccha romyces pastorianus)等细胞；所述重组酵母为重组克鲁维酵母；优选的，为乳酸克鲁维重组酵母菌株或重组马克斯克鲁维重组酵母菌株。7.如权利要求6所述重组酵母，其特征在于，包含标志物基因的破坏；
所述破坏，优选的，是指部分标志物基因的破坏；所述标志物基因，优选的，包含β
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半乳糖苷酶或者β
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半乳糖苷酶的部分氨基酸序列，与SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:5至少50%、至少51%、至少52%、至少53%、至少54%、至少55%、至少60%、至少61%、至少62%、至少63%、至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：方诩，李凤仪，韩丽娟，殷文成，
申请(专利权)人：山东恒鲁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：