减少来自重组蛋白生产过程中的杂质的方法技术

本发明专利技术涉及一种减少单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液中的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)的量的方法，所述方法涉及使用合成深度过滤器。本发明专利技术可用于单克隆抗体的纯化。发明专利技术可用于单克隆抗体的纯化。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】减少来自重组蛋白生产过程中的杂质的方法


[0001]本专利技术涉及减少单克隆抗体(mAb)的溶液中产物相关杂质(NAPRI)量的方法。特别是，本专利技术的方法涉及使用深度过滤器以减少非聚集体产物相关杂质(NAPRI)的量。

技术介绍

[0002]单克隆抗体(mAbs)(例如双特异性抗体(BsAbs))是重要的治疗方式(1)。它们的高分子大小和复杂的折叠结构使得哺乳动物细胞培养物成为表达这些蛋白质的一种理想手段(2)。
[0003]哺乳动物细胞培养物的表达会导致产物和工艺相关的杂质，在纯化mAb分子时，必须将其去除。用于除去这些杂质的纯化步骤可包括离心、深度过滤、蛋白A色谱、病毒灭活、阳离子交换色谱、阴离子交换色谱、多峰(混合模式)色谱、病毒过滤和超滤。
[0004]深度过滤器广泛用于从液体介质中去除与工艺相关的杂质，从而“澄清”介质，并防止后续纯化步骤中出现膜结垢。例如，经细胞培养物中收获的含抗体的介质，通常会通过深度过滤器以去除细胞培养工艺相关的固体，不溶性组分，例如宿主细胞蛋白(HCP)和DNA污染物(3)，以及外源和内源病毒(4)，在最终过滤前通过微滤膜(5)或柱色谱法。
[0005]深度过滤器包含多孔材料，例如纤维素纸浆、硅藻土、聚丙烯纤维和二氧化硅，且一些深度过滤器包含一层以上的多孔材料(6)。
[0006]在蛋白A纯化和病毒灭活之后，还观察到深度过滤器通过静电或疏水相互作用去除产物相关复合种(7)。
[0007]在蛋白质生产过程中，产物相关杂质包括高阶复合种，其为包含产物聚集体的复合物。这些产物相关聚集体和杂质可能包括HCP和DNA(4)。其他非聚集体产物相关杂质包括未反应的(未配对的)半抗体、非共价或共价连接的同二聚体及非共价连接的异二聚体，其与目标产物密切相关且难以通过标准工艺(如蛋白A纯化(8))去除。
[0008]可以通过偏向特定异二聚体的形成的“knobs
‑
into
‑
holes(突出物入孔)”策略(9)，以较高的产率来生产包含来自不同单特异性单克隆抗体的重链和轻链的双特异性异二聚体抗体。其是基于以下原理：“突出物(knobs)”(一个抗体链的区域中以大氨基酸取代小氨基酸)优先咬合“孔(holes)”(另一个抗体链的对应区域中以小氨基酸取代大氨基酸)，以促进特定链之间的选择性异二聚作用。然而，该方法可能会产生另外的非聚集体副产物，例如，由错误配对的“突出物
─
突出物(knob
‑
knob)”和“孔
─
孔(hole
‑
hole)”产生的副产物。
[0009]对于提供减少非聚集体产物相关杂量的方法仍存有需求。

技术实现思路

[0010]本专利技术提供了新颖的方法和用途，其通过使用包含二氧化硅和聚丙烯纤维的深度过滤器，来减少单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液中的非聚集体产物相关杂质的量。专利技术人发现，使用这种深度过滤器使得非聚集体产物相关杂质减少。
[0011]如本文所讨论的，在重组蛋白生产过程中，深度过滤器已知会减少某些工艺相关杂质，例如HCP和DNA，以及聚集产物相关杂质。然而，专利技术人没有预期深度过滤器会减少非聚集体产物相关杂质。从最广泛的意义上来说，本专利技术涉及这个意料之外的发现。
[0012]由此，本专利技术的一个方面提供一种减少单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液中的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)的量的方法，其中该方法包含将单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液通过包含二氧化硅和聚丙烯纤维的深度过滤器，以移除来自缓冲溶液的一部分NAPRI。通过将mAbs的缓冲溶液通过深度过滤器，来减少NAPRI量。
[0013]在另一方面，本专利技术提供一种生产具有经减少的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)量的单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液的方法，其中该方法包含将单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液通过包含二氧化硅和聚丙烯纤维的深度过滤器，以生产具有经减少的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)量的单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液。通过将mAbs的缓冲溶液通过深度过滤器，来减少NAPRI量。
[0014]在另一方面，本专利技术提供一种包含二氧化硅和聚丙烯纤维的深度过滤器用于减少单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液中的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)量的用途。
[0015]在另一方面，本专利技术提供一种单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液，其中非聚集体产物相关杂质(NAPRI)量相对于该mAb量已经减少，该单克隆抗体的缓冲溶液是通过执行本专利技术的任一方法或通过本专利技术的任一用途而生产的。
[0016]在另一方面，本专利技术提供一种生产mAb的方法，该方法包含下列步骤：
[0017](a)培养包含编码mAb的核酸的宿主细胞，使得该mAb与NAPRI一起被生产；
[0018](b)形成该mAb和NAPRI的缓冲溶液；
[0019](c)通过执行本专利技术的任一方法或通过本专利技术的任一用途，减少NAPRI的量；以及可选择地
[0020](d)将该mAb自该缓冲溶液分离。
[0021]以下实施例是本专利技术的方面的实施例。
[0022]在一些实施例中，mAb的缓冲溶液是mAb的浓缩缓冲溶液。在一些实施例中，mAb的浓缩缓冲溶液的浓度介于2mg/mL与20mg/mL之间、5mg/mL至15mg/mL之间或5mg/mL至10mg/mL之间。
[0023]在一些实施例中，mAb是多特异性抗体。在一个实施例中，mAb是双特异性抗体。在一些实施例中，mAb是抗体片段。在一些实施例中，mAb是包含抗体或抗体片段和另一生物活性多肽的抗体融合蛋白。
[0024]在一些实施例中，单克隆抗体的缓冲溶液在低于环境温度的温度下通过深度过滤器。例如，该温度可介于约4℃至约22℃之间。该温度可介于约10℃至约21℃之间。该温度可介于约15℃至约20℃之间。
[0025]本专利技术允许大规模的抗体纯化。可以将大量抗体装载到二氧化硅和聚丙烯纤维深度过滤器上。例如，质量负载可以超过100g/m2、超过200g/m2、超过300g/m2、超过500g/m2或超过700g/m2。质量负载可以高达1500g/m2、2000g/m22500g/m2。流速可以在约1L/min*m2至约10L/min*m2的范围内，例如1.5L/min*m2至约8L/min*m2。在优选的实例中，流速在约3L/min*m2至约6L/min*m2的范围内或约4.3L/min*m2。单位“L/min*m
2”表示每分钟每单位面积(m2)流过过滤器的体积(升)。
[0026]甚至在通过深度过滤器之前，NAPRI都以相对较低的浓度存在于初始缓冲的mAb溶液中，例如低于mAb的浓度至少1.5倍、至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少1000倍或至少10,000倍。相对于mAb的浓度，本专利技术允许进一步降低NAPRI浓度。
[0027]类似地，减少相对于m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种减少单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液中的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)的量的方法，其通过使所述单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液通过包含二氧化硅和聚丙烯纤维的合成深度过滤器，以移除来自所述缓冲溶液的一部分NAPRI，其中所述NAPRI包含不完全或不正确组装的mAb多肽。2.一种生产具有经减少的量的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)的单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液的方法，其通过使单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液通过包含二氧化硅和聚丙烯纤维的合成深度过滤器，以生产所述具有经减少的量的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)的单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液，其中所述NAPRI包含不完全或不正确组装的mAb多肽。3.包含二氧化硅和聚丙烯纤维的合成深度过滤器用于减少单克隆抗体(mAb)的缓冲溶液中的非聚集体产物相关杂质(NAPRI)的量的用途，其中所述NAPRI包含不完全或不正确组装的mAb多肽。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据权利要求3所述的用途，其中所述mAb是多特异性抗体。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述mAb是包含抗体或抗体片段和另一生物活性多肽的抗体融合蛋白。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中使所述单克隆抗体的缓冲溶液在低于环境温度的温度下通过所述深度过滤器。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述NAPRI是缺少所述mAb的一个或多个多肽链的多肽。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述NAPRI是包含与所述mAb不同的多肽链排列的多肽。9.根据权利要求1至6中任一项所述的方法、或根据权利要求3至6中任一项所述的用途，其中所述NAPRI包含两条具有相同氨基酸序列的重链。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述mAb的缓冲溶液已经经受过亲和层析。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述深度过滤器是包含多级深度过滤介质的多层深度过滤器。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述深度过滤器不含有硅藻土。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其进一步包含在所述mAb的缓冲溶液已经通过所述深度过滤器之后测量所述mAb的缓冲溶液中的NAPRI浓度。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法、或根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述mAb的缓冲溶液在通过所述合成深度过滤器之前已经经受过层析。15.根据权利要求14所述的方法或用途，其中所述层析是亲和层析、阴离子交换层析、...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：