【技术实现步骤摘要】
漆酶重组蛋白及其应用
[0001]本专利技术涉及酶工程
,具体涉及漆酶重组蛋白及其应用。
技术介绍
[0002]随着生物技术的快速发展,酶蛋白已广泛应用于食品、化工、环境、能源等各领域,推动了工业与能源的可持续发展。但是,天然酶一般难以满足工业需求,需要通过定向进化手段对其性能进行改造,如提高酶活性、稳定性、底物特异性和立体选择性等。
[0003]定向进化是在实验室模拟自然进化过程,其中重要的一步就是建立高质量突变库,供下游筛选。目前,虽然突变库构建方法已得到广泛开发,如易错PCR、基因重组、CASTing、序列饱和突变等,但突变库质量较低,存在很多无义突变或重组,因此需要筛选较大容量的突变库才能得到目标突变体。这就很大程度上限制了定向进化的高效进行。因此构建容量较小但高质量的突变库尤为重要。
[0004]结构域是因多肽链上相邻的超二级结构紧密联系,进一步折叠而成的一个或多个相对独立的致密三维实体。从功能角度看,多结构域酶蛋白活性中心往往位于结构域之间,主要可能是因为通过结构域容易构建具有特定三维排布的活性中心,而且各个结构域之间常只有一段柔性肽链相连,使结构域间容易发生相对运动,有利于活性中心结合底物、别构中心结合调节物和发生别构效应,利于酶对反应的催化。
[0005]在多结构域蛋白质中,一些蛋白质的各结构域没有明确的功能分工,或各结构域共同存在才得以行使功能。本领域技术人员通常认为各结构域之间的联系是不能被破坏的,即替换掉任意结构域很可能会使蛋白质整体失去功能。漆酶(EC 1.10. ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.漆酶突变体,为按照包括如下步骤的方法制备得到的:将来自于白腐真菌的漆酶蛋白LCC1、来自于白腐真菌的漆酶蛋白LCC2和来自于担子菌的漆酶蛋白Mrl2的氨基酸序列一起进行序列对比,得到氨基酸比对序列矩阵;以所述氨基酸比对序列矩阵的第123
‑
141位之间的某个位置作为重组位点1,以所述氨基酸比对序列矩阵的第306
‑
345位之间的某个位置作为重组位点2;通过所述重组位点1和/或所述重组位点2将所述LCC1、所述LCC2和所述Mrl2这三个漆酶蛋白中的至少两个进行重组,得到重组后漆酶蛋白。2.根据权利要求1所述的漆酶突变体,其特征在于:所述重组方式为如下任一:(A1)所述LCC1和所述LCC2仅在所述重组位点1处发生重组;(A2)所述LCC1和所述LCC2仅在所述重组位点2处发生重组;(A3)所述LCC1和所述LCC2在所述重组位点1和所述重组位点2处同时发生重组;(A4)所述LCC1和所述Mrl2在所述重组位点1处发生重组;(A5)所述LCC1和所述Mrl2仅在所述重组位点2处发生重组;(A6)所述LCC1和所述Mrl2在所述重组位点1和所述重组位点2处同时发生重组;(A7)所述LCC2和所述Mrl2在所述重组位点1处发生重组;(A8)所述LCC2和所述Mrl2仅在所述重组位点2处发生重组;(A9)所述LCC2和所述Mrl2在所述重组位点1和所述重组位点2处同时发生重组;(A10)所述LCC1、所述LCC2和所述Mrl2在所述重组位点1和所述重组位点2处同时发生重组。3.根据权利要求2所述的漆酶突变体,其特征在于:所述(A1)为:1)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分和所述LCC2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1后面的部分重组;或,2)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1后面的部分和所述LCC2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1前面的部分重组;所述(A2)为:1)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2前面的部分和所述LCC2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点2后面的部分重组;或,2)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分和所述LCC2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点2前面的部分重组;所述(A3)为:1)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分、所述LCC2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1和所述重组位点2之间的部分和所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分重组;或,2)所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分、所述LCC1在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1和所述重组位点2之间的部分和所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分重组;所述(A4)为:1)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1后面的部分重组;或,2)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1后面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1前面的部分重组;所述(A5)为:1)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2前面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点2后面的部分重组;或,2)所述
LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点2前面的部分重组;所述(A6)为:1)所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分、所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1和所述重组位点2之间的部分和所述LCC1位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分重组;或,2)所述Mrl2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分、所述LCC1在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1和所述重组位点2之间的部分和所述Mrl2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分重组;所述(A7)为:1)所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1后面的部分重组;或,2)所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1后面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1前面的部分重组;所述(A8)为:1)所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2前面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点2后面的部分重组;或,2)所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分和所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点2前面的部分重组;所述(A9)为:1)所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分、所述Mrl2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1和所述重组位点2之间的部分和所述LCC2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的部分重组;或,2)所述Mrl2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点1前面的部分、所述LCC2在所述氨基酸比对序列矩阵中位于所述重组位点1和所述重组位点2之间的部分和所述Mrl2位于所述氨基酸比对序列矩阵中所述重组位点2后面的...
【专利技术属性】
技术研发人员:朱蕾蕾,杨建花,谭子瑊,
申请(专利权)人:中国科学院天津工业生物技术研究所,
类型:发明
国别省市:
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