Rae1-Nup98特异性结合多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了Rae1

【技术实现步骤摘要】
Rae1
‑
Nup98特异性结合多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及Rae1
‑
Nup98复合物蛋白特异性结合多肽及其应用，具体涉及人源Rae1
‑
Nup98蛋白表达、纯化、结晶方法以及小分子多肽的发现和应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
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CoV
‑
2，严重急性呼吸综合征冠状病毒2)是单链RNA病毒，基因组全序列显示其与SARS
‑
CoV的基因组的相似性为79％，大部分蛋白都相似。它们都具有4个主要的结构蛋白：刺突蛋白(Spike Protein，S蛋白)、包膜蛋白(EnvelopProtein，E蛋白)、膜蛋白(Membrane Protein，M蛋白)、核衣壳蛋白(Nucleoprotein， N蛋白)，以及16个非结构蛋白(nsp1
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16)，还有一些小的辅助蛋白，如ORF3a、3b、 6、7a、7b、8a、8b、9b。研究表明这些小的辅助蛋白在病毒入侵宿主细胞的过程中发挥着重要的作用。由于SARS
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CoV
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2为RNA病毒，容易在复制过程中出错，大量复制可引起多种变异，并且变异速度极快。遗传变异株表现出增强的传播性，导致更严重的疾病或降低当前诊断、疫苗和治疗的有效性。奥密克戎(英文名：Omicron，编号：B.1.1.529)是突变株，大量突变聚集在刺突蛋白(S蛋白)中。研究表明，变异株不仅在刺突蛋白的关键残基中含有突变，以逃避中和抗体，而且还通过上调先天免疫拮抗剂(如 SARS
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CoV
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2ORF9b和ORF6)的亚基因组RNA和蛋白质水平来增强感染期间对宿主先天免疫的抑制。
[0003]ORF9b和ORF6是冠状病毒的辅助蛋白，在SARS
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CoV
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2和SARS
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CoV中均存在。ORF9b 通过靶向线粒体多功能接头蛋白TOM70来抑制干扰素的产生，而ORF6通过阻断细胞 mRNA和蛋白质的双向核质转运来抑制宿主抗病毒免疫反应。SARS
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CoV
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2ORF6比 SARS
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CoV ORF6更有效地拮抗宿主抗病毒免疫，为SARS
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CoV
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2感染患者的无症状感染或延迟症状发作提供了可能的解释。Nup98(核孔蛋白98，Nucleoporin 98)是核孔复合体的一个组成部分，与RNA输出因子Rae1相互作用以结合单链RNA并促进mRNA 通过核孔复合体的易位。SARS
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CoV的辅助蛋白ORF6已被证明通过与核输入因子的相互作用阻断STAT1的核输入来阻断干扰素途径的诱导。最近研究也显示SARS
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CoV
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2 ORF6能够结合Rae1
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Nup98(Li T.,Wen Y.,Guo H.,Yang T.,Yang H.and Ji X.2021. Molecular Mechanism of SARS
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CoVs Orf6 Targeting the Rae1
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Nup98 Complex toCompete With mRNA Nuclear Export.Front Mol Biosci.8:813248.；Addetia A., Lieberman N.A.P.,Phung Q.,Hsiang T.Y.,Xie H.,Roychoudhury P.,et al.2021. SARS
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CoV
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2ORF6 Disrupts Bidirectional Nucleocytoplasmic Transport throughInteractions with Rae1 and Nup98.mBio.12(2)；Miorin L.,Kehrer T., Sanchez
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Aparicio M.T.,Zhang K.,Cohen P.,Patel R.S.,et al.2020.SARS
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CoV
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2 Orf6 hijacks Nup98 to block STAT nuclear import and antagonize interferonsignaling.Proc Natl Acad Sci U S A.117(45):28344
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28354.)，拮抗宿主的抗病毒天然免疫反应。然而，SARS
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CoV
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2ORF6和SARS
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CoV ORF6与Rae1
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Nup98发生相互作用的方式与机制一直不清楚。因此，进一步研究ORF6多肽和Rae1
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Nup98相互作用机制，开发更为有效的新型冠状病毒的治疗药物，对于新型冠状病毒的临床
治疗和诊断试剂的研发均具有重要的科学意义和广泛的应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的一个目的是提供一种亲和力高的Rae1
‑
Nup98蛋白特异性结合多肽。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术首先提供了多肽，名称为ORF6
‑
C3 Q56E，所述多肽可为下述任一种：
[0006]A1)氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽；
[0007]A2)将SEQ ID No.1的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的多肽具有80％以上的同一性且特异性结合Rae1
‑
Nup98蛋白的多肽；
[0008]A3)在A1)或A2)的N端和/或C端连接标签得到的融合多肽；
[0009]A4)在A1)或A2)的N端和/或C端和/或氨基酸侧链基团上进行修饰得到的多肽衍生物。
[0010]所述多肽ORF6
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C3 Q56E为特异性结合Rae1
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Nup98蛋白的多肽，相比ORF6野生型多肽，亲和力提升了6倍。
[0011]所述Rae1
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Nup98蛋白为RNA输出因子Rae1和Nup98(核孔蛋白98，Nucleoporin 98)相互作用形成的核孔复合物蛋白，简称Rae1
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Nup98蛋白。
[0012]进一步地，所述Rae1
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Nup98蛋白可为人源Rae1
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Nup98蛋白。
[0013]在本专利技术的一个实施方案中，所述Rae1
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Nup98蛋白为Rae1(31
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368)
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.多肽，其特征在于，所述多肽为下述任一种：A1)氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽；A2)将SEQ ID No.1的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的多肽具有80％以上的同一性且特异性结合Rae1
‑
Nup98蛋白的多肽；A3)在A1)或A2)的N端和/或C端连接标签得到的融合多肽；A4)在A1)或A2)的N端和/或C端和/或氨基酸侧链基团上进行修饰得到的多肽衍生物。2.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为下述任一种：B1)编码序列是SEQ ID No.2所示的DNA分子；B2)核苷酸序列是SEQ ID No.2所示的DNA分子；B3)与B1)或B2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1中所述多肽的DNA分子；B4)在严格条件下与B1)或B2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1中所述多肽的DNA分子。3.生物材料，其特征在于，所述生物材料为下述C1)至C3)中的任一种：C1)含有权利要求2所述核酸分子的表达盒；C2)含有权利要求2所述核酸分子的重组载体、或含有C1)所述表达盒的重组载体；C3)含有权利要求2所述核酸分子的重组微生物、或含有C1)所述表达盒的重组微生物、或...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔胜，高小攀，朱凯祥，秦博，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，
类型：发明
国别省市：