一种连续提取质粒DNA的装置和方法制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种连续提取质粒DNA的装置和方法。通过本发明专利技术的装置及方法能够以连续提取的方式，快速地获得高产量、高质量的质粒DNA，易于操作，并且装置中的各组件可以重复利用，大大降低了生产成本。大大降低了生产成本。大大降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种连续提取质粒DNA的装置和方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，尤其涉及一种连续提取质粒DNA的装置和方法。

技术介绍

[0002]近些年，随着生物制药领域的不断发展，对质粒DNA的需求量逐渐增加，如何获得高纯度、高质量的质粒DNA变得尤为重要。应用于基因治疗和细胞治疗的质粒DNA，主要从大肠杆菌中，通过提取、超滤浓缩、纯化(离子交换作用、疏水相互作用、脱盐)等工艺来获得。
[0003]提取工艺对于高质量的质粒DNA的获得有非常重要的作用。目前常用的质粒DNA的提取方法包括碱裂解法、热裂解法和机械破碎法，其中碱裂解法的提取效果较好，质量高，而且重复性较高，例如，王宾、李小林(CN 1948481 A)公开了一种碱裂解法提取质粒的方法。对于高质量质粒DNA需求量的不断增加，需要开发更加高效、简便快速的获取高产量的质粒DNA的工艺。

技术实现思路

[0004]一方面，本专利技术提供一种连续提取质粒DNA的装置，包括提供菌体悬浮液的容器1、提供裂解试剂的容器2、裂解反应器3、提供中和试剂的容器4、中和反应器5、第一蠕动泵6、第二蠕动泵7、第三蠕动泵8以及离心机9；
[0005]其中所述裂解反应器3和中和反应器5均配备有搅拌装置10；
[0006]其中所述提供菌体悬浮液的容器1经第一蠕动泵6、提供裂解试剂的容器2经第二蠕动泵7与裂解反应器3的进料口通过三通连接；所述裂解反应器3的出料口、提供中和试剂的容器4经第三蠕动泵8与中和反应器5的进料口通过三通连接；
[0007]其中裂解反应器3和中和反应器5的进料口和出料口在竖直方向上有高度差。
[0008]在一些优选的实施方案中，所述裂解反应器3和中和反应器5是进料口位于下部、出料口位于上部的容器；或者
[0009]所述裂解反应器3和中和反应器5是进料口位于上部、出料口位于下部的单口容器。
[0010]在一些优选的实施方案中，所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)是单口容器时，其出料口与蠕动泵连接。
[0011]在一些优选的实施方案中，所述裂解反应器3和中和反应器5为进料口位于下部、出料口位于上部的高硼硅生物补料瓶。高硼硅生物补料瓶可以通过商购获得。
[0012]在另一些优选的实施方案中，单口容器为黄口瓶，并配备有蠕动泵，其中所述黄口瓶的出料端口与蠕动泵连接。黄口瓶也可以通过商购获得。
[0013]另一方面，本专利技术提供一种连续提取质粒DNA的方法，该方法使用本申请如上所述的装置。
[0014]在一些优选的实施方式中，本专利技术连续提取质粒DNA的方法包括：
[0015](1)在所述裂解反应器3中在搅拌下将菌体悬浮液与裂解试剂混合进行裂解，得到
菌体裂解液；
[0016](2)在所述中和反应器5中在搅拌下将所述菌体裂解液与中和试剂混合进行中和，得到混合液；
[0017](3)将混合液离心，取上清液，得到质粒。
[0018]优选地，所述步骤(1)和步骤(2)的搅拌速度为100
‑
300rpm。
[0019]更优选地，所述菌体悬浮液与裂解试剂通过相同内径的管道以流速比为1:1
‑
1:2进入所述裂解反应器3中进行裂解，裂解时间为1
‑
10min。
[0020]进一步优选地，所述菌体裂解液与中和试剂通过相同内径的管道以流速比为2:1
‑
1:1进入所述中和反应器5中进行中和，中和时间为1
‑
10min。
[0021]本申请的装置和方法可以连续提取的方式，快速地获得高产量、高质量的质粒DNA，易于操作，并且装置中的各组件可以重复利用，大大降低了生产成本。
附图说明
[0022]图1为本申请一个实施方案的连续提取质粒DNA装置示意图；
[0023]图2为本申请一个实施方案的连续提取质粒DNA装置示意图；
[0024]图3为本申请一个实施方案中的澄清液醇沉核酸电泳图谱；
[0025]图4为本申请一个实施方案中的澄清液醇沉核酸电泳图谱。
具体实施方式
[0026]以下，适当地参照附图详细说明本专利技术的连续提取质粒DNA的方法和装置的实施方式。但是会有省略不必要的详细说明的情况。例如，有省略对已众所周知的事项的详细说明、实际相同结构的重复说明的情况。这是为了避免以下的说明不必要地变得冗长，便于本领域技术人员的理解。此外，附图及以下说明是为了本领域技术人员充分理解本申请而提供的，并不旨在限定权利要求书所记载的主题。
[0027]本申请所公开的“范围”以下限和上限的形式来限定，给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的，选定的下限和上限限定了特别范围的边界。这种方式进行限定的范围可以是包括端值或不包括端值的，并且可以进行任意地组合，即任何下限可以与任何上限组合形成一个范围。例如，如果针对特定参数列出了60
‑
120和80
‑
110的范围，理解为60
‑
110和80
‑
120的范围也是预料到的。此外，如果列出的最小范围值1和2，和如果列出了最大范围值3，4和5，则下面的范围可全部预料到：1
‑
3、1
‑
4、1
‑
5、2
‑
3、2
‑
4和2
‑
5。在本申请中，除非有其他说明，数值范围“a
‑
b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0
‑
5”表示本文中已经全部列出了“0
‑
5”之间的全部实数，“0
‑
5”只是这些数值组合的缩略表示。另外，当表述某个参数为≥2的整数，则相当于公开了该参数为例如整数2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12等。
[0028]如果没有特别的说明，本申请的所有实施方式以及可选实施方式可以相互组合形成新的技术方案。
[0029]如果没有特别的说明，本申请的所有技术特征以及可选技术特征可以相互组合形成新的技术方案。
[0030]如果没有特别的说明，本申请所提到的“包括”和“包含”表示开放式，也可以是封
闭式。例如，所述“包括”和“包含”可以表示还可以包括或包含没有列出的其他组分，也可以仅包括或包含列出的组分。
[0031]如果没有特别的说明，在本申请中，术语“或”是包括性的。举例来说，短语“A或B”表示“A，B，或A和B两者”。更具体地，以下任一条件均满足条件“A或B”：A为真(或存在)并且B为假(或不存在)；A为假(或不存在)而B为真(或存在)；或A和B都为真(或存在)。
[0032]本申请提供一种连续提取质粒DNA的装置，包括提供菌体悬浮液的容器1、提供裂解试剂的容器2、裂解反应器3、提供中和试剂的容器4、中和反应器5、第一蠕动泵6、第二蠕动泵7、第三蠕动泵8以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种连续提取质粒DNA的装置，包括提供菌体悬浮液的容器(1)、提供裂解试剂的容器(2)、裂解反应器(3)、提供中和试剂的容器(4)、中和反应器(5)、第一蠕动泵(6)、第二蠕动泵(7)、第三蠕动泵(8)以及离心机(9)；其中所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)均配备有搅拌装置(10)；其中所述提供菌体悬浮液的容器(1)经第一蠕动泵(6)、提供裂解试剂的容器(2)经第二蠕动泵(7)与裂解反应器(3)的进料口通过三通连接，所述裂解反应器(3)的出料口、提供中和试剂的容器(4)经第三蠕动泵(8)与中和反应器(5)的进料口通过三通连接；其中裂解反应器(3)和中和反应器(5)的进料口和出料口在竖直方向上有高度差。2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)是进料口位于下部、出料口位于上部的容器；或者所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)是进料口位于上部、出料口位于下部的单口容器；优选地，所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)是单口容器时，其出料口与蠕动泵连接。3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)为进料口位于下部、出料口位于上部的高硼硅生物补料瓶；或者所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)为黄口瓶，并配备有蠕动泵，其中所述黄口瓶的出料端口与蠕动泵连接。4.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述搅拌装置(10)为磁力搅拌器。5.一种连续提取质粒DNA的方法，该方法使用权利要求1
‑
4中任一项所述的装置，包括如下步骤：(1)在裂解反应器中在搅拌下将菌体悬浮液与裂解试剂混合进行裂解，得到菌体裂解液；(2)在中和反应器中在搅拌下将所述菌体裂解液与中和试剂混合进行中和，得到混合液；(3)将混合液离心，取上清液，得到质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁薪安，何霆，丁艳萍，田海霞，胡雪莲，
申请(专利权)人：北京艺妙神州医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：