一种多杀菌素的简易提取方法技术

本发明专利技术涉及一种多杀菌素的简易提取方法，包括：步骤1、预处理：将刺糖多胞菌发酵液调节pH为9

【技术实现步骤摘要】
一种多杀菌素的简易提取方法


[0001]本专利技术涉及多杀菌素提取
，具体涉及一种多杀菌素的简易提取方法。

技术介绍

[0002]多杀菌素(Spinosad)又名多杀霉素，是在多刺甘蔗多孢菌(Saccharopolyspora spinosa) 发酵液中提取的一种大环内酯类无公害高效生物杀虫剂。被广泛应用于鳞翅目、双翅目和缨翅目害虫的防治上。
[0003]多杀菌素是刺糖多孢菌的次级代谢产物，其制备也通常是从刺糖多孢菌发酵液中经提取分离而得；目前，从刺糖多孢菌发酵液中提取分离多杀菌素的方法主要有两种，一种是如CN 101560231公开的一种大孔树脂吸附提取工艺，大孔树脂吸附提取工艺目前存在吸附量小、解吸附困难、处理量小、对设备要求高、工序多、耗时长、成本较高等缺陷，难以适应大规模工业化生产的要求；另一种是如申请号为CN201010159985.4的中国专利一种从刺糖多孢菌发酵液中提取多杀菌素的工艺中所公开的方法，其存在的问题是：整个工艺过程工艺路线比较长，从而导致收率低，此外，提取过程中，不仅需要用到高介电常数极性有机溶剂浸泡，还需要用到低节点常数或高碳醇类有机溶剂萃取，导致有机溶剂用量极大，从而导致浓缩过程中不仅耗能大，而且浓缩过程耗时长，尤其高高介电常数极性有机溶剂，使这一问题更为突出。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种多杀菌素的简易提取方法，其工艺步骤少，有机溶剂用量少，能耗低，适合于工业化生产。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0006]技术方案一：
[0007]一种多杀菌素的简易提取方法，包括：
[0008]步骤1、预处理：将刺糖多胞菌发酵液调节pH为9
‑
11，然后于75
‑
85℃搅拌3
‑
5小时后，将发酵液冷却至40℃以下，待用；
[0009]步骤2、萃取：将预处理后的发酵液调pH至7.5
‑
8.0后，加入有机溶剂，在10
‑
40℃，且搅拌条件下浸泡2
‑
3次，至发酵液中多杀菌素的残留<100mg/L，收集有机相，即为萃取液；
[0010]步骤3、浓缩：将萃取液浓缩至原体积的50
‑
60％；
[0011]步骤4、碱洗：采用碱洗液A将浓缩液于10
‑
40℃、且搅拌条件下碱洗2次，收集有机相；
[0012]步骤5、反萃取：于20
‑
40摄氏度下，采用酸水对步骤4收集的有机相反萃取4
‑
5次，每次5
‑
15min，得酸水相；
[0013]步骤6、结晶：将收集的酸水相浓缩至原体积的50
‑
70％，并确保酸水相中无有机溶剂残留；然后待酸水相冷却至40℃以下，料液维持在30
‑
40℃边搅拌边加碱溶液A，至溶液pH为 9
‑
11，产生结晶体，得结晶液；
[0014]步骤7、过滤、洗涤、烘干：过滤结晶液获得湿晶体后，采用碱洗液B对湿晶体进行洗涤2
‑
3次，然后于70℃下烘干即可。
[0015]进一步的，步骤2中，所述有机溶剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯，所述搅拌的转速为 300
‑
400r/min。
[0016]进一步的，步骤2中，首次浸泡：发酵液体与有机溶剂体积为1:0.5
‑
1，浸泡时间为5
‑
6 小时；其他浸泡：发酵液体与有机溶剂体积为1：0.3
‑
0.5，浸泡2
‑
3小时。
[0017]进一步的，步骤4中，所述碱洗液采用1
‑
1.5％的碳酸氢钠溶液，所述搅拌的转速 100
‑
200r/min。
[0018]进一步的，步骤4中，每次碱洗时，浓缩液与碱洗液的体积比均为1:0.3
‑
0.5。
[0019]进一步的，在步骤5中，所述酸水采用0.15
‑
0.2mol/L酒石酸溶液。
[0020]进一步的，在步骤5中，前二次反萃取时，有机相体积与酸水的体积比为1:0.45
‑
0.55；其他次的反萃取时，有机相与酸水的体积比为1:0.25
‑
0.35。
[0021]进一步的，步骤6中，调pH时，所述碱溶液A采用质量浓度30％的碳酸钠溶液，所述碱溶液A采用低速缓慢滴加的滴加方式，滴加的速度为：2
‑
3L/min。
[0022]进一步的，步骤7中，所述碱洗液B采用质量浓度为10％的碳酸钠溶液。
[0023]与现有技术相比，本专利技术所取得的有益效果如下：
[0024]1、本专利技术在pH9
‑
11的碱性条件下采用75
‑
85℃的高温对发酵液进行预处理，其能够使刺糖多孢菌的细胞膜结构发生变化，刺激细胞发生自溶，使胞内物质流入到胞外，提高次级代谢产物多杀菌素的转出率。
[0025]2、本专利技术在发酵液预处理后，直接进行发酵液的萃取工序，相较于传统技术而言，省却了高介电常数有机溶剂的浸提及浸提后浓缩去除有机溶剂的过程，从而简化了生产工序。
[0026]3、本专利技术在发酵液的萃取过程中，将发酵液pH调节至7.5
‑
8.0，有利于多杀菌素向有机相转入，提高了多杀菌素的萃取效果。
[0027]4、本专利技术由于在发酵液预处理过程中采用了较高的温度，从而导致多杀菌素萃取液中杂质较多，因此，本专利技术在发酵液萃取后增设了碱洗的工序，从而能够去除萃取液中的一些兼容性物质及油脂，提高了产品纯度。
[0028]5、本专利技术在萃取后增设浓缩工艺，从而降低后继工艺处理时料液的原体积，降低了后继工艺中碱洗液及酸水的用量，降低了废液的处理成本。
附图说明
[0029][0030]图1为本专利技术多杀菌素标准样品的HPLC图；
具体实施方式
[0031]以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细的叙述。
[0032]在本专利技术中，
[0033]多杀菌素浓度的检测方法：采用HPLC法，具体为：
[0034]按照样品和甲醇的体积比例为1:4，进行多杀霉素的萃取试验，振荡混匀后，超声
波超声破碎30min，3500r/min，离心10min，取上清液过有机滤膜后进行HPLC检测。色谱条件：色谱柱：岛津Shim
‑
pack VP
‑
ODS 150
×
4.6mm；流动相：V
甲醇
：V
乙腈
：V
水
(含0.05％乙酸铵)＝45：45：10；进样量20μL；流速为1.0mL/min；柱温：28℃；检测波长：245nm。依据多杀霉素标准曲线，根据多杀菌素A和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多杀菌素的简易提取方法，其特征在于，包括：步骤1、预处理：将刺糖多胞菌发酵液调节pH为9
‑
11，然后于75
‑
85℃搅拌3
‑
5小时后，将发酵液冷却至40℃以下，待用；步骤2、萃取：将预处理后的发酵液调pH至7.5
‑
8.0后，加入有机溶剂，在10
‑
40℃，且搅拌条件下浸泡2
‑
3次，至发酵液中多杀菌素的残留<100mg/L，收集有机相，即为萃取液；步骤3、浓缩：将萃取液浓缩至原体积的50
‑
60％；步骤4、碱洗：采用碱洗液A将浓缩液于10
‑
40℃、且搅拌条件下碱洗2次，收集有机相；步骤5、反萃取：于20
‑
40摄氏度下，采用酸水对步骤4收集的有机相反萃取4
‑
5次，每次5
‑
15min，得酸水相；步骤6、结晶：将收集的酸水相浓缩至原体积的50
‑
70％，并确保酸水相中无有机溶剂残留；然后待酸水相冷却至40℃以下，料液维持在30
‑
40℃边搅拌边加碱溶液A，至溶液pH为9
‑
11，产生结晶体，得结晶液；步骤7、过滤、洗涤、烘干：过滤结晶液获得湿晶体后，采用碱洗液B对湿晶体进行洗涤2
‑
3次，然后于70℃下烘干即可。2.根据权利要求1所述的一种多杀菌素的简易提取方法，其特征在于，步骤2中，所述有机溶剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯，所述搅拌的转速为300
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：祁桂玲，周昕芳，王学伟，张海航，宋立宾，刘丽虹，
申请(专利权)人：河北兴柏农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：