靶向单链抗体的中和性单克隆抗体制造技术

本申请涉及一种靶向单链抗体的中和性单克隆抗体，具体涉及一种分离的抗原结合蛋白，所述抗原包含靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体。本申请还提供了所述抗原结合蛋白在检测嵌合抗原受体中的应用。检测嵌合抗原受体中的应用。

【技术实现步骤摘要】
靶向单链抗体的中和性单克隆抗体


[0001]本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种靶向单链抗体的中和性单克隆抗体。

技术介绍

[0002]嵌合抗原T细胞(CAR
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T)疗法是一种通过基因改造技术使T细胞表面表达特定抗原的单链抗体(scFv)，从而可以重定向至靶细胞并发挥杀伤效果的新型免疫疗法。CAR
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T细胞是一种细胞药物，要长久发挥药效需要持续存在于体内，因而，对回输后体内CAR
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T细胞的准确检测是监测药物动力学和预后预测等的基础。常用的检测患者体内是否存在CAR
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T细胞以及其水平的方式是流式细胞术，即用带有荧光的可以与CAR
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T细胞特异性结合的蛋白先与外周血中单个核细胞孵育，经过洗脱以后，只有CAR
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T细胞会被标记上相应荧光，从而可以被流式细胞仪所识别。对于CT103A这一细胞产品来说，目前检测其在病人外周血水平的流式蛋白为BCMA蛋白，这种方法存在至少两个问题：其一，与CT103A CAR
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T结合的亲和力不是特别高，易有假阴性结果；其二，可能在CAR
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T以外的细胞存在BCMA受体，从而出现假阳性结果。因此，本领域急需一种CT103A scFv特异性抗体用于CT103A CAR
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T的结合和/或检测分析。

技术实现思路

[0003]本申请制备出一批的可以结合CT103A scFv抗体，经过后续的检验验证，最后获得特异性高亲和力抗CT103A scFv抗体，且可以为中和性抗体。
[0004]一方面，本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，所述抗原包含重链互补决定区1(HCDR1)，重链互补决定区2(HCDR2)和重链互补决定区3(HCDR3)，所述抗原的所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：78所示，所述抗原的所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：77所示，且所述抗原的所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：76所示。
[0005]在一些实施方式中，所述抗原包含轻链互补决定区1(LCDR1)，轻链互补决定区2(LCDR2)和轻链互补决定区3(LCDR3)，所述抗原的所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：81所示，所述抗原的所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：80所示，且所述抗原的所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：79所示。
[0006]在一些实施方式中，所述抗原包含重链可变区，所述抗原的所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：82所示。
[0007]在一些实施方式中，所述抗原包含轻链可变区，所述抗原的所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：83所示。
[0008]在一些实施方式中，所述抗原包含单链抗体。
[0009]一方面，本申请提供了一种分离的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含重链可变区(VH)，所述抗原结合蛋白的所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述抗原结合蛋白的所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或41所示。
[0010]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2
或42所示。
[0011]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3或43所示。
[0012]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或41所示，所述抗原结合蛋白的所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2或42所示，且所述抗原结合蛋白的所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3或43所示。
[0013]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：15或54所示。
[0014]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白包含轻链可变区(VL)，所述抗原结合蛋白的所述轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述抗原结合蛋白的所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：4或44所示。
[0015]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5或45所示。
[0016]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6或46所示。
[0017]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：4或44所示，所述抗原结合蛋白的所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5或45所示，且所述抗原结合蛋白的所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6或46所示。
[0018]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：16或55所示。
[0019]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述重链可变区包含重链框架区1(HFR1)、重链框架区2(HFR2)、重链框架区3(HFR3)和重链框架区4(HFR4)，所述抗原结合蛋白的所述HFR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：7或47所示。
[0020]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述HFR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：8或48所示。
[0021]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述HFR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：9或49所示。
[0022]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述HFR4的氨基酸序列如SEQ ID NO：10或50所示。
[0023]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述轻链可变区包含轻链框架区1(LFR1)、轻链框架区2(LFR2)、轻链框架区3(LFR3)和轻链框架区4(LFR4)，所述抗原结合蛋白的所述LFR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：11或51所示。
[0024]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述LFR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：12或52所示。
[0025]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述LFR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：13或53所示。
[0026]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述LFR4的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。
[0027]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白包含抗体重链恒定区。
[0028]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述抗体重链恒定区包含源自人抗体的重链恒定区。
[0029]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述抗体重链恒定区包含源自IgG的重链恒定区。
[0030]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白包含抗体轻链恒定区。
[0031]在一些实施方式中，所述抗原结合蛋白的所述抗体轻链恒定区包含源自人抗体的轻链恒定区。
[0032]在一些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含重链可变区(VH)，所述抗原结合蛋白的所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述抗原结合蛋白的所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或41所示、所述抗原结合蛋白的所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2或42所示、所述抗原结合蛋白的所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3或43所示；以及所述抗原结合蛋白包含轻链可变区(VL)，所述抗原结合蛋白的所述轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述抗原结合蛋白的所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：4或44所示，所述抗原结合蛋白的所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5或45所示，且所述抗原结合蛋白的所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6或46所示。2.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白的所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：15或54所示；以及所述抗原结合蛋白的所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：16或55所示。3.一种多肽，其包含权利要求1
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2中任一项所述的抗原结合蛋白。4.一种核酸分子，其编码权利要求1
‑
2中任一项所述的抗原结合蛋白和/或权利要求3所述的多肽。5.一种载体，其包含权利要求4所述的核酸分子。6.一种免疫缀合物，其包含权利要求1
‑
2中任一项所述的抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：高文静，蔡浩东，胡广，
申请(专利权)人：南京驯鹿医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：