一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体及其制备方法、免疫检测试剂、应用技术

本发明专利技术属于单克隆抗体领域，具体涉及一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体及其制备方法、免疫检测试剂、应用。该单克隆抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种抗人免疫球蛋白
κ
轻链的单克隆抗体及其制备方法、免疫检测试剂、应用


[0001]本专利技术属于单克隆抗体领域，具体涉及一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体及其制备方法、免疫检测试剂、应用。

技术介绍

[0002]抗体轻链分子量约为25kD，由约214个氨基酸残基构成。轻链分为κ链和λ链，据此可将Ab分为两型，即κ型和λ型。一个天然Ab分子上两条轻链的型别总是相同的，但同一个体内可存在分别带有κ或λ链的抗体分子。
[0003]五类Ab(IgM、IgG、IgA、IgD、IgE)中每类Ab的轻链都可以有κ链或λ链，两型轻链的功能无差异。不同种属生物体内两型轻链的比例不同，正常人血清免疫球蛋白κ：λ约为2:1，而在小鼠则为20:1。κ：λ比例的异常可能反映免疫系统的异常。
[0004]免疫球蛋白κ轻链的识别可用于淋巴瘤和淋巴结反应性增生的鉴别诊断。目前国际上广泛使用的抗人免疫球蛋白κ轻链单克隆抗体的克隆号为L1C1，该进口试剂的价格昂贵，直接导致了该类病理诊断的诊断成本居高不下。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，与进口试剂L1C1相比，特异性评价一致，且在较低抗体浓度下能够达到更强的染色，显示出更好的亲和力。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供上述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法。
[0007]本专利技术的第三个目的是提供含有上述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的免疫检测试剂。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供上述单克隆抗体、免疫检测试剂在免疫组化方面的应用。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0010]一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1
‑
3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4
‑
6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
[0011]本专利技术的抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，为评估淋巴瘤或淋巴结反应性增生提供诊断试剂，该诊断试剂可替代进口试剂，实现该类诊断试剂的国产化，大幅降低诊断成本。在试剂应用方面，该抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体与国际上广泛使用的L1C1单抗相比，特异性评价一致，抗体的使用浓度更低，在0.05μg/mL即可达到较强的染色效果与较佳的背景。
[0012]优选地，所述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示的轻链可变区。重、轻链可变区采用
上述序列，能够进一步保证其应用效果。
[0013]一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0014](1)使用免疫球蛋白κ轻链免疫原免疫兔子，采集兔外周血，收集兔外周血单个核细胞，分离出抗原特异性B淋巴细胞；
[0015](2)针对步骤(1)得到的抗原特异性B淋巴细胞，经过培养鉴定筛选出阳性细胞孔，进而获取抗体重链、轻链基因，扩增抗体重链、轻链目的基因，经重组、表达获得兔源单克隆抗体。
[0016]本专利技术的抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法，以兔子为免疫动物制备兔源单克隆抗体，方法的重现性好，可操作性强。采用B细胞分离及培养便于早期发现优秀抗体细胞株，可大大减轻后续表达分析工作，缩短企业的研发周期。
[0017]为进一步提高抗体表达量，优选地，步骤(2)中，在抗体重链、轻链基因5
’
端均增加一段能够提高表达量的信号区，然后进行所述扩增。
[0018]进一步优选地，所述信号区的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示。
[0019]为方便通过PCR扩增方法得到目标基因，优选地，步骤(2)中，扩增抗体重链目的基因的上、下游引物分别如SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11所示；扩增抗体轻链目的基因的上、下游引物分别如SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13所示。
[0020]一种含有上述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的免疫检测试剂。
[0021]在上述单克隆抗体的基础上，可根据本领域的公知技术构建适应的免疫检测试剂。以免疫组化检测试剂为例，搭配TBS缓冲液、保护性蛋白BSA、防腐剂等，可制作免疫组化检测试剂。
[0022]上述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体、免疫检测试剂在免疫组化方面的应用。
[0023]经实验证实，上述单克隆抗体在应用于人免疫球蛋白Kappa轻链的免疫组化检测方面效果良好，可替代进口试剂L1C1使用，从而大幅降低诊断成本。
附图说明
[0024]图1为本专利技术实施例的自研抗体E37在扁桃体组织中的免疫组化染色结果；
[0025]图2为对照抗体L1C1在扁桃体组织中的免疫组化染色结果；
[0026]图3为本专利技术实施例的自研抗体E37在淋巴瘤组织中的免疫组化染色结果；
[0027]图4为对照抗体L1C1在扁桃体组织中的免疫组化染色结果。
具体实施方式
[0028]下面结合具体实施例对本专利技术的实施过程进行详细说明。
[0029]实施例1抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体
[0030]本实施例的抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。
[0031]重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1
‑
3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:4
‑
6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。
[0032]实施例2抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法
[0033]本实施例的抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0034](1)兔子免疫：将5种免疫原(免疫原I、II、III、IV、V分别为MSH6(错配修复蛋白MSH6)、MUM1(干扰素调节因子MUM1)、p57(抑癌因子p57蛋白)、CK7(细胞角质蛋白7)和Kappa(免疫球蛋白Kappa轻链))和免疫伴侣(CSF2蛋白；提升免疫效果)加入水溶性佐剂中，得到免疫试剂，控制免疫伴侣在免疫试剂中的浓度为50μg/mL，5种免疫原的免疫剂量均为100μg/只。然后采用免疫试剂免疫新西兰大白兔，在评估免疫效果达到预期后，对兔子进行免疫原冲击免疫，以达到调动兔子机体针对目标免疫原的B淋巴细胞快速激活。
[0035]CSF2蛋白可采用包括以下步骤的方法制得：
[0036]1)首先通过查阅Uniprot数据库，确定天然CSF2蛋白的全长基因，含启动子与终止密码子。
[0037]2)利用传统基因扩增与载体构建手段，将CSF2基因构建到pcD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，其特征在于，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:1
‑
3所示的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4
‑
6所示的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3。2.如权利要求1所述的抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体，其特征在于，所述抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示的轻链可变区。3.一种如权利要求1或2所述的抗人免疫球蛋白κ轻链的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)使用免疫球蛋白κ轻链免疫原免疫兔子，采集兔外周血，收集兔外周血单个核细胞，分离出抗原特异性B淋巴细胞；(2)针对步骤(1)得到的抗原特异性B淋巴细胞，经过培养鉴定筛选出阳性细胞孔，进而获取抗体重链、轻链基因，扩增抗体重链、轻链目的基因，经重...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟晋豫，张楠，靳冉，王迎利，柴素真，王鑫，秦志洁，陈明涛，李卫娟，齐华，李三华，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：