一种基于新型多量子点-蛋白聚合物探针同时检测多种那非类物质的试剂盒制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于新型多量子点

【技术实现步骤摘要】
一种基于新型多量子点
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蛋白聚合物探针同时检测多种那非类物质的试剂盒制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及食品药品安全检测
，具体地，涉及一种基于新型多量子点
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蛋白聚合物探针同时检测多种那非类物质的试剂盒制备方法和应用。

技术介绍

[0002]相较于传统胶体金、乳胶微球和荧光染料等探针，荧光量子点(Quantum dots,QDs)由于荧光强度高、荧光寿命长、耐光漂白和发光颜色多样等优势，已成为构建高灵敏免疫层析法的热门材料。但高质量荧光量子点多为脂溶性，需经历繁琐的表面化学改性才能修饰抗体；且由于量子点尺寸较小，导致量子点与抗体的偶联效率较低、抗体上量子点的载量也较低(https://doi.org/10.1016/j.bios.2016.04.091)。为了解决这些问题，Zou等人(https://doi.org/10.1021/acs.analchem.6b01941)利用共价结合手段将脂溶性量子点修饰在硅球表面，再偶联生物识别材料，得到量子点载量较高的荧光硅球探针。然而，这个方法需要较多的合成步骤，不够便利。
[0003]建立高灵敏、可定量的免疫层析方法对食品安全现场筛查具有重大意义。目前用于现场筛查食品中可能非法添加的那非类西药的侧流免疫层析法虽然灵敏度高，例如专利CN114308153A，一种用于检测那非类物质的固相萃取微流控芯片及用于检测那非类物质的系统，但是在灵敏度和探针制备简易程度上仍有进一步提升的空间。因此迫切需要一种简便的、量子点载量高的探针制备方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是克服现有技术的上述不足，提供一种基于新型多量子点
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蛋白聚合物探针同时检测多种那非类物质的试剂盒制备方法和应用，检测效果便捷高效、灵敏度高。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种荧光免疫探针的制备方法。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供一种荧光免疫探针。
[0007]本专利技术的第三个目的是提所述荧光免疫探针在制备检测那非类物质和/或那非类物质衍生物的产品中的应用。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供一种检测那非类物质和/或那非类物质衍生物的试剂盒。
[0009]本专利技术的第五个目的是提供所述检测那非类物质和/或那非类物质衍生物的试剂盒的使用方法。
[0010]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
[0011]一种荧光免疫探针的制备方法，所述制备方法的步骤如下：
[0012]S1：混合荧光量子点和正己烷，得到荧光量子点溶液，所述荧光量子点的浓度为1～3mg/mL；
[0013]S2：将步骤S1的荧光量子点溶液与PBS溶液混合，搅拌2～4h，所述PBS和正己烷的体积为4～12：1，所述PBS溶液含有BSA和那非类物质的抗体，所述BSA浓度为0.25～2mg/mL；
[0014]S3：离心，去上清，得到荧光免疫探针。
[0015]优选地，步骤S1中，荧光量子点的浓度为1.5～2.5mg/mL。
[0016]更优选地，所述荧光量子点为ZnCdSe/ZnS QDs。
[0017]更优选地，所述荧光量子点的浓度为2mg/mL。
[0018]优选地，步骤S2中，PBS和正己烷的体积为6～10：1，搅拌时间为2.5～3.5h，所述BSA浓度为0.5～1.5mg/mL。
[0019]更优选地，所述PBS和正己烷的体积为8：1，所述BSA浓度为1mg/mL，搅拌时间为3h。
[0020]优选地，步骤S2中，所述那非类物质为西地那非和/或他达拉非，所述西地那非的抗体的浓度为0.15～0.45mg/mL，所述他达拉非的抗体的浓度为0.2～0.4mg/mL。
[0021]更优选地，步骤S2中，所述那非类物质为西地那和/或他达拉非，所述西地那非的抗体的浓度为0.23～0.37mg/mL，所述他达拉非的抗体的浓度为0.27～0.40mg/mL。
[0022]更优选地，所述西地那非的抗体的浓度为0.3mg/mL，所述他达拉非的抗体的浓度为0.34mg/mL。
[0023]优选地，所述所述西地那非的抗体能识别结合样品中的西地那非和固定在试纸条上的西地那非；所述他达拉非的抗体能识别结合样品中的他达拉非和固定在试纸条上的他达拉非。
[0024]更优选地，所述所述西地那非的抗体为Ab
Sildenafil
，所述他达拉非的抗体为Ab
Tadalafil
。
[0025]一种荧光免疫探针，所述荧光免疫探针由所述制备方法制备得到。
[0026]所述的荧光免疫探针在制备检测那非类物质和/或那非类物质衍生物的产品中的应用。
[0027]优选地，所述那非类物质为西地那非和/或他达拉非。
[0028]优选地，所述西地那非衍生物为去甲基西地那非、红地那非、羟基红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、乌地那非、豪莫西地那非、硫代豪莫西地那非和/或硫代艾地那非。
[0029]更优选地，所述西地那非衍生物为去甲基西地那非、红地那非、羟基红地那非、伪伐地那非、乌地那非、豪莫西地那非和/或硫代艾地那非。
[0030]优选地，所述他达拉非衍生物为N
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去甲基他达拉非、N
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丁基他达拉非、N
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Desmethlent他达拉非、N
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辛基去甲他达拉非、乙酰胺基他达拉非和/或氨基他达拉非。
[0031]更优选地，所述他达拉非衍生物为N
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去甲基他达拉非和/或N
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丁基他达拉非和乙酰胺基他达拉非。
[0032]一种检测那非类物质和/或那非类物质衍生物的试剂盒，所述试剂盒中含有所述荧光免疫探针和侧流免疫层析试纸条；所述侧流免疫层析试纸条由样品垫、硝酸纤维膜、吸水纸和PVC底板组成，所述侧流免疫层析试纸条的检测线上包被有那非类物质抗原，质控线上包被有羊抗兔IgG。
[0033]优选地，所述样品垫的处理液中含有4.5～5.5mg/mL PVP、4.5～5.5mg/mL蔗糖、4.5～5.5mg/mL BSA、0.5％～1.5％Tween
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20(v/v)和0.04～0.06mol/L PB溶液。
[0034]更优选地，所述样品垫的处理液中含有5mg/mL PVP、5mg/mL蔗糖、5mg/mL BSA、1％
Tween
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20(v/v)和0.05mol/L PB溶液。
[0035]优选地，所述那非类物质抗原为西地那非和/或他达拉非的抗原，所述西地那非抗原的浓度为0.095～1.5mg/mL，所述他达拉抗原的浓度为0.10～0.75mg/mL。
[0036]更优选地，所述西地那非抗原的浓度为0.19～0.75mg/mL，所述他达拉抗原的浓度为0.10～0.38mg/mL。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光免疫探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：S1：混合荧光量子点和正己烷，得到荧光量子点溶液，所述荧光量子点的浓度为1～3mg/mL；S2：将步骤S1的荧光量子点溶液与PBS溶液混合，搅拌2～4h，所述PBS和正己烷的体积为4～12：1，所述PBS溶液含有BSA和那非类物质的抗体，所述BSA浓度为0.25～2mg/mL；S3：离心，去上清，得到荧光免疫探针。2.根据权利要求1所述荧光免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述荧光量子点的浓度为1.5～2.5mg/mL。3.根据权利要求1所述荧光免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤S2中，搅拌时间为2.5～3.5h，所述PBS和正己烷的体积为6～10：1，所述BSA浓度为0.5～1.5mg/mL。4.根据权利要求1所述荧光免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述那非类物质为西地那非和/或他达拉非，所述西地那非的抗体的浓度为0.15～0.45mg/mL，所述他达拉非的抗体的浓度为0.2～0.4mg/mL。5.一种荧光免疫探针，其特征在于，所述探针由权利要求1～4任一项所述制备方法制备得到。6.权利要求5所述荧光免疫探针在制备检测那非类物质和/或那非类物质衍生物的产品中的应用。7.一种检测那非类物质和/或那非类物质衍生物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求5所述荧光免疫探针和侧流免疫层析试纸条，所述侧流免疫层析试纸条由样品垫、硝酸纤维膜、吸水纸和PVC底板组成，所述侧流免疫层析试纸条的检测线上包被有那非类物质抗原，...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷红涛，关甜，沈玉栋，王锦，沈兴，李向梅，韦晓群，徐小艳，徐振林，杨金易，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：