一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用，以铕

A time-resolved fluorescent immunochromatographic strip for detecting tylosin and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及兽药残留检测
，具体地，涉及一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]泰妙菌素(Tiamulin，TML)是截短侧耳类药物，为畜禽专用抗生素，对细菌、螺旋体和支原体等具有良好的抗菌活性，常用于防治鸡的慢性呼吸道疾病、猪的疟疾和支原体引起的各种畜禽疾病，治疗效果显著。但其残留于畜禽食品中，被人体长期摄入后会造成胃肠道菌群紊乱，引起过敏反应，增加患癌风险。TML的不规范使用所导致的药物残留问题，将给人类健康、生态平衡和社会经济等带来潜在威胁。我国2019年发布的GB 31650
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2019《食品中兽药最大残留限量的国家标准》中明确规定泰妙菌素的最大残留限量为0.1～1mg/kg。因此，开发有效的快速检测泰妙菌素方法对监控畜禽食品质量安全尤为重要。
[0003]目前，针对泰妙菌素的检测方法有多种，包括含高效液相色谱
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质谱法(HPLC
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MS/MS)、超高效液相色谱
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串联质谱法(UPLC
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MS/MS)等在内的仪器分析方法、光谱检测法以及免疫分析法等。仪器方法灵敏度高、特异性强，但需要昂贵的设备、专业的操作人员和繁琐的样品前处理过程，不适合大量样本的快速筛查；免疫分析技术作为大型仪器验证分析的重要互补检测技术，已得到广泛发展，其中免疫层析方法以其简便快捷、可现场检测等优点，备受市场青睐。免疫层析法是将免疫和色谱层析技术相结合的检测方法，以标记物标记的抗体与目标待测物特异性结合为基础并通过标记物信号实现定性或定量的目的。该方法检测时间短，使用方便，前处理简单，成本低，检测效果能满足需求，适合用于食品样品的现场检测。
[0004]检测TML在食品样品中残留的免疫层析检测方法主要为胶体金免疫层析法，关于TML的时间分辨荧光微球免疫层析检测方法尚无报道，而且目前涉及的检测样品较为单一，主要为肌肉和肝脏，对于鸡蛋样品中TML的检测报道相对较少。因此，亟待开发一种针对鸡蛋、鸡肉和猪肉等多种食品样品中TML药物残留的快速检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是克服现有技术的上述不足，提供一种检测泰妙菌素的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种时间分辨荧光微球探针的制备方法。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供所述制备方法制备得到的时间分辨荧光微球探针。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供所述制备方法制备得到的时间分辨荧光免疫层析试纸条。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供所述时间分辨荧光微球探针和/或所述时间分辨荧光
免疫层析试纸条在制备检测泰妙菌素产品中的应用。
[0011]本专利技术的第六个目的是提供一种检测泰妙菌素的试剂盒。
[0012]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
[0013]一种时间分辨荧光微球探针的制备方法，所述制备方法的步骤如下：
[0014]S11：溶解：混合时间分辨荧光微球和MES缓冲溶液，充分混匀；
[0015]所述时间分辨荧光微球的粒径为100～300nm，所述MES缓冲溶液pH为5～7；
[0016]S12：活化：36.5～37.5℃条件下活化步骤S11 MES缓冲溶液溶解的时间分辨荧光微球的羧基基团；
[0017]S13：标记：混合步骤S12活化的时间分辨荧光微球、硼酸盐缓冲液和泰妙菌素抗体稀释液，充分混匀，得到泰妙菌素抗体标记的时间分辨荧光微球；
[0018]所述泰妙菌素抗体与时间分辨荧光微球的质量比为0.5～1.5：50，所述泰妙菌素抗体稀释液由硼酸盐缓冲液稀释泰妙菌素抗体得到；
[0019]S14：封闭，得到泰妙菌素抗体标记的时间分辨荧光微球探针。
[0020]优选地，步骤S11所述时间分辨荧光微球的粒径为100～200nm。
[0021]更优选地，所述步骤S11所述时间分辨荧光微球的粒径为100nm。
[0022]优选地，步骤S11所述MES缓冲溶液pH为5～6。
[0023]更优选地，所述步骤S11所述MES缓冲溶液pH为5.5。
[0024]优选地，步骤S11中，混合时间分辨荧光微球和MES缓冲溶液，涡旋震荡9～11s后超声1～2min，14500～15500rpm离心14～16min，弃上清，用MES缓冲溶液复溶，超声1～2min，得到时间分辨荧光微球MES溶液；
[0025]所述时间分辨荧光微球的浓度为8～12mg/mL，所述MES缓冲溶液的浓度为0.04～0.06mol/L，复溶前所述时间分辨荧光微球和MES缓冲溶液的比值为1μg：0.5～1.5μL，复溶与复溶前所用MES缓冲溶液体积相同；
[0026]更优选地，步骤S11中，混合时间分辨荧光微球和MES缓冲溶液，涡旋震荡10s后超声1min，15000rpm离心15min，弃上清，用MES缓冲溶液复溶，超声1min，得到时间分辨荧光微球MES溶液；
[0027]所述时间分辨荧光微球的浓度为10mg/mL，所述MES缓冲溶液的浓度为0.05mol/L，复溶前所述时间分辨荧光微球和MES缓冲溶液的比值为1μg：1μL，复溶与复溶前所用MES缓冲溶液体积相同。
[0028]优选地，步骤S12中，混合步骤S11时间分辨荧光微球MES溶液、NHS溶液和EDC溶液，36.5～37.5℃550～650rpm条件下恒温培养、摇床振荡活化14～16min，在2～4℃条件下14500～15500rpm离心14～16min，弃上清，得到活化羧基基团的时间分辨荧光微球；
[0029]所述NHS溶液的浓度为0.08～0.12mg/mL，所述EDC溶液的浓度为0.08～0.12mg/mL，所述时间分辨荧光微球MES溶液、NHS溶液和EDC溶液的体积比为39～41：5～7：4～6。
[0030]更优选地，步骤S12中，混合步骤S11含有时间分辨荧光微球的MES溶液、NHS溶液和EDC溶液，37℃600rpm条件下恒温培养、摇床振荡活化15min，在4℃条件下15000rpm离心15min，弃上清，得到活化羧基基团的时间分辨荧光微球；
[0031]所述NHS溶液的浓度为0.1mg/mL，所述EDC溶液的浓度为0.1mg/mL，所述含有时间分辨荧光微球的MES溶液、NHS溶液和EDC溶液的体积比为40：6：5。
[0032]优选地，所述步骤S13所述泰妙菌素抗体稀释液由0.008～0.012mol/L硼酸盐缓冲液稀释泰妙菌素抗体得到。
[0033]更优选地，所述步骤S13所述泰妙菌素抗体稀释液由0.01mol/L硼酸盐缓冲液稀释泰妙菌素抗体得到。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种时间分辨荧光微球探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：S11：溶解：混合时间分辨荧光微球和MES缓冲溶液，充分混匀；所述时间分辨荧光微球的粒径为100～300nm，所述MES缓冲溶液pH为5～7；S12：活化：36.5～37.5℃条件下活化步骤S11 MES缓冲溶液溶解的时间分辨荧光微球的羧基基团；S13：标记：混合步骤S12活化的时间分辨荧光微球、硼酸盐缓冲液和泰妙菌素抗体稀释液，充分混匀，得到泰妙菌素抗体标记的时间分辨荧光微球；所述泰妙菌素抗体与时间分辨荧光微球的质量比为0.5～1.5：50，所述泰妙菌素抗体稀释液由硼酸盐缓冲液稀释泰妙菌素抗体得到；S14：封闭，得到泰妙菌素抗体标记的时间分辨荧光微球探针。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S11所述时间分辨荧光微球的粒径为100～200nm。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S11所述MES缓冲溶液pH为5～6。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S13所述泰妙菌素抗体稀释液由0.008～0.012mol/L硼酸盐缓冲液稀释泰妙菌素抗体得到。5.权利要求1～4任一所述制备方法制备得到的时间分辨荧光微球探针。6.一种时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：S21：划膜：将0.25～1mg/mL的泰妙菌素抗原TML
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【专利技术属性】
技术研发人员：沈玉栋，李露，杨金易，徐振林，王弘，孙远明，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：