一种脱细胞真皮及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物医用材料领域，具体涉及一种脱细胞真皮及其制备方法。本发明专利技术提供的一种脱细胞真皮的制备方法，包括：S1、采用甘油溶液浸泡原料皮；S2、采用低渗透压溶液浸泡S1步骤中的原料皮；S3、重复步骤S1

【技术实现步骤摘要】
一种脱细胞真皮及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医用材料领域，具体涉及一种脱细胞真皮及其制备方法。

技术介绍

[0002]组织修复或创伤愈合是指外伤或其它疾病造成组织缺损(如伤口、创面等)后,局部组织通过增生或再生方式来进行修补的一系列病理生理过程。尽管不同组织在遭受创伤后都有各自的修复特征与规律,但软组织,特别是体表软组织创伤后的修复过程与规律最具代表性,皮肤是人体最大的组织器官，无论在平时还是战时，皮肤损伤都是最常见的。皮肤创伤修复是一个复杂而渐进的过程，需要多方面的协同作用，不仅需要机体内部的生理修复，同时也需要人为提供创伤修复材料及时覆盖伤口，提供有利于伤口愈合的环境。脱细胞真皮是通过物理或化学的方法，去除皮肤中可能诱发强烈排斥反应的表皮层和真皮中的细胞成分及皮肤附属器后剩下的真皮组织，其具有完整的三维网状结构、生物相容性好，与自体皮肤组织成分最接近，基于上述优点，脱细胞真皮在软组织修复特别是皮肤创伤修复中具有较高的应用价值。
[0003]目前的软组织修复材料主要分为不可吸收型(聚酯补片、聚丙烯补片、膨化聚四氟乙烯补片等)；可吸收型(聚羟基乙酸、聚乳酸羟基乙酸等)；复合材料以及生物材料(自体皮、同种异体皮、异种皮、羊膜、脱细胞真皮基质、小肠粘膜下层、胶原类等)。
[0004]以生物材料为例，目前大部分生物材料在处理过程中都会采取脱细胞和交联的方法进行处理，脱细胞的方法主要有反复冻融法、高渗溶液法、酶和去垢剂等，具体试剂如：DispaseⅡ、十二烷基硫酸钠和DNA酶联合、冻融后超声、0.01
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0.20％EDTA、十二烷基硫酸钠、维生素C、DNAE酶、胰酶、0.25％
‑
5％曲拉通、甘油碱溶液等。个别生物材料还会选择使用强酸强碱等试剂对材料进行脱细胞处理。然而上述方法存在如下的缺陷：
[0005](1)生物材料产品目前在处理的过程中多使用交联剂，目的是提高产品的力学性能，然而交联后的产品在使用过程中会抑制伤口的愈合，短期内材料的细胞毒性增大，刺激局部组织产生长时间的炎症反应，有些交联剂在长期的组织修复中会释放交联剂单体，对局部组织和机体产生慢性毒性；
[0006](2)部分生物材料产品在制备时使用强酸强碱等试剂，强烈的反应大大破坏了胶原的结构，甚至破坏异体皮肤在修复过程中起到重要修复作用的基底膜的完整性，使产品在使用过程中效果下降，甚至无法起到组织修复作用；
[0007](3)部分生物材料产品的处理工艺脱细胞效果差，无法彻底去除细胞并降低引起免疫排除反应的DNA残留，使产品的免疫原性差；
[0008](4)个别种类酶的使用可能会因为浓度过大或处理时间不够等各种因素的问题使材料出现过度处理或处理不到位的问题，过度处理导致胶原结构破坏或松散，部分基底膜被破坏或不存在；处理不到位导致细胞残留，免疫原性不符合要求。

技术实现思路

[0009]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的脱细胞真皮免疫原性高、排斥反应大、胶原结构和基底膜不完整、交联皮毒性大等缺陷，从而提供一种脱细胞真皮及其制备方法，制备的脱细胞真皮无表皮层，无细胞残留，DNA残留低，免疫原性低，无免疫排斥反应，且保持了完整的胶原结构和基底膜，毒性低，符合生物材料产品使用要求。
[0010]为此，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0011]一种脱细胞真皮的制备方法，包括：
[0012]S1、采用甘油溶液浸泡原料皮；
[0013]S2、采用低渗透压溶液浸泡S1步骤中的原料皮；
[0014]S3、重复步骤S1
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S2的次数为≥0次。
[0015]可选的，还包括：
[0016]S1步骤中，采用不同浓度的甘油溶液依次浸泡原料皮。
[0017]可选的，在S1步骤中，采用浓度梯度递增的甘油溶液依次浸泡原料皮。
[0018]可选的，在S1步骤中，所述甘油溶液依次为甘油浓度为体积百分比10％
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50％、体积百分比50％
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85％、体积百分比85％
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98％的甘油溶液。
[0019]可选的，采用甘油浓度为体积百分比10
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50％的甘油溶液浸泡原料皮的条件为，室温浸泡3
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10h。
[0020]可选的，采用甘油浓度为体积百分比50
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85％的甘油溶液浸泡原料皮的条件为，室温浸泡4
‑
8h。
[0021]可选的，采用甘油浓度为体积百分比85
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98％的甘油溶液浸泡原料皮的条件为，33℃
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37℃浸泡3
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12h；
[0022]可选的，采用甘油浓度为体积百分比85
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98％的甘油溶液浸泡原料时，每浸泡0.5
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1.5h超声振荡10
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30min后进行换液，超声条件为20KHz
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50KHz,220W。通过此条件下浸泡原料皮，有利于组织内细胞彻底脱水，通过超声振荡使脱水后细胞脱落，另外高浓度甘油具有去除病毒，杀灭细菌作用。
[0023]可选的，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液或生理盐水。所述乙醇水溶液和生理盐水都有助于去除表皮，且乙醇水溶液还有协助去病毒杀灭细菌的作用，甘油在上述溶剂的配合下具有更优的脱除表皮和去病毒杀灭细菌的作用。
[0024]可选的，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液时，甘油浓度为体积百分比10
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50％的甘油溶液时，所用的溶剂乙醇浓度为体积百分比0.2
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10％；可选的，所用的溶剂乙醇浓度为体积百分比5％；上述浓度的乙醇溶液有助于脱表皮的作用，协助甘油去除表皮。
[0025]可选的，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液时，甘油浓度为体积百分比50
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85％的甘油溶液时，所用的溶剂乙醇浓度为体积百分比50
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85％；可选的，所用的溶剂乙醇浓度为体积百分比75％；上述浓度的乙醇溶液有助于去病毒杀灭细菌。
[0026]可选的，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液时，甘油浓度为体积百分比85
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98％的甘油溶液时，所用的溶剂乙醇浓度为体积百分比95
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99％。可选的，所用的溶剂乙醇浓度为体积百分比99％；上述浓度的乙醇溶液有助于脱水，可协助甘油脱水去细胞。
[0027]可选的，所述低渗透压溶液为水或低渗盐水。可选的，所述低渗盐水为质量分数小于0.9％的氯化钠溶液。
[0028]在所述的脱细胞真皮的制备方法中，所述低渗透压溶液浸泡原料皮的条件为室温浸泡7
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12h；
[0029]可选的，在低渗透压溶液浸泡前，用低渗透压溶液对所述原料皮进行清洗。上述清洗的作用，一方面是清洗上一步骤所用的试剂，以及上一步处理后脱落的细胞和表皮，另一方面在清洗的同时可以由于渗透压的改变使残本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱细胞真皮的制备方法，其特征在于，包括：S1、采用甘油溶液浸泡原料皮；S2、采用低渗透压溶液浸泡S1步骤中的原料皮；S3、重复步骤S1
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S2的次数为≥0次。2.根据权利要求1所述的脱细胞真皮的制备方法，其特征在于，S1步骤中，采用不同浓度的甘油溶液依次浸泡原料皮。3.根据权利要求1或2所述的脱细胞真皮的制备方法，其特征在于，在S1步骤中，采用浓度梯度递增的甘油溶液依次浸泡原料皮。4.根据权利要求1或2或3所述的脱细胞真皮的制备方法，其特征在于，所述甘油溶液依次为甘油浓度为体积百分比10％
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50％、体积百分比50％
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85％、体积百分比85％
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98％的甘油溶液。5.根据权利要求4所述的脱细胞真皮的制备方法，其特征在于，采用甘油浓度为体积百分比10
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50％的甘油溶液浸泡原料皮的条件为，室温浸泡3
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10h；或采用甘油浓度为体积百分比50
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85％的甘油溶液浸泡原料皮的条件为，室温浸泡4
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8h；或采用甘油浓度为体积百分比85
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98％的甘油溶液浸泡原料皮的条件为，33℃
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37℃浸泡3
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12h；或采用甘油浓度为体积百分比85
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98％的甘油溶液浸泡原料时，每浸泡0.5
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1.5h超声振荡10
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30min后进行换液，超声条件为20KHz
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50KHz,220W。6.根据权利要求1
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5任一项所述的脱细胞真皮的制备方法，其特征在于，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液或生理盐水；可选的，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液时，甘油浓度为体积百分比10
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50％的甘油溶液时，所用的溶剂中乙醇浓度为体积百分比0.2
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10％；可选的，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液时，甘油浓度为体积百分比50
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85％的甘油溶液时，所用的溶剂中乙醇浓度为体积百分比50
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85％；可选的，所述甘油溶液的溶剂是乙醇水溶液时，甘油浓度为体积百分比85
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98％的甘油溶液时，所用的溶剂中乙醇浓度为体积百分比95
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙继煌，李文红，丛敬，
申请(专利权)人：北京桀亚莱福生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：