抗Trop2纳米抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抗Trop2纳米抗体及其用途。本发明专利技术提供一种Trop2结合分子，包含抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗Trop2纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3。本发明专利技术还提供含有所述Trop2结合分子的嵌合抗原受体及其表达细胞。本文所述抗体和细胞具有良好的靶向Trop2的治疗效果。靶向Trop2的治疗效果。靶向Trop2的治疗效果。

Anti trop2 nano antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
抗Trop2纳米抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及生物免疫治疗
，具体涉及抗Trop2纳米抗体及其用途。

技术介绍

[0002]Trop2是由TACSTD2基因编码表达的细胞表面糖蛋白，全称为人滋养细胞表面糖蛋白抗原2（Trophoblast Cell Surface Antigens 2）。Trop2由疏水性前导肽、细胞外结构域、一个跨膜结构域和一个胞质尾部组成，是单次跨膜糖蛋白，大小为35.7KD，是一类钙离子通道信号转化器。Trop2蛋白N
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端为胞外域（Trop2EC），该胞外域通过一个单向跨膜螺旋（TM）与胞内短尾（Trop2IC）连接，从而固定于胞膜。其细胞质尾部有高度保守的磷脂酰肌醇4,5
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二磷酸（PIP2）结合序列，表明PIP2在Trop2的信号转导中起重要作用。除了PIP2结合基序外，它还含有保守的酪氨酸和丝氨酸磷酸化位点。
[0003]正常组织中Trop2不表达或者低表达，在乳腺癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌、头颈癌和卵巢癌等多种恶性肿瘤中过表达，可促进肿瘤的发生、侵袭、转移和扩散等，在肿瘤生长过程中起着关键作用，所以Trop2被认为是肿瘤免疫治疗候选的一个靶点。
[0004]嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor
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T cell，CAR
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T）是指经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，是一种针对肿瘤细胞表面特异性抗原的新型免疫治疗方法。大量研究表明，CAR
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T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善患者的生存状况。
[0005]嵌合抗原受体（CAR）是CAR
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T的核心部件，赋予T细胞以HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR由三个主要的结构域组成：胞外抗原结合域、跨膜结构域与胞内信号域。抗体作为CAR中重要的组成部分，其对于CAR
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T发挥特异性高效杀伤作用、降低毒性具有决定性影响。因此能够以高特异性结合目标抗原、同时具有低免疫原性的抗体是开发CAR
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T产品的重点。
[0006]在羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体，该抗体只包含一个重链可变区（Variable domain of heavy chain of heavy chain antibody，VHH）和两个常规的CH2与CH3区。克隆并表达出来的VHH 结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH晶体为2.5nm，长4nm，分子量只有15KDa，因此也被称作纳米抗体（Nanobody，Nb）。VHH可溶性极高，易于制造和修饰，循环半衰期短，具有高组织穿透性，不易聚集，能耐高温、强酸、强碱等致变性条件，适合于原核表达和各种真核表达系统，广泛用于开发治疗性抗体药物、诊断试剂、亲和纯化基质和科学研究等领域。纳米抗体具有独特的性质如分子量小、水溶性好、稳定性强、抗原识别能力强、易于生产等，近年来作为诊断工具越来越受欢迎，也被认为是CAR
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T和靶向药物递送的重要基础。
[0007]目前尚未见如本申请所记载的抗Trop2纳米抗体以及含该抗Trop2纳米抗体的
CAR
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T 细胞的报道。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供一种Trop2结合分子，包含抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗Trop2纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列。
[0009]在一个或多个实施方案中，所述抗Trop2纳米抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:4
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5中任一所示。
[0010]在一个或多个实施方案中，所述抗Trop2纳米抗体的FR1可选自SEQ ID NO:4
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5中任一所示的VHH的FR1，FR2可选自SEQ ID NO:4
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5中任一所示的VHH的FR2，FR3可选自SEQ ID NO:4
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5中任一所示的VHH的FR3，FR4可选自SEQ ID NO:4
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5中任一所示的VHH的FR4。
[0011]在一个或多个实施方案中，所述Trop2结合分子是包含一条、两条或多条抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段的单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体。
[0012]在一个或多个实施方案中，所述多价结合分子或多特异性结合分子通过连接子连接多个抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段。所述连接子由选自G和S的1
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15个氨基酸组成。
[0013]在一个或多个实施方案中，所述纳米抗体是骆驼重链抗体或软骨鱼重链抗体。
[0014]在一个或多个实施方案中，所述纳米抗体还包含重链恒定区。
[0015]在一个或多个实施方案中，所述重链恒定区是骆驼重链抗体的恒定区，包含CH2和CH3。
[0016]在一个或多个实施方案中，所述CH2和CH3是人IgG Fc的CH2和CH3，例如IgG1的CH2和CH3。
[0017]在一个或多个实施方案中，所述重链恒定区是软骨鱼重链抗体的恒定区，包含CH1、CH2、CH3、CH4和CH5。
[0018]在一个或多个实施方案中，本专利技术任一实施方案所述的Trop2结合分子为嵌合抗体或完全人抗体；优选为完全人抗体。
[0019]本专利技术另一方面提供一种嵌合抗原受体，包含任选的信号肽序列、本文任一实施方案所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区和胞内区。
[0020]在一个或多个实施方案中，胞内区包括胞内共刺激域和/或胞内信号域。
[0021]在一个或多个实施方案中，从N端到C端，该嵌合抗原受体依次含有信号肽、本文任一实施方案所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区、胞内共刺激域和胞内信号域。
[0022]本专利技术还提供核酸分子，其具有选自以下任一项的序列：（1）本文任一实施方案所述Trop2结合分子或嵌合抗原受体的编码序列；（2）（1）的互补序列；（3）（1）或（2）中任一序列的5
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50bp的片段。
[0023]在一个或多个实施方案中，所述片段是引物。
[0024]本专利技术还提供一种核酸构建物，包含本文所述的核酸分子。
[0025]在一个或多个实施方案中，所述核酸构建物是克隆载体、表达载体或整合载体。
[0026]本专利技术还提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Trop2结合分子，包含抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段，所述抗Trop2纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列，优选地，所述Trop2结合分子还具有选自以下一项或多项的特征：所述抗Trop2纳米抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:4
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5中任一所示，所述Trop2结合分子是包含一条、两条或多条抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段的单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体，所述纳米抗体是骆驼重链抗体或软骨鱼重链抗体，所述纳米抗体还包含重链恒定区，所述Trop2结合分子为嵌合抗体或完全人抗体。2.一种嵌合抗原受体，包含任选的信号肽序列、权利要求1所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区和胞内区，优选地，胞内区包括胞内共刺激域和/或胞内信号域，优选地，从N端到C端，该嵌合抗原受体依次含有信号肽、权利要求1所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区、胞内共刺激域和胞内信号域。3.一种核酸分子，其具有选自以下任一项的序列：（1）权利要求1所述Trop2结合分子或权利要求2所述的嵌合抗原受体的编码序列；（2）（1）的互补序列。4.一种核酸构建物，包含权利要求3所述的核酸分子，优选地，所述核酸构建物是克隆载体、表达载体或整合载体。5.一种宿主细胞，选自：（1）表达和/或分泌权利要求1所述Trop2结合分子或权利要求2所述的嵌合抗原受体；（2）包含权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海鹰，熊青卉，王彦，胡红明，
申请(专利权)人：上海恒润达生生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：