抗Trop2纳米抗体及其用途制造技术

技术编号:34357061 阅读:122 留言:0更新日期:2022-07-31 06:47
本发明专利技术涉及抗Trop2纳米抗体及其用途。本发明专利技术提供一种Trop2结合分子,包含抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段,所述抗Trop2纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3。本发明专利技术还提供含有所述Trop2结合分子的嵌合抗原受体及其表达细胞。本文所述抗体和细胞具有良好的靶向Trop2的治疗效果。靶向Trop2的治疗效果。靶向Trop2的治疗效果。

Anti trop2 nano antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
抗Trop2纳米抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及生物免疫治疗
,具体涉及抗Trop2纳米抗体及其用途。

技术介绍

[0002]Trop2是由TACSTD2基因编码表达的细胞表面糖蛋白,全称为人滋养细胞表面糖蛋白抗原2(Trophoblast Cell Surface Antigens 2)。Trop2由疏水性前导肽、细胞外结构域、一个跨膜结构域和一个胞质尾部组成,是单次跨膜糖蛋白,大小为35.7KD,是一类钙离子通道信号转化器。Trop2蛋白N

端为胞外域(Trop2EC),该胞外域通过一个单向跨膜螺旋(TM)与胞内短尾(Trop2IC)连接,从而固定于胞膜。其细胞质尾部有高度保守的磷脂酰肌醇4,5

二磷酸(PIP2)结合序列,表明PIP2在Trop2的信号转导中起重要作用。除了PIP2结合基序外,它还含有保守的酪氨酸和丝氨酸磷酸化位点。
[0003]正常组织中Trop2不表达或者低表达,在乳腺癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、宫颈癌、头颈癌和卵巢癌等多种恶性肿瘤中过表达,可促进肿瘤的发生、侵袭、转移和扩散等,在肿瘤生长过程中起着关键作用,所以Trop2被认为是肿瘤免疫治疗候选的一个靶点。
[0004]嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor

T cell,CAR

T)是指经基因修饰后,能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原,并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段,是一种针对肿瘤细胞表面特异性抗原的新型免疫治疗方法。大量研究表明,CAR

T细胞可以有效的识别肿瘤抗原,引起特异性的抗肿瘤免疫应答,显著改善患者的生存状况。
[0005]嵌合抗原受体(CAR)是CAR

T的核心部件,赋予T细胞以HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力,这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR由三个主要的结构域组成:胞外抗原结合域、跨膜结构域与胞内信号域。抗体作为CAR中重要的组成部分,其对于CAR

T发挥特异性高效杀伤作用、降低毒性具有决定性影响。因此能够以高特异性结合目标抗原、同时具有低免疫原性的抗体是开发CAR

T产品的重点。
[0006]在羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体,该抗体只包含一个重链可变区(Variable domain of heavy chain of heavy chain antibody,VHH)和两个常规的CH2与CH3区。克隆并表达出来的VHH 结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性,是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH晶体为2.5nm,长4nm,分子量只有15KDa,因此也被称作纳米抗体(Nanobody,Nb)。VHH可溶性极高,易于制造和修饰,循环半衰期短,具有高组织穿透性,不易聚集,能耐高温、强酸、强碱等致变性条件,适合于原核表达和各种真核表达系统,广泛用于开发治疗性抗体药物、诊断试剂、亲和纯化基质和科学研究等领域。纳米抗体具有独特的性质如分子量小、水溶性好、稳定性强、抗原识别能力强、易于生产等,近年来作为诊断工具越来越受欢迎,也被认为是CAR

T和靶向药物递送的重要基础。
[0007]目前尚未见如本申请所记载的抗Trop2纳米抗体以及含该抗Trop2纳米抗体的
CAR

T 细胞的报道。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供一种Trop2结合分子,包含抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段,所述抗Trop2纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3,其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列。
[0009]在一个或多个实施方案中,所述抗Trop2纳米抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:4

5中任一所示。
[0010]在一个或多个实施方案中,所述抗Trop2纳米抗体的FR1可选自SEQ ID NO:4

5中任一所示的VHH的FR1,FR2可选自SEQ ID NO:4

5中任一所示的VHH的FR2,FR3可选自SEQ ID NO:4

5中任一所示的VHH的FR3,FR4可选自SEQ ID NO:4

5中任一所示的VHH的FR4。
[0011]在一个或多个实施方案中,所述Trop2结合分子是包含一条、两条或多条抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段的单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体。
[0012]在一个或多个实施方案中,所述多价结合分子或多特异性结合分子通过连接子连接多个抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段。所述连接子由选自G和S的1

15个氨基酸组成。
[0013]在一个或多个实施方案中,所述纳米抗体是骆驼重链抗体或软骨鱼重链抗体。
[0014]在一个或多个实施方案中,所述纳米抗体还包含重链恒定区。
[0015]在一个或多个实施方案中,所述重链恒定区是骆驼重链抗体的恒定区,包含CH2和CH3。
[0016]在一个或多个实施方案中,所述CH2和CH3是人IgG Fc的CH2和CH3,例如IgG1的CH2和CH3。
[0017]在一个或多个实施方案中,所述重链恒定区是软骨鱼重链抗体的恒定区,包含CH1、CH2、CH3、CH4和CH5。
[0018]在一个或多个实施方案中,本专利技术任一实施方案所述的Trop2结合分子为嵌合抗体或完全人抗体;优选为完全人抗体。
[0019]本专利技术另一方面提供一种嵌合抗原受体,包含任选的信号肽序列、本文任一实施方案所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区和胞内区。
[0020]在一个或多个实施方案中,胞内区包括胞内共刺激域和/或胞内信号域。
[0021]在一个或多个实施方案中,从N端到C端,该嵌合抗原受体依次含有信号肽、本文任一实施方案所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区、胞内共刺激域和胞内信号域。
[0022]本专利技术还提供核酸分子,其具有选自以下任一项的序列:(1)本文任一实施方案所述Trop2结合分子或嵌合抗原受体的编码序列;(2)(1)的互补序列;(3)(1)或(2)中任一序列的5

50bp的片段。
[0023]在一个或多个实施方案中,所述片段是引物。
[0024]本专利技术还提供一种核酸构建物,包含本文所述的核酸分子。
[0025]在一个或多个实施方案中,所述核酸构建物是克隆载体、表达载体或整合载体。
[0026]本专利技术还提本文档来自技高网
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Trop2结合分子,包含抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段,所述抗Trop2纳米抗体的互补决定区CDR包含CDR1、CDR2和CDR3,其中CDR1包括SEQ ID NO:1所示的序列、CDR2包括SEQ ID NO:2所示的序列、和CDR3包括SEQ ID NO:3所示的序列,优选地,所述Trop2结合分子还具有选自以下一项或多项的特征:所述抗Trop2纳米抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:4

5中任一所示,所述Trop2结合分子是包含一条、两条或多条抗Trop2纳米抗体或其抗原结合片段的单价或多价纳米抗体或单域抗体、或多特异性纳米抗体或单域抗体,所述纳米抗体是骆驼重链抗体或软骨鱼重链抗体,所述纳米抗体还包含重链恒定区,所述Trop2结合分子为嵌合抗体或完全人抗体。2.一种嵌合抗原受体,包含任选的信号肽序列、权利要求1所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区和胞内区,优选地,胞内区包括胞内共刺激域和/或胞内信号域,优选地,从N端到C端,该嵌合抗原受体依次含有信号肽、权利要求1所述的Trop2结合分子、铰链区、跨膜区、胞内共刺激域和胞内信号域。3.一种核酸分子,其具有选自以下任一项的序列:(1)权利要求1所述Trop2结合分子或权利要求2所述的嵌合抗原受体的编码序列;(2)(1)的互补序列。4.一种核酸构建物,包含权利要求3所述的核酸分子,优选地,所述核酸构建物是克隆载体、表达载体或整合载体。5.一种宿主细胞,选自:(1)表达和/或分泌权利要求1所述Trop2结合分子或权利要求2所述的嵌合抗原受体;(2)包含权利...

【专利技术属性】
技术研发人员:王海鹰熊青卉王彦胡红明
申请(专利权)人:上海恒润达生生物科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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