一种通过电泳分离蛋白的凝胶、配合使用的缓冲液及其试剂盒制造技术

本发明专利技术属于蛋白电泳试剂领域，公开了一种通过电泳分离蛋白的凝胶、配合使用的缓冲液及其试剂盒。包括含有凝胶缓冲剂、凝胶体系稳定剂、蛋白增溶剂、丙烯酰胺的凝胶和含有2，2

【技术实现步骤摘要】
一种通过电泳分离蛋白的凝胶、配合使用的缓冲液及其试剂盒


[0001]本专利技术属于蛋白电泳试剂领域，公开了一种通过电泳分离蛋白的凝胶、配合使用的缓冲液及其试剂盒。

技术介绍

[0002]聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于分离蛋白质和核酸，在生物学、医学等生物化学相关领域都有广泛使用，通过改变聚合前丙烯酰胺的浓度，可以制备出不同孔径的聚丙烯酰胺凝胶。在1970年，laemmli创建了含有十二烷基硫酸钠的变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS
‑
PAGE),简称laemmli系统凝胶，这项技术被广泛应用于蛋白质的分析。
[0003]传统的laemmli系统由三羟甲基氨基甲烷作为缓冲剂控制凝胶pH值，下层胶的pH值为8.8。laemmli系统凝胶具有良好的分离效果和条带清晰度，然而因其凝胶内的碱性环境使聚合后的聚丙烯酰胺易被水解，会扰乱电泳过程中蛋白质的迁移，并会使蛋白条带模糊不清。
[0004]在将凝胶pH调整至偏酸性时，聚丙烯酰胺凝胶的稳定性得到极大提高，可以将凝胶提前制备好，极大的节省了蛋白电泳实验的操作时间，并因批量制备，也提高了蛋白电泳结果的稳定性。
[0005]因其核心是将其pH值控制在偏酸性环境，目前使用的缓冲剂主要是双(2
‑
羟甲基)氨基
‑
三(羟甲基)甲烷和三羟甲基氨基甲烷两类。在电泳中其尾随离子的种类对电泳影响很大，主要分为传统的甘氨酸和两性离子缓冲剂(Good
’
s buffer)，Good
’
s buffer中作为电泳时尾随离子的主要是MOPS、MES和HEPES三种，在使用以上三种时，与laemmli系统相比，电泳迁移速度更快可节省时间，而且电泳过程中蛋白质被修饰的概率更低，但是这种系统的凝胶在分离时蛋白质的迁移位置与传统laemmli系统有较大不同，且原料的价格很高。
[0006]在电泳时其阳极区域会随电泳进行而蓄积氢离子，两种缓冲剂中双(2
‑
羟甲基)氨基
‑
三(羟甲基)甲烷和三羟甲基氨基甲烷的作用就是为保证凝胶内pH值的稳定，如果缓冲能力不够，会使氢离子无法得到吸收，使凝胶底部靠近阳极区域pH值大幅度降低，导致蛋白质在凝胶下部无法迁移。所以现有方法不能通过降低缓冲剂的浓度，来降低成本。
[0007]在预制胶体系内电泳时，因与传统laemmli系统相比pH值低，所以电泳时实际载量低于传统方法，且在电泳分离蛋白质时，有时会有不容颗粒影响电泳时蛋白质的迁移。

技术实现思路

[0008]针对上述情况，本专利技术公开了一种通过电泳分离蛋白的凝胶、配合使用的缓冲液及其试剂盒。
[0009]本专利技术的技术方案如下：
[0010]一种通过电泳分离蛋白的凝胶，包括以下组份：
[0011]凝胶缓冲剂：2，2
‑
双二羟甲基苯胺或三羟甲基氨基甲烷；
[0012]凝胶体系稳定剂：谷氨酸、柠檬酸、苹果酸、丁二酸中的一种或者多种；
[0013]蛋白增溶剂：二甲基甲酰胺；
[0014]丙烯酰胺：N，N
‑
甲叉双丙烯酰胺。
[0015]进一步的，所述通过电泳分离蛋白的凝胶是通过催化剂：过硫酸铵和TEMED催化得到的。
[0016]进一步的，所述凝胶缓冲剂：2，2
‑
双二羟甲基苯胺或三羟甲基氨基甲烷的组分浓度为100
‑
400mM，优选为100mM
‑
150mM。
[0017]进一步的，所述凝胶体系稳定剂为任意配比的谷氨酸、柠檬酸、苹果酸、丁二酸，组分浓度为1
‑
50mM。
[0018]进一步的，所述丙烯酰胺：N，N
‑
甲叉双丙烯酰胺，组分浓度为700mM
‑
3000mM。
[0019]进一步的，所述蛋白增溶剂：二甲基甲酰胺的组分浓度为1mM
‑
100mM。
[0020]进一步的，所述凝胶的pH值为6.4
‑
6.6。
[0021]与上述通过电泳分离蛋白凝胶配合使用的凝胶电泳缓冲液，包括以下组分：
[0022]1. 2，2
‑
双二羟甲基苯胺或三羟甲基氨基甲烷，组分浓度为10
‑
100mM；
[0023]2. 3
‑
吗啉丙磺酸(MOPS)或2
‑
N
‑
吗啉代烷磺酸(MES)，组分浓度为10
‑
100mM；
[0024]3.十二烷基硫酸钠，组分浓度为1
‑
5mM；
[0025]4.EDTA，组分浓度为0.1
‑
3mM。
[0026]进一步的，一种凝胶电泳试剂盒，包含上述配比的凝胶和凝胶电泳缓冲液任意比例混合。
[0027]与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
[0028]因缓冲剂需要控制凝胶pH值，所以需要一定浓度以上，本专利技术在现有配方内加入酸性氨基酸(谷氨酸)，谷氨酸提高凝胶在酸性区域内的缓冲能力，防止酸化的发生；同时因谷氨酸的加入也会提高凝胶的稳定性；谷氨酸本身的缓冲区间在pH值3左右，加入谷氨酸可以通过其羧基和氨基结合氢离子，防止上文中提高的氢离子蓄积，同时聚丙烯酰胺本身的酰胺键会水解为羧基，所以加入谷氨酸也会起到逆向抑制作用。因凝胶的pH值是中性或受尾随离子的影响，导致电泳分离蛋白载量低，且对有不容颗粒的样品耐受性差，所以在本专利技术中加入二甲基甲酰胺,提高样品溶解性，从而提高蛋白载量，并能防止不溶颗粒堵塞凝胶。二甲基甲酰胺是用途很广的优良溶剂，可以作为多种高分子聚合物的良好溶剂，依次类推推测可用作聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质的增溶剂，增加在迁移过程中蛋白质的溶解度。
[0029]与现有技术相比，本专利技术可将主要缓冲剂用量减少到100mM
‑
150mM，本专利技术中加入谷氨酸，可以防止凝胶的底部氢离子的蓄积，从而避免凝胶局部pH低于2而使蛋白质无法迁移(氢离子蓄积的直观表现是溴酚蓝会变黄，然后无法移动，并变形)。
[0030]同时，本专利技术所述的凝胶可以增加蛋白质的溶解度，避免样品中有过多的不溶颗粒，使得电泳条带更加平直。
附图说明
[0031]图1为实施例1中电泳图；
[0032]图2为实施例2中的电泳图；
[0033]图3为实施例3中的电泳图；
[0034]图4为实施例4中配方一(当天配制)分离线性关系图，其中横坐标为蛋白质迁移分子量以10为底的对数值，纵坐标是迁移条带的上边缘距离下边缘溴酚蓝的距离值；
[0035]图5为实施例4中配方一(配制后37℃保存十二天)分离线性关系图，其中横坐标为蛋白质迁移分子量以10为底的对数值，纵坐标是迁移条带的上边缘距离下边缘溴酚蓝的距离值；
[0036]图6为实施例4中配方二(当天配制)分离线性关系图，其中横坐标为蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过电泳分离蛋白的凝胶，其特征在于，组分包括：凝胶缓冲剂：2，2
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双二羟甲基苯胺或三羟甲基氨基甲烷；凝胶体系稳定剂：谷氨酸、柠檬酸、苹果酸、丁二酸中的一种或者多种；蛋白增溶剂：二甲基甲酰胺；丙烯酰胺：N，N
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甲叉双丙烯酰胺。2.根据权利要求1所述的通过电泳分离蛋白的凝胶，其特征在于，是通过催化剂：过硫酸铵和TEMED催化得到的。3.根据权利要求1所述的通过电泳分离蛋白的凝胶，其特征在于，所述凝胶缓冲剂：2，2
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双二羟甲基苯胺或三羟甲基氨基甲烷的组分浓度为100
‑
400mM。4.根据权利要求1所述的通过电泳分离蛋白的凝胶，其特征在于，所述凝胶体系稳定剂为任意配比的谷氨酸、柠檬酸、苹果酸、丁二酸，凝胶体系稳定剂的组分浓度为1
‑
50mM。5.根据权利要求1所述的通过电泳分离蛋白的凝胶，其特征在于，所述蛋白增溶剂：二甲基甲酰胺的组分浓度为1mM
‑
100mM。6.根据权利要求1所述的通过电泳分离蛋白的凝胶，其特征在于，所述丙烯酰胺；N，N
‑
甲叉双丙烯酰胺的组分浓度为700mM
‑
3000mM。7.根据权利要求1所述的通过电泳分离蛋白的凝胶，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李广亮，李民强，
申请(专利权)人：大连博格林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：