【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种高质量055:b5血清型lps表达纯化方法。
技术介绍
1、lps全称为脂多糖(lipopolysaccharide)，是一种存在于细胞外膜的复合物，广泛存在于革兰氏阴性菌(gram-negative bacteria)中。lps是纤毛、鞭毛和其他细胞表面附着结构的组成部分，同时也是一种能够引起免疫反应的强烈免疫原。
2、lps的结构由三个主要部分组成：脂a、内核多糖(core oligosaccharide)和o抗原(o antigen)。脂a是lps的脂质基部分，是与细胞膜脂质相互作用的重要组成部分。内核多糖是连接脂a和o抗原的多糖链，它具有高度变异性，可以根据不同的细菌种类而有所不同。o抗原是lps的抗原决定糖链，也是区分细菌种类的关键标志。
3、055:b5血清型lps(lipopolysaccharide)是一种存在于细菌细胞外膜上的糖脂复合物。它是革兰氏阴性细菌中常见的一种lps血清型，包括大肠杆菌(escherichia coli)等。由于其独特的结构和功能特性，055:b5血清型lps在医学和生物科学研究中被广泛应用。
4、在免疫学研究中，055:b5血清型lps是一种免疫激活物，具有较强的免疫原性。研究人员可以利用它来模拟细菌感染，激活机体的免疫反应。通过添加055:b5血清型lps到培养细胞中，可以诱导免疫细胞释放多种细胞因子，如肿瘤坏死因子α(tnf-α)、白细胞介素-6(il-6)等，从而研究免疫细胞的激活状态和相关免
5、在疫苗研究中，055:b5血清型lps可以作为免疫佐剂，增强疫苗的免疫原性和免疫效果。将疫苗抗原和055:b5血清型lps结合，可以激活宿主的免疫细胞，增强疫苗的免疫刺激作用。有助于提高疫苗的免疫保护效果。
6、在炎症模型的制备中，055:b5血清型lps可以诱导机体产生炎症反应，通过模拟感染状态来研究炎症反应的机制和调控。将055:b5血清型lps通过注射、给药或刺激细胞等方式引入动物模型中，可以触发免疫细胞的激活和炎症反应，进一步研究炎症的发生、调控和治疗策略。
7、在抗菌药物筛选中，055:b5血清型lps作为一种存在于细菌外膜上的关键成分，055:b5血清型lps在细菌的生理、代谢等方面起着重要作用。因此，研究人员可以利用055:b5血清型lps来评估抗菌药物的抑菌活性和毒性。通过观察和分析抗菌药物对055:b5血清型lps的作用，可以评估其对细菌外膜的影响，进而指导抗菌药物的研发和优化。
8、055:b5血清型lps作为一种生物试剂，具有重要的生物学功能和应用价值。在免疫学研究、疫苗研究、炎症模型的制备和抗菌药物筛选等方面，它为科学家们提供了一个重要的工具，有助于深入了解免疫机制、炎症过程和抗菌药物的作用机制。通过对lps的深入研究，我们可以更好地了解细菌感染和免疫反应的机制，为疾病防治和新药研发提供有力支持。市场对脂多糖的需求越来越高，如何大量获得高质量lps以供给生物领域需求成为一个亟待解决的问题。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种高质量055:b5血清型lps表达纯化方法，以简单高效获得大量高质(多糖链脂多糖)lps为出发点，将肠道定植的055:b5血清型大肠杆菌作为发酵菌种，通过发酵、破碎、核酸酶处理、离子交换、梯度沉淀等步骤分离提纯，最终大量得到高质量055:b5 lps产品。
2、本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：高质量055:b5血清型lps表达纯化方法，步骤包括：
3、s1.055:b5血清型大肠杆菌菌株定向改造：将带有氨苄青霉素抗性质粒pet-21a载体转入大肠杆菌，得到改造后的055:b5血清型大肠杆菌菌株；
4、s2.将步骤s1得到的055:b5血清型大肠杆菌发酵生成055:b5血清型lps；
5、s3.将步骤s2得到的055:b5血清型lps纯化，收集得到脂多糖精纯液；
6、s4.将步骤s3得到的脂多糖精纯液梯度沉淀获取高质量脂多糖；
7、进一步的，所述步骤s1具体包括055:b5血清型大肠杆菌感受态制备和055:b5血清型大肠杆菌转化。
8、进一步的，所述步骤s2发酵步骤具体为：
9、(1)大肠杆菌种液制备
10、配置种液：葡萄糖2-8g/l，酵母粉2-8g/l，蛋白胨2-8g/l，磷酸氢二钾1-5g/l，磷酸二氢钾1-5g/l，硫酸镁0-0.1g/l，硫酸锰0-0.1g/l(最佳条件为葡萄糖5g/l，酵母粉5g/l，蛋白胨5g/l，磷酸氢二钾2g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁0.05g/l，硫酸锰0.05g/l)。广口三角瓶20％装液量，纯化水。
11、(2)恒温摇床，转速200rpm，37℃，发酵时间6h-12h(最佳时间为8h)。
12、(3)配置发酵培养基
13、发酵培养基：葡萄糖5-20g/l，酵母粉1-10g/l，蛋白胨10-20g/l，磷酸氢二钾1-5g/l，磷酸二氢钾1-5g/l，硫酸镁0-0.1g/l，硫酸锰0-0.1g/l，消泡剂0-1g/l(最佳条件为葡萄糖10g/l，酵母粉10g/l，蛋白胨15g/l，磷酸氢二钾3g/l，磷酸二氢钾3g/l，硫酸镁0.05g/l，硫酸锰0.05g/l，消泡剂0.5g/l)，纯化水。
14、(4)将培养基进行灭菌121℃，30min。
15、(5)灭菌完成后进行冷却，之后设定发酵培养的参数：温度20-37℃，ph值5.0-9.0，转速300rpm(30l发酵罐)，通气量最大20-30m3/h(30l发酵罐或其它体积发酵罐最大通气量)溶解氧设定值为80-100％，罐压0.05mpa(最佳条件为温度37℃，ph值7.2，转速300rpm，通气量最大24m3/h溶解氧设定值为100％，罐压为0.05mpa)。
16、(6)将培养完成的种子按发酵体积5％，转入发酵罐中，进行发酵培养12h以上。初始通气量12m3/h(30l发酵罐或其它体积发酵罐最大通气量50％)，初始od值50％，根据od值变化，逐渐调节通气量至最大24m3/h。
17、(7)培养过程采用浓度为200g/l的氨水自动调控ph值。ph值控制在(7.0-7.2)
18、(8)补料培养基：甘油200-800g/l，酵母粉50-200g/l，消泡剂0.2-1g/l；2h开始补料，补料至10h，补料流速为2ml/(h·l)，2h-4h，补料流速为4ml/(h·l)，4h-6h，补料流速为6ml/(h·l)，6h-8h，补料流速为8ml/(h·l)，8h-10h。(最佳条件为甘油600g/l，酵母粉100g/l，消泡剂0.5g/l)。
19、(9)离心收集菌泥。
20、进一步的，所述步骤s3中055:b5血清型lps纯化步骤具体为：<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高质量055:B5血清型LPS表达纯化方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述的高质量055:B5血清型LPS表达纯化方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括055:B5血清型大肠杆菌感受态制备和055:B5血清型大肠杆菌转化。
3.根据权利要求1所述的高质量055:B5血清型LPS表达纯化方法，其特征在于，所述步骤S2发酵步骤具体为：
4.根据权利要求1所述的高质量055:B5血清型LPS表达纯化方法，其特征在于，所述步骤S3中055:B5血清型LPS纯化步骤具体为：
5.根据权利要求1所述的高质量055:B5血清型LPS表达纯化方法，其特征在于，所述步骤S4中055:B5血清型LPS梯度沉淀获取高质量脂多糖步骤具体为：
【技术特征摘要】
1.一种高质量055:b5血清型lps表达纯化方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述的高质量055:b5血清型lps表达纯化方法，其特征在于，所述步骤s1具体包括055:b5血清型大肠杆菌感受态制备和055:b5血清型大肠杆菌转化。
3.根据权利要求1所述的高质量055:b5血清型lps表达纯化方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：丛建铭，李民强，方博，
申请(专利权)人：大连博格林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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