【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，特指利用鸡腿菇菌种采用液体发酵技术制备槲皮素的方法。
技术介绍
1、恶性肿瘤严重危害我国人民的健康与生命，且其发生率和死亡率逐渐上升。如何控制肺癌的发生发展已成为满足人民对美好精神生活的需求的一个重要瓶颈。
2、槲皮素(quercetin)作为一种在自然界中广泛存在的多羟基黄酮类化合物，分子式为c15h10o7。槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌和抗血小板凝集等多种生物学活性。同时，槲皮素的毒副作用非常小，可避免常见药物对机体的致畸、致癌和致死效应，因此具有良好的临床价值和应用价值。许多研究表明槲皮素不仅具有治疗肺癌的作用。懈皮素具有抗氧化作用,因此其能够清除细胞的自由氧自由基,减少自由基对机体内生物膜的破坏损伤,抑制机体发生炎症时腹腔内毛细血管等通透巧的増加,从而减少肠道内水分和电解质的流失,从而达到止泻的目的。此外,研巧表明槲皮素具有降低机体的胰岛素抗性作用,这说明槲皮素具有显著的降血糖作用。总之，槲皮素的生物活性与其酚羟基的个数和位置有关，酚羟基的位置对其生理功能起着至关重要的作用。因此槲皮素可以应用于药品、保健品、功能食品、食品饮料、饲料、日化用品等生产领域，市场需求量极大，而且正逐渐增加。
3、槲皮素广泛存在于植物的茎、叶、花、果实、种子中，例如荞麦秆/叶、沙棘、洋葱、芦笋、青椒、莴苣、萝卜、马铃薯叶、番茄叶、豌豆叶、蚕豆叶、苹果、芒果、槐米、三七、银杏、接骨木等均含有槲皮素，其中，荞麦秆/叶、豌豆叶、蚕豆叶中槲皮素含量高。由于在植物中广泛存在，槲皮素可利用植物分离提取法
技术实现思路
1、针对目前癌症特别是肺癌发病率高，槲皮素具有显著控制癌症功效，而槲皮素尽管来源广泛，但是在每种植物中含量低的问题，本专利技术的目的在于：提供一种通过液体发酵获得含有高含量槲皮素菌丝体用于制备槲皮素，鸡腿菇菌丝体通过乙醇提取、浓缩、丙酮重结晶获取槲皮素的方法，槲皮素≥98％。
2、本专利技术人经过深入的研究，摸索出一种以甘油、木糖和尿素为主要原料，通过鸡腿菇菌丝液态摇瓶培养、液体种子罐扩大培养获得含有槲皮素发酵液。发酵液通过浓缩、乙醇提取、水饱和正丁醇萃取、重结晶获取槲皮素。
3、本申请提供了一种槲皮素的生物发酵制备方法，包括如下步骤：
4、步骤1、将鸡腿菇菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中，制得鸡腿菇斜面菌种；
5、步骤2、将步骤1制得的鸡腿菇斜面菌种接种到摇瓶培养基中，培养制得摇瓶菌种；
6、步骤3、将步骤2制得的摇瓶菌种按5-20％体积比接种量，接种到种子罐培养基，培养制得种子罐菌种；
7、步骤4、将步骤3制得的种子罐菌种按5-20％体积比接种量，无菌地转移到发酵培养基中，培养制得含有槲皮素的发酵液；
8、步骤5、将步骤4制得的发酵液进行分离纯化，得到槲皮素纯品；
9、其中，所述摇瓶培养基、种子罐培养基、发酵培养基含有玉米粉、麸皮、葡萄糖、果糖、甘油、酸水解大豆蛋白、kh2po4、mgso4、znso4、vb2、vc。
10、进一步地，种子罐培养基含有槐米或芦丁,发酵培养基含有槐米或芦丁，含有尿素。
11、进一步地，摇瓶培养基和种子罐培养基中玉米粉浓度为5-15g/l，麸皮浓度为5-25g/l，葡萄糖浓度为5-25g/l，果糖浓度为1-20g/l，甘油浓度为2-20g/l、酸水解大豆蛋白浓度为0.5-2g/l、kh2po4浓度为1-2.4g/l、mgso4浓度为0.5-2g/l、znso4浓度为0.01-0.05g/l、vb2浓度为0.01-0.04g/l、vc浓度为0.01-0.06g/l；发酵培养基中玉米粉浓度为5-30g/l，麸皮浓度为5-55g/l，葡萄糖浓度为10-50g/l，果糖浓度为1-40g/l，甘油浓度为5-45g/l、尿素浓度为1-4g/l、酸水解大豆蛋白浓度为1-4g/l、kh2po4浓度为1-2.4g/l、mgso4浓度为0.5-2g/l、znso4浓度为0.01-0.05g/l、vb2浓度为0.01-0.04g/l、vc浓度为0.01-0.06g/l。
12、进一步地，摇瓶培养基和种子罐培养基中玉米粉浓度为10-15g/l，麸皮浓度为10-25g/l，葡萄糖浓度为15-25g/l，果糖浓度为11-20g/l；所述发酵培养基中玉米粉浓度为17-30g/l，麸皮浓度为30-55g/l，葡萄糖浓度为30-50g/l，果糖浓度为20-40g/l。
13、进一步地，步骤2的培养条件为100-200rpm、20-32℃，培养3-7天。
14、进一步地，步骤2的培养条件为100-200rpm、20-26℃，培养5-7天；或者100-200rpm、26-32℃，培养3-5天。
15、进一步地，步骤3的培养条件为20-32℃，通气量0.1-1.2/min，转速60-150转/min培养2-4天。
16、进一步地，步骤3的培养条件为24-32℃，通气量0.4-1.2/min，转速60-120转/min培养2-4天。
17、进一步地，步骤4的培养条件为20-32℃，通气量0.1-1.2/min，转速60-150转/min培养24-144小时。
18、进一步地，步骤4的培养条件为24-32℃，通气量0.4-1.2/min，转速60-150转/min培养68-144小时。
19、进一步地，步骤5中分离纯化进一步包含以下步骤：
20、步骤a、发酵液离心，滤渣烘干，获得含有槲皮素的鸡腿菇菌丝体；
21、步骤b、鸡腿菇菌丝体使用无水乙醇回流提取，提取液浓缩后与去离子水混匀，沉淀，抽滤，滤渣用去离子水洗涤，烘干；
22、步骤c、干燥物用丙酮溶解，结晶，得到槲皮素纯品。
23、进一步地，上述步骤b中，鸡腿菇菌丝体与30倍体积无水乙醇混合，85℃的回流提取4h，提取液浓缩至原体积的1/5与6倍体积的去离子水混匀。
24、具体方案如下：
25、一种槲皮素的生物发酵制备方法，按照下述步骤进行：
26、步骤1、根据配合比和制造量选择适当量的槐米(或芦丁)、玉米粉、麸皮、葡萄糖、果糖、甘油、尿素、酸水解大豆蛋白、kh2po4、mgso4、znso4、vb2、vc；所使用的的1l培养基中主要成分包括槐米20-40g(或芦丁5-10g)、玉米粉5-30g、麸皮5-55g、葡萄糖10-50g、果糖1-40g、甘油5-45g、尿素1-4g、酸水解大豆蛋白1-4g、kh2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种槲皮素的生物发酵制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，摇瓶培养基和种子罐培养基中玉米粉浓度为5-15g/L，麸皮浓度为5-25g/L，葡萄糖浓度为5-25g/L，果糖浓度为1-20g/L，甘油浓度为2-20g/L、酸水解大豆蛋白浓度为0.5-2g/L、KH2PO4浓度为1-2.4g/L、MgSO4浓度为0.5-2g/L、ZnSO4浓度为0.01-0.05g/L、VB2浓度为0.01-0.04g/L、VC浓度为0.01-0.06g/L；发酵培养基中玉米粉浓度为5-30g/L，麸皮浓度为5-55g/L，葡萄糖浓度为10-50g/L，果糖浓度为1-40g/L，甘油浓度为5-45g/L、尿素浓度为1-4g/L、酸水解大豆蛋白浓度为1-4g/L、KH2PO4浓度为1-2.4g/L、MgSO4浓度为0.5-2g/L、ZnSO4浓度为0.01-0.05g/L、VB2浓度为0.01-0.04g/L、VC浓度为0.01-0.06g/L。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述摇瓶培养基和种子罐培养基中玉米粉浓
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2的培养条件为100-200rpm、20-32℃，培养3-7天。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2的培养条件为100-200rpm、20-26℃，培养5-7天；或者100-200rpm、26-32℃，培养3-5天。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3的培养条件为20-32℃，通气量0.1-1.2/min，转速60-150转/min培养2-4天。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3的培养条件为24-32℃，通气量0.4-1.2/min，转速60-120转/min培养2-4天。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4的培养条件为20-32℃，通气量0.1-1.2/min，转速60-150转/min培养24-144小时。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4的培养条件为24-32℃，通气量0.4-1.2/min，转速60-150转/min培养68-144小时。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5中分离纯化进一步包含以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种槲皮素的生物发酵制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，摇瓶培养基和种子罐培养基中玉米粉浓度为5-15g/l，麸皮浓度为5-25g/l，葡萄糖浓度为5-25g/l，果糖浓度为1-20g/l，甘油浓度为2-20g/l、酸水解大豆蛋白浓度为0.5-2g/l、kh2po4浓度为1-2.4g/l、mgso4浓度为0.5-2g/l、znso4浓度为0.01-0.05g/l、vb2浓度为0.01-0.04g/l、vc浓度为0.01-0.06g/l；发酵培养基中玉米粉浓度为5-30g/l，麸皮浓度为5-55g/l，葡萄糖浓度为10-50g/l，果糖浓度为1-40g/l，甘油浓度为5-45g/l、尿素浓度为1-4g/l、酸水解大豆蛋白浓度为1-4g/l、kh2po4浓度为1-2.4g/l、mgso4浓度为0.5-2g/l、znso4浓度为0.01-0.05g/l、vb2浓度为0.01-0.04g/l、vc浓度为0.01-0.06g/l。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述摇瓶培养基和种子罐培养基中玉米粉浓度为10-15g/l，麸皮浓度为10-25g/l，葡萄糖浓度为15-25g/l，果糖浓度为11-20g/l；所述发酵培养基中玉米粉浓度为17-30g/l，麸皮浓度为30-55...
【专利技术属性】
技术研发人员：张志才，
申请(专利权)人：江苏安惠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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