一种复合菌剂及其对石油-氯酚复合污染环境的修复制造技术

本发明专利技术属于环境中石油

A compound bacterial agent and its remediation of petroleum chlorophenol compound polluted environment

【技术实现步骤摘要】
一种复合菌剂及其对石油
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氯酚复合污染环境的修复


[0001]本专利技术属于环境中石油
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氯酚类复合污染环境生物修复
，涉及一种由粪产碱菌(Alcaligenes faecailsY5)C4、芽孢杆菌(Bacillus sp.7614)C5、马氏芽孢杆菌(Bacillus marisflavi strain BCB4
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1)L3、水芽孢杆菌(Bacillus aquimaris T 172)L4构成的复合菌剂，具体包括复合菌剂的制备方法及其在石油
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氯酚复合污染环境生物修复领域的应用。

技术介绍

[0002]作业年限较长的油田井场或石化污染场地不仅石油烃污染严重，有机氯化合物也大有存在。虽然环境具有一定的“自净”作用，能降解和转化部分有毒有机污染物，但是大多数情况下，该自然衰减过程是十分漫长且不彻底的。关于石油和其他有机化合物在水生环境、沉积物、土壤环境中发生的污染事件已有大量报道，一旦未采取适当的处理处置措施进入环境，最终威胁到环境安全和人类的健康和安全。
[0003]原油中天然存在的有机氯化物含量一般较少，但在采油、炼油过程中因含氯化学助剂的使用，使得原油有机氯含量变高，影响石油的质量。不同油田原油中有机氯化合物的组成各有差异，一般为氯代烷烃类、挥发性氯酚类和氯苯类污染物等。
[0004]由于这些物质对功能微生物具有较强的毒性或抑制性，单一降解菌的降解能力往往比微生物联合体要弱，达不到彻底降解污染物的目的。因此，构建复合菌群可大大提高微生物的竞争力及污染物的去除能力。于是，需引入其他类型的高效降解菌与石油烃降解菌进行复配，从而实现在复合污染体系中石油及其他有机污染物的共同降解。
[0005]目前，国内主要集中在研究石油与重金属或盐类等污染物的复合污染，对石油与其他有机化合物复合污染的微生物降解研究还较少，且微生物修复技术被认为是最可取的方法之一，美国环境保护署(USEPA)将生物修复定义为一种使用微生物将有毒污染物降解为危害较小的产物，从而减少人为活动产生的环境污染物。生物修复技术成本较低、简单易行、不易产生二次污染，适用于大规模复合污染体系的修复。本专利技术选用氯酚化合物(2,4
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二氯苯酚，简称2,4
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DCP)为代表性有机氯化物，设置石油
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氯酚复合污染体系，进一步构建高效复配菌剂来进行降解。
[0006]因此，研究一种成本低、环境友好、效率高的微生物菌剂对于石油
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氯酚复合污染环境的修复具有重要意义。

技术实现思路

[0007]针对上述研究背景，本专利技术提供了一种复合微生物菌剂，由粪产碱菌(Alcaligenesfaecails Y5)C4、芽孢杆菌(Bacillus sp.7614)C5、马氏芽孢杆菌(Bacillus marisflavi strain BCB4
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1)L3、水芽孢杆菌(Bacillus aquimaris T 172)L4构成，所述复合菌剂具有降解石油和氯酚的特性，能够很好的应用于石油
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氯酚复合污染环境的修复中。
[0008]本专利技术通过以下技术方案予以实现：
[0009]本专利技术的菌株C4(AlcaligenesfaecailsY5)和C5(Bacillus sp.7614)从东营东辛采油厂长期受石油污染土壤中筛选而得，菌株L3(Bacillus marisflavi strain BCB4
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1)和L4(Bacillus aquimaris T 172)从青岛市污水处理厂二沉池活性污泥中筛选而得，经研究发现，复配菌可有效提高氯酚和石油的降解率。
[0010]一种石油
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氯酚降解复合菌剂的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0011]将接种量为1％的菌株C4、C5、L3、L4分别独立的接种到液体LB培养基中，35℃、160rpm条件下振荡培养7h后，再将C4、C5、L3、L4按照1:2:2:1(体积比)进行混合后于35℃、160rpm条件下再培养6～8h得到复配菌混合发酵液，将混合发酵液离心后去掉上清液，再经过磷酸盐缓冲液清洗3次后收集菌体，最后将收集的菌体于
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20℃冰箱过夜预冻后经真空冷冻干燥即得复合菌剂。
[0012]活化及发酵过程所用牛肉膏液体培养基组成成分包括：
[0013]牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 10.0g，蒸馏水1000mL；
[0014]所述活化培养基使用前调pH为7.0～7.5，121℃下灭菌20min后使用。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有下述优点：
[0016](1)本专利技术涉及的复合菌剂的筛菌、培养过程均使用常规培养基，不需要特殊的培养环境，混合菌剂的制备更为简便。
[0017](2)所述粪产碱菌(Alcaligenesfaecails Y5)C4、芽孢杆菌(Bacillus sp.7614)C5、马氏芽孢杆菌(Bacillus marisflavi strain BCB4
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1)L3、水芽孢杆菌(Bacillus aquimaris T 172)L4协同性能较好，形成高效的代谢降解体系，较单一菌株相比，可以明显提高氯酚和石油的降解效果；
[0018](3)本专利技术利用的复合菌剂是一种人工筛选构建的混合菌剂，较成分不完全明确的天然混菌体系和单一菌株对污染物的生物降解优势明显。该菌剂的菌种成分明确，制备工艺简单，成本低，环境友好，具有广阔的应用前景。
[0019](4)本专利技术公开的复合菌剂可以同时实现对氯酚及石油污染物的高效降解，较现有的微生物技术而言功能更全面。
附图说明
[0020]图1中的(a)为筛选得到的粪产碱菌(Alcaligenesfaecails Y5)C4在牛肉膏固体培养基上的生长状态；
[0021]图1中的(b)为筛选得到的芽孢杆菌(Bacillus sp.7614)C5在牛肉膏固体培养基上的生长状态；
[0022]图1中的(c)为筛选得到的马氏芽孢杆菌(Bacillus marisflavi strain BCB4
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1)L3在牛肉膏固体培养基上的生长状态；
[0023]图1中的(d)为筛选得到的水芽孢杆菌(Bacillus aquimaris T 172)L4在牛肉膏固体培养基上的生长状态；
[0024]图2为四株菌的系统发育树；
[0025]图3为四株菌不同体积复配比对石油的降解效果图；
[0026]图4为降解7d后石油的红外光谱图；
[0027]图5为降解7d后石油的碳数分布图；
具体实施方式
[0028]为了使本
的人员更好的理解本专利技术中的技术方案，下面将结合本申请中具体的实施例，对本申请的具体技术方案进行详细的说明。应当指出，所描述的实施例并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合菌剂及其对石油
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氯酚复合污染环境的修复，其特征在于，该复合菌剂由粪产碱菌(Alcaligenes faecails Y5)C4、芽孢杆菌(Bacillus sp.7614)C5、马氏芽孢杆菌(Bacillus marisflavi strain BCB4
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1)L3、水芽孢杆菌(Bacillus aquimaris T 172)L4复合而成，4株菌均保藏于中国石油大学(华东)分子实验室保藏中心，地址：中国，青岛，中国石油大学(华东)。2.根据权利要求1所述复合菌剂，其特征在于，所述粪产碱菌C4、芽孢杆菌C5、马氏芽孢杆菌L3和水芽孢杆菌L4的OD600值均为0.8～1.0，其复配体积比为1:2:2:...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘其友，李婧，孙烁，张秀霞，徐晨菲，乔晨露，郭龙飞，唐明璐，赵朝成，
申请(专利权)人：中国石油大学华东，
类型：发明
国别省市：