地衣芽孢杆菌XCL-09及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株地衣芽孢杆菌XCL

Bacillus licheniformis xcl-09 and its application

【技术实现步骤摘要】
地衣芽孢杆菌XCL
‑
09及其应用


[0001]本专利技术属于微生物领域，具体涉及一株地衣芽孢杆菌及其在抑制α
‑
葡萄糖苷酶和病原微生物中的应用。

技术介绍

[0002]随着社会经济的发展和人民生活品质的提高，我国宠物数量的不断增多，宠物的营养和健康越来越受到人们的重视。随着宠物营养的提高、运动的缺乏以及摄入高脂、高碳水化合物等原因，宠物肥胖的现象越来越严重(朱亚丽,张广智, 梁琳,王明艳,张建伟,崔尚金.益生菌在宠物肥胖症中的潜在应用价值[J].现代畜牧兽医,2020(09):52
‑
57.)。宠物肥胖不仅会影响宠物的行为活动，常导致高血糖、高血脂等疾病，且随着发病时间的延长易出现其他脏器疾病的发生，这使得宠物的身心健康受到严重威胁。食物中的碳水化合物主要以单糖的形式在肠道内被吸收，淀粉等多糖物质在唾液和胰α
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淀粉酶的作用下降解生成寡糖及二糖，随后被α
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葡萄糖苷酶降解成为葡萄糖被吸收。α
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葡萄糖苷酶抑制剂能够抑制葡萄糖的产生和吸收，从而抑制淀粉的消化吸收，使血糖平稳且缓慢地维持在一定的水平上。朱运平等发现枯草芽孢杆菌可发酵产生α
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葡萄糖苷酶抑制剂，在控制宠物体重和降糖当面具有重要的潜力(朱运平,程永强,刘海杰,李里特,八卷幸二.不同菌种发酵豆渣产α
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葡萄糖苷酶抑制因子的研究[J].中国粮油学报,2008(04):70
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74.)。
[0003]同时，抗生素的滥用严重威胁动物的健康和环境，我国饲料行业已经全面实行禁抗令。在这种形势下，具有抗菌功能的益生菌产品作为抗生素替代品越来越受到宠物食品行业的关注，通过益生菌抑制病原菌来维持动物肠道健康和菌群平衡，是当前最有潜力的抗生素替代产品之一，在宠物的健康中占有重要地位(胡慧灵,李惠侠.益生菌在宠物中的应用研究进展[J].畜牧产业,2021(08):61
‑
66.)。因此，筛选具有高效抗菌活性的益生菌将具有重要的意义。地衣芽孢杆菌是一种有潜力的益生菌，目前尚未见地衣芽孢杆菌抑制α
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葡萄糖苷酶的报道。若能获得既可以抑制α
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葡萄糖苷酶又具有高效抑菌活性的地衣芽孢杆菌，将具有重大的意义。因此，本专利技术旨在筛选获得一株既可以抑制α
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葡萄糖苷酶又可抑制有害微生物的新型地衣芽孢杆菌菌株。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一株既高效抑制α
‑
葡萄糖苷酶又可抑制有害微生物的地衣芽孢杆菌。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]本专利技术通过分离和筛选获得一株既可以高效抑制α
‑
葡萄糖苷酶，又可高效拮抗金黄色葡萄球菌、禾谷镰刀菌、黑曲霉、绳状蓝状菌的菌株，根据形态学特点和16S rRNA基因序列分析，该菌株鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，命名为地衣芽孢杆菌XCL
‑
09，已于2021年11月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 20211497。
[0007]地衣芽孢杆菌XCL
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09在抑制α
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葡萄糖苷酶或制备α
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葡萄糖苷酶抑制剂中的应用：稀释100倍的地衣芽孢杆菌XCL
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09发酵上清液对α
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葡萄糖苷酶抑制率为 51％，说明地衣芽孢杆菌XCL
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09具有高效的α
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葡萄糖苷酶抑制活性。
[0008]地衣芽孢杆菌XCL
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09在抑制金黄色葡萄球菌、黑曲霉、绳状蓝状菌、禾谷镰刀菌中的应用：在本专利技术的具体实施例中，比较地衣芽孢杆菌XCL
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09与其他株的地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌、黑曲霉、绳状蓝状菌、禾谷镰刀菌的抑菌圈，结果表明地衣芽孢杆菌XCL
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09的抑菌活性具有明显优势。
[0009]本专利技术还提供了地衣芽孢杆菌XCL
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09的优化培养基，可显著提高芽孢形成率，培养基包括玉米淀粉30
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45克/L，豆粕40
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60克/L，K2HPO4·
3H2O 1
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1.5克 /L，MgSO4·
7H2O 0.75
‑
1.125克/L，MnSO4·
H2O 0.001
‑
0.0015克/L。
[0010]本专利技术所提供的地衣芽孢杆菌XCL
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09的有益效果如下：
[0011](1)首次获得可高效抑制α
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葡萄糖苷酶的地衣芽孢杆菌。
[0012](2)该菌株既可抑制α
‑
葡萄糖苷酶，又可高效拮抗金黄色葡萄球菌、禾谷镰刀菌、黑曲霉、绳状蓝状菌。
附图说明
[0013]图1：地衣芽孢杆菌XCL
‑
09显微形态图。
[0014]图2：地衣芽孢杆菌XCL
‑
09菌落形态图。
[0015]图3：基于16S rRNA基因序列构建的系统发育树。
[0016]图4：地衣芽孢杆菌XCL
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09对金黄色葡萄球菌、黑曲霉、绳状蓝状菌、禾谷镰刀菌的抑菌效果。
具体实施方式
[0017]实施例1：地衣芽孢杆菌XCL
‑
09的分离、筛选
[0018]取不同地区来源的发酵黄豆酱1g，加入装有9mL无菌水的灭菌试管中，用棉塞封口，振荡2min，于水浴锅中80℃加热15min，静置冷却后，吸取上清液0.1mL稀释10
‑2、10
‑3，分别取0.1mL稀释涂布LB平板，37℃培养24h，挑选单菌落接入LB种子液培养基中，37℃、180r/min培养12h。将种子液按 3％的接种量转入灭菌后的50g灭菌黄豆中，37℃静置培养36h，加水提取、离心获得上清液，测定上清液的α
‑
葡萄糖苷酶抑制率：取10μL稀释100倍的上清液，加入50μL 2g/L麦芽糖、45μLNaAc
‑
HAc缓冲液、15μLα
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葡萄糖苷酶，在37℃水浴30min，再沸水浴10min，利用葡萄糖测定试剂盒检测葡萄糖含量，计算α
‑
葡萄糖苷酶抑制率，获得了6株具有高效α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的菌株；进一步对这6株菌株进行抗菌活性复筛，制作含禾谷镰刀菌、黑曲霉、绳状蓝状菌的沙氏培养基平板和含金色葡萄球菌的LB平板，并用打孔器打孔，用移液枪吸取20μL种子液到琼脂孔内，霉菌平板于30℃生化培养箱中培养36h观察抑菌圈大小，细菌平板于37℃生化培养箱中培养12h观察抑菌圈大小。复筛得到既可以高效抑制α
‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）XCL
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09，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO: M 20211497。2.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌XCL
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09在抑制α
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葡萄糖苷酶中应用。3.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌XCL
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09在制备α
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葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。4.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌XCL
‑
09在抑制金黄色葡萄球菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘高升，伍中杰，魏雪团，陈建刚，张岱源，
申请(专利权)人：武汉中博绿亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：