副干酪乳杆菌菌株SS-01、用该菌株制备的胞外多糖、制备方法及应用技术

本公开提供了一种保藏编号为CGMCC No.23145的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株SS

【技术实现步骤摘要】
副干酪乳杆菌菌株SS
‑
01、用该菌株制备的胞外多糖、制备方法及应用


[0001]本公开属于生物发酵
，具体涉及副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株SS
‑
01、用该菌株制备的胞外多糖、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)是乳酸菌中乳杆菌属的重要成员，通过调节肠道菌群失衡改变肠道微生态环境，增强人体免疫力，对人体发挥着益生菌的作用。副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)是由Collins首次从干酪乳杆菌亚种中划分出来的新种，研究发现副干酪乳杆菌的抗氧化性可能与菌体代谢产物密切相关。
[0003]研究发现乳酸菌代谢产物对皮肤具有有益效能，具体表现为：1、可有效清除DPPH自由基、羟自由基，具有良好的抗氧化能力；2、抑制酪氨酸酶活性，具有美白活性；3、通过人体保湿功效评价发现，副干酪乳杆菌具有良好的保湿能力；4、通过检测体内炎症因子的表达发现，副干酪乳杆菌具有良好的抗炎能力。
[0004]但是，对于副干酪乳杆菌还有待更深入的研究。一，目前只发现副干酪乳杆菌胞外多糖具有良好的功效，其他代谢物的活性目前还处于未知；二，目前的技术提取副干酪乳杆菌胞外多糖成本较高，不适用于工业生产；三，副干酪乳杆菌的活性代谢物产量有限，不可批量生产。

技术实现思路

[0005]在下文中给出了关于本公开的简要概述，以便提供关于本公开的某些方面的基本理解。应当理解，这个概述并不是关于本公开的穷举性概述。它并不意图确定本公开的关键或重要部分，也不意图限定本公开的范围。其目的仅仅是以简化的形式给出某些概念，以此作为稍后论述的更详细描述的前序。
[0006]为解决上述技术问题，本公开提供的技术方案是：
[0007]第一方面，本公开提供副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株SS
‑
01，其保藏编号为CGMCC No.23145。
[0008]本公开的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株SS
‑
01从酸奶中分离得到。具体地，取5mL酸奶与45mL无菌生理盐水混合，体积比为1：9，吸取50μL稀释后的菌液于MRS固体平板上(蛋白胨10.0g/L，牛肉粉8.0g/L，酵母粉4.0g/L，葡萄糖20.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，乙酸钠5.0g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.04g/L，吐温80 1.0g/L，pH值5.7
±
0.2)，用涂布棒涂匀，37℃培养48h。挑选单个的具有典型乳酸菌菌落特征且形态差异较为明显的菌落，划线纯化2～3代，将上述分离纯化得到的乳酸菌接入MRS斜面培养基，4℃保藏。
[0009]第二方面，本公开提供一种副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法，包括：
[0010]发酵步骤：将上述副干酪乳杆菌SS
‑
01经活化、纯化、扩大培养处理所得种子液接
种至MRS肉汤进行发酵培养处理，然后灭菌、分离得到发酵液上清；
[0011]粗胞外多糖提取步骤：将所述发酵液上清进行浓缩富集，再依次经醇沉、去蛋白、醇沉、冻干处理得到粗胞外多糖。
[0012]上述胞外多糖的制备方法，作为一种优选实施方式，所述粗胞外多糖提取步骤之后还包括纯化步骤：将所述粗胞外多糖经透析处理后，再通过DEAE
‑
52纤维树脂柱进一步纯化处理，即得所述胞外多糖；优选地所述DEAE
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52纤维树脂柱层析处理中使用水进行洗脱。
[0013]上述胞外多糖的制备方法，作为一种优选实施方式，所述发酵步骤中，用于接种的所述种子液在600nm处OD值为0.7
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1.6(比如0.8、1.0、1.2、1.4等)，接菌量(即所述种子液的体积和所述MRS肉汤的体积之比)为5
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30％(比如10％、15％、20％、25％等)。
[0014]上述胞外多糖的制备方法，作为一种优选实施方式，所述发酵步骤中，发酵温度为37
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45℃(比如38℃、40℃、42℃、44℃等)，摇床转速150r/min
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180r/min(比如155r/min、160r/min、165r/min、170r/min、175r/min等)，发酵时间为6
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27h(比如8h、10h、12h、15h、18h、20h、24h、27h等)。
[0015]上述胞外多糖的制备方法，作为一种优选实施方式，所述粗胞外多糖提取步骤中，所述发酵液上清浓缩至原体积的10
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15％(比如12％、14％等)，首次醇沉处理时，乙醇和浓缩后的发酵液上清体积比4:1
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10:1(比如5:1、6:1、7:1、8:1、9:1等)，
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4℃醇沉约12
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24h(比如15h、18h、20h、22h)。
[0016]上述胞外多糖的制备方法，作为一种优选实施方式，所述粗胞外多糖提取步骤中，所述去蛋白处理包括：将首次醇沉所得产物用水复溶至样品原体积，加入适量木瓜蛋白酶混匀，室温酶解2
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10h(比如3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h)后再煮沸失活。优选地，所述木瓜蛋白酶添加量与复溶后体系的体积之比为2
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10g/100mL。
[0017]第三方面，本公开还提供一种由上述方法制备的副干酪乳杆菌胞外多糖。
[0018]第四方面，本公开还提供一种含有干酪乳杆菌胞外多糖的化妆品。
[0019]相比现有技术，本公开的有益效果包括但不限于：
[0020]1、本公开提供一种副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株SS
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01，其保藏编号为CGMCC No.23145，该菌株生产的胞外多糖，具有良好的抗氧化功效和安全性，可以作为功效成分加入到化妆品配方中，制备包括但不限于：面膜、精华液、乳液等化妆品；
[0021]2、本公开采用发酵的方式，以MRS培养基为底物经过灭菌处理，接入副干酪乳杆菌菌株SS
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01进行发酵，在恒温恒湿箱中进行发酵，其发酵过程中步骤简便，操作简单，能耗较小，可以节约成本；
[0022]3、本公开提供的副干酪乳杆菌菌株SS
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01及相应的发酵方法所得胞外多糖的产量高。
[0023]本公开的副干酪乳杆菌新菌株保藏日期为2021年08月16日，保藏编号为CGMCC No.23145，分类命名为：副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株SS
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01，保藏单位名称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编为10010本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株SS
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01，其保藏编号为CGMCC No.23145。2.一种副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括：发酵步骤：将如权利要求1所述的副干酪乳杆菌SS
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01经活化、扩大培养处理所得种子液接种至MRS肉汤进行发酵培养处理，然后灭菌、分离得到发酵液上清；粗胞外多糖提取步骤：将所述发酵液上清进行浓缩富集，再依次经醇沉、去蛋白、醇沉、冻干处理得到粗胞外多糖。3.如权利要求2所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述发酵步骤中，所述种子液在600nm处OD值为0.7
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1.6，所述种子液的体积和所述MRS肉汤的体积之比为5
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30％。4.如权利要求2或3任一项所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述发酵步骤中，发酵温度为37
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45℃，摇床转速150r/min
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180r/min，发酵时间为6
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27h。5.如权利要求2
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4中任一项所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，所述粗胞外多糖提取步骤中，所述发酵液上清浓缩至原体积的10
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【专利技术属性】
技术研发人员：李萌，王昌涛，苏艳凤，付豪，张永涛，王冬冬，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：