【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品检测，具体涉及一种检测蜂蜜中氨基酸的方法。
技术介绍
1、氨基酸是蜂蜜的重要组成部分，约占蜂蜜总质量的1%，其含量与组成与蜂蜜的植物、地理和气候等因素密切相关，其中植物来源对其影响最大。蜂蜜中常见有赖氨酸、色氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸等必需氨基酸和甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、组氨酸、酪氨酸、胱氨酸等非必需氨基酸，是蜂蜜重要的营养成分。其中脯氨酸和苯丙氨酸是大多数蜂蜜的主要氨基酸，而其他氨基酸的种类和含量随着蜂蜜植物和地理来源的不同则各有差异，并能作为验证蜂蜜真实性的重要指标。
2、蜂蜜中氨基酸的快速、准确检测一直是蜂蜜氨基酸分析中的关键，常见的分析技术包括高效薄层色谱（high-performance thin-layer chromatography，hptlc）、反相高效液相色谱法（reversed phase high-performance liquid chromatography，rp-hplc）、气相色谱质谱联用（gas chromatography mass spectrometry，gc-ms）和高效液相色谱（high-performance liquid chromatography，hplc）等，它们能对蜂蜜中多种氨基酸进行有效地分离，同时具有较高的灵敏度和准确性。然而，由于氨基酸种类多、结构接近、没有紫外或者荧光响应并且极性强，这些技术在分析蜂蜜中的氨基酸时通常需要复杂的样品预处理，如提取和衍生
3、直接质谱技术是一种不需要色谱的分离、较少或者无需样品预处理、能够快速分析复杂基质样品的新兴技术。在现有的直接质谱方法中，纳升电喷雾电离质谱（nanoelectrospray ionization mass spectrometry，nano-esi-ms）具有高电离效率、高灵敏度、低离子抑制效应等优点，适用于蜂蜜样品的分析，并已经运用于多个领域的氨基酸分析中。然而蜂蜜组成复杂，糖和矿物质含量高，使得蜂蜜在nano-esi-ms分析时有着严重的基质效应，并导致质谱检测的灵敏度和准确度显著降低，影响氨基酸的检测。
4、极性反转电压纳升电喷雾电离质谱技术（polarity-reversing nanoelectrospray ionization mass spectrometry，pr-nano-esi-ms）是近年来基于nano-esi-ms开发的新型直接质谱技术，该技术使用交流电代替传统直接质谱技术中使用的直流电，用于电喷雾的发生。pr-nano-esi-ms首先通过负电压作用于待测样品，使样品中的金属离子富集在石英管后端，和待测物在空间上得以区分，然后再使用正向电压产生纳升电喷雾，让待测物逐一进行离子化，抑制金属离子干扰，实现在线脱盐。pr-nano-esi-ms已经在食品、生物和环境等多个领域都有着多种应用。目前并无使用pr-nano-esi-ms来检测蜂蜜，特别是检测蜂蜜中氨基酸的报道。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术提供一种检测蜂蜜中氨基酸的方法，至少解决现有技术中的一个问题。
2、所述检测蜂蜜中氨基酸的方法，包括以下步骤：
3、制作反映氨基酸浓度与pr-nano-esi-ms质谱信息关系的标准曲线；
4、使用pr-nano-esi-ms采集待测蜂蜜溶液的质谱信息，所述质谱信息包括一级指纹图谱和二级指纹图谱；
5、通过所述二级指纹图谱对待测蜂蜜溶液中氨基酸进行定性；
6、根据所述标准曲线，通过所述一级指纹图谱对待测蜂蜜溶液中氨基酸进行定量。
7、其中，在使用pr-nano-esi-ms采集待测蜂蜜溶液的质谱信息时，获得待测蜂蜜溶液的一级指纹图谱和二级指纹图谱，分别利用一级指纹图谱和二级指纹图谱进行待测蜂蜜溶液中氨基酸的定量检测和定性检测，最多可以同时测定待测蜂蜜溶液中15种氨基酸，提高检测的准确性。
8、在一些优选的实施方式中，所述制作反映氨基酸浓度与pr-nano-esi-ms质谱信息关系的标准曲线的包括：
9、将丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、酪氨酸和色氨酸的标准品中至少一种与待测蜂蜜溶液配制成不同浓度的标准品溶液；
10、使用pr-nano-esi-ms分别采集待测蜂蜜溶液和所述标准品溶液的质谱信息，所述质谱信息包括一级指纹图谱和二级指纹图谱；
11、以所述标准品溶液的一级指纹图谱氨基酸母离子的响应值减去待测蜂蜜溶液的一级指纹图谱氨基酸母离子的响应值为纵坐标，以浓度为横坐标，构建标准曲线。
12、在一些优选的实施方式中，所述待测蜂蜜溶液的浓度为0.16 g/ml。
13、在一些优选的实施方式中，所述待测蜂蜜溶液过0.45 μm滤膜，以去除颗粒性杂质。
14、在一些优选的实施方式中，将丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、酪氨酸和色氨酸的标准品分别与待测蜂蜜溶液配制成不同浓度的标准品溶液。
15、在一些优选的实施方式中，所述不同浓度的标准品溶液的浓度如表1所示。
16、表1不同浓度的标准品溶液
17、
18、在一些优选的实施方式中，所述pr-nano-esi-ms使用的质谱仪为ltq-xl线性离子阱质谱仪。
19、在一些优选的实施方式中，所述pr-nano-esi-ms检测参数设置为：正极电压 1.05kv；负极电压 3.15 kv；电压反转时间 5 s；质谱采集范围 m/z100-300；透镜电压和毛细管电压分别为80 v和40 v。
20、在一些优选的实施方式中，使用thermo xcalibur采集所述质谱信息。
21、在一些优选的实施方式中，在使用pr-nano-esi-ms采集待测蜂蜜溶液的质谱信息时，通过碰撞诱导解离（cid）获得二级指纹图谱。
22、由于采用了以上技术方案，本专利技术的实施例至少具有以下有益效果：
23、（1）待检测蜂蜜不需要经过复杂预处理，经水稀释后可以直接使用pr-nano-esi-ms采集数据，实现高糖、高盐离子基质的直接检测，操作简单、快速，具有广泛的运用前景；
24、（2）能够实现蜂蜜中氨基酸的快速检测，在2 min内同时检测蜂蜜中15种氨基酸的质谱数据；
25、（3）线性关系良好、回收率高，并具有较低的检测限和定量限，在蜂蜜的氨基酸分析中具有普适性。
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1.一种检测蜂蜜中氨基酸的方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制作反映氨基酸浓度与PR-Nano-ESI-MS质谱信息关系的标准曲线的包括：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蜂蜜溶液的浓度为0.16 g/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蜂蜜溶液过0.45 μm滤膜，以去除颗粒性杂质。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、酪氨酸和色氨酸的标准品分别与待测蜂蜜溶液配制成不同浓度的标准品溶液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不同浓度的标准品溶液的浓度如表1所示：
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PR-Nano-ESI-MS使用的质谱仪为LTQ-XL线性离子阱质谱仪。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PR-Nano-ESI-MS检测参数设置为：正极电压 1.05 kV
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用Thermo Xcalibur采集所述质谱信息。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在使用PR-Nano-ESI-MS采集待测蜂蜜溶液的质谱信息时，通过碰撞诱导解离获得二级指纹图谱。
...【技术特征摘要】
1.一种检测蜂蜜中氨基酸的方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制作反映氨基酸浓度与pr-nano-esi-ms质谱信息关系的标准曲线的包括：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蜂蜜溶液的浓度为0.16 g/ml。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测蜂蜜溶液过0.45 μm滤膜，以去除颗粒性杂质。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、酪氨酸和色氨酸的标准品分别与待测蜂蜜溶液配制成不同浓度的标准品溶液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗丽萍，余文杰，郭夏丽，孙奇芳，易圣翔，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：
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