一株促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌制造技术

本发明专利技术提供一株促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No：24362。本发明专利技术所涉及的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株，分离自愈伤的马铃薯组织，具有繁殖快、菌种容易收集、易于采后块茎的处理、加速块茎愈伤表皮封闭层(即次生周皮，次生周皮主要由木质素、聚酚软木脂和聚酯软木脂的细胞层组成)的生成速度，从而降低了块茎的重量损失速度和镰刀菌侵染病斑扩展的特点。损失速度和镰刀菌侵染病斑扩展的特点。损失速度和镰刀菌侵染病斑扩展的特点。

A strain of Agrobacterium tumefaciens promoting the callus of post harvest potato tubers

【技术实现步骤摘要】
一株促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌


[0001]本专利技术属于微生物应用
，具体涉及一株促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌。

技术介绍

[0002]马铃薯(Solanum tuberosum L.)是重要的粮菜兼用的农作物，块茎富含淀粉、维生素和矿物质，营养价值高，养活了地球上约10亿人口。全球有超过150个国家和地区均可栽培马铃薯。我国是马铃薯的生产大国，随着马铃薯种植面积的不断扩大，马铃薯在我国农业生产中占有越来越重要的地位。然而，马铃薯块茎表皮脆嫩，采收及采后贮运过程极易受到机械损伤，这些伤口使块茎组织容易失水，且成为病原菌入侵块茎的主要通道，导致块茎贮藏期品质下降，腐烂严重。
[0003]虽然马铃薯块茎表皮机械损伤后能够自然愈合，但是所需时间较长，在较长时间的伤口自我愈合过程中，病菌侵染块茎的概率增加，使采后腐烂率增加。同时在商业生产中，马铃薯采后需要尽快入库贮藏，减少周转所需的场所及搬运的人工，因此导致采后缺乏自我愈伤的条件，愈伤效果较差，增加了贮藏期烂窖的风险。块茎表皮自我愈伤速度慢的缺陷极大影响了马铃薯块茎的采收及采后贮藏和运输的管理。尽管已有一些利用高温或化学药剂处理可促进马铃薯块茎受伤部位愈伤的次生周皮生成的报道，然而过高的温度易增加采后块茎的生理代谢加速品质劣变，化学药物处理会伴随药物残留的问题。因此，生物源促愈剂的开发对解决马铃薯产业发展中块茎自然愈伤慢的问题具有相当大的优势。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一株促进采后马铃薯块茎愈伤速度的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株。
[0005]根癌农杆菌是可侵染双子叶植物的农杆菌，由于可通过T
‑
DNA的转移，整合入植物组织中，并诱导产生植物生长素和细胞分裂素，从而导致细胞生长加快。其广泛存在于土壤中，只有少数具有致病力，一般被应用于植物转基因工程中，但本申请专利技术人意外发现，从马铃薯块茎伤口处分离的根癌农杆菌，可加快马铃薯块茎采后次生周皮的形成和加厚。
[0006]本专利技术提供一株促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No：24362。
[0007]本专利技术还提供促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液，是将上述的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株扩大培养得到的。
[0008]作为优选，所述菌液的制备方法为：将根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株接种于培养基中，于37
±
1℃，摇床培养。
[0009]作为优选，所述培养基为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉1g/L，NaCl 5g/L，pH 7.0。
[0010]本专利技术还提供上述的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株或根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液在制备促进采后马铃薯块茎愈伤的产品中的应用。
[0011]作为优选，所述促进采后马铃薯块茎愈伤具体为加快马铃薯块茎采后次生周皮的形成和加厚。
[0012]本专利技术还提供一种促进采后马铃薯块茎愈伤的方法，是将上述的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株或根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液喷施到损伤的或刚采收的新鲜马铃薯块茎表面，晾干后室温黑暗条件下保存。
[0013]在生产实践中，一般选择将根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液直接喷施到刚采收的所有新鲜马铃薯块茎表面，晾干后室温黑暗条件下保存。由于采收和运输马铃薯时都是大批量操作，相比于将其中的损伤马铃薯块茎挑选出，再单独喷施损伤的马铃薯块茎，直接将根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液喷施到所有新鲜马铃薯块茎表面，处理效率会更高。
[0014]本专利技术还提供一种针对马铃薯的生物源促愈剂，其有效成分包括上述的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株或根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液。
[0015]本专利技术所涉及的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株，分离自愈伤的马铃薯组织，具有繁殖快、菌种容易收集、易于采后块茎的处理、加速块茎愈伤表皮封闭层(即次生周皮，次生周皮主要由木质素、聚酚软木脂和聚酯软木脂的细胞层组成)的生成速度，从而降低了块茎的重量损失速度(见图2)和镰刀菌侵染病斑扩展程度(见图3)。
[0016]本专利技术在马铃薯块茎采后24h内进行根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌悬液的喷雾处理：将采收后的马铃薯块茎冲洗，用次氯酸钠浸泡消毒，去离子水冲洗晾干；将目标菌悬液均匀喷洒到人工损伤马铃薯块茎表面，自然晾干后装入打孔的保鲜袋中，室温、黑暗条件下进行愈伤。本专利技术所用的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens，是分离自受损伤马铃薯块茎自然愈合的表皮，未经基因改造，经鉴定属于野生型根癌农杆菌，可促进马铃薯块茎采后次生周皮的形成，加速愈伤过程。本专利技术可解决马铃薯块茎采后表皮伤口自然修复所需时间长，而引起的愈伤速度慢的问题。
附图说明
[0017]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0018]图1为本专利技术根癌农杆菌菌株的菌落形态图。
[0019]图2为本专利技术菌株对马铃薯块茎愈伤期间失重率的影响。
[0020]图3为本专利技术菌株对马铃薯块茎愈伤期间接骨木镰刀菌引起的病斑直径的影响。A为愈伤7天的块茎接种后的病斑直径；B为愈伤14天的块茎接种后的病斑直径；C为病斑直径抑制率。
[0021]图4为本专利技术菌株对马铃薯块茎愈伤期间聚酚软木脂(SPP)的沉积(图A)及细胞层数(图B)的影响。
[0022]图5为本专利技术菌株对马铃薯块茎愈伤期间聚酯软木脂(SPA)的沉积(图A)及细胞层数(图B)的影响。
具体实施方式
[0023]以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均购自常规生化试剂公司。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0024]实施例1
[0025]本专利技术中的根癌农杆菌菌株从甘肃省定西市渭源县会川镇马铃薯通风库中贮藏的损伤块茎表皮中筛选得到，分类命名为根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens，于2022年1月21日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏单位地址为，北京市朝阳区本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens，其特征在于：其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No：24362。2.促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液，其特征在于：是将权利要求1所述的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株扩大培养得到的。3.根据权利要求2所述的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液，其特征在于：所述菌液的制备方法为：将根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株接种于培养基中，于37
±
1℃，摇床培养。4.根据权利要求3所述的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌液，其特征在于：所述培养基为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉1g/L，NaCl 5g/L，pH 7...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱艳，赵元寿，朱建宁，巩文娟，陈富，张卫兵，王毅，李永才，毕阳，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：