【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物，具体涉及一种与绵羊剩余采食量相关的分子标记及其检测方法和应用。
技术介绍
1、核糖体是催化蛋白质合成的细胞器，由1个小的40s亚基和1个大的60s亚基组成。核糖体蛋白20基因(ribosomal proteins20，rps20)是一类参与蛋白质生物合成及对细胞增殖、分裂、分化、凋亡具有调控作用的基因，广泛存在于多种动物体内(freed，2010)。rps20基因作为核糖体蛋白编码基因的典型，有多个加工过的假基因分散在基因组中(ebright，2020)。rps20基因rna干扰序列成功构建包装干扰慢病毒转染后能有效抑制小鼠结肠腺癌细胞(ct26)的生长(高小玲，2014)。此外，rps20基因在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制中有一定作用(殷杰，2021)。而rps20基因rna干扰后使得大鼠小肠上皮细胞(iec-6)的形态结构变化，细胞的增殖、分化能力以及dna修复功能受到抑制，证明rps20基因对大鼠小肠上皮细胞的消化吸收和粘膜损伤修复功能起重要作用(王静，2009)。
2、饲料成本作为动物生产的主要组成部分，约占绵羊生产成本的70％，是一项巨大的生产投资，因此饲料效率对农民的利益有重要影响(prakash et al.，2020)。绵羊生长速度较快，饲料消耗量较少，这可以给生产者带来相当大的经济效益。saintilan和verdal等人推荐使用剩余采食量(rfi)来估算动物的饲料效率，剩余采食量(residual feedintake,rfi)为基于动物体况和生产性能的实际饲料摄入量和其预期
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种与绵羊剩余采食量相关的分子标记及其检测方法和应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用以下的技术方案为：
3、一种与绵羊剩余采食量相关的分子标记，该分子标记从绵羊rps20基因中扩增得到，其具体核苷酸序列如seq id no.1所示，其中，该序列的第265bp位r表示为a或g，存在a/g多态性；当基因型为aa型时，其剩余采食量优于基因型为gg型和ag型的剩余采食量，当用于筛选育种时，可选择aa型的基因型，作为剩余采食量低型优质肉羊品种；其中序列seq idno.1具体核苷酸序列如下：
4、seq id no.1：ccagttcggatgcctaccaaggtgagaaaagtgtc ctgggcaggaggtggaagatggtagttggagagaagatagagaaattagaaaacaaactaagtgaaataggagcactgaatatgaaatagaaaaagtgaagcaaactaggtaaaaggatgtgttacagtccagttgcttttaaacgtggctgctcgttagaaacatctggagctttggtgaaaaaaagcaatacctgggcatttgtatttttcaaaaaactcccaaggtrattctgatgtgcatttggatatcggaatgcatttttgccttttagggtggaggatttggctaacaatacacacccagggtcaaatgttggtaaaatctggttcgtgttaaatatgtaatttctggaggtaaaccggttgaaggcttttgctgctggtgttcggtatgtg。
5、检测如上所述与绵羊剩余采食量相关的分子标记的引物对，其包括pcr的引物对或/和sequenom massarray的引物对；其中，pcr的引物对如seq id no.2和seq id no.3所示，sequenom massarray的引物对包括序列如seq id no.4所示的正向引物a1、序列如seqid no.5所示的正向引物a2、序列如seq id no.6所示的通用反向引物c。
6、一种用于检测如上所述与绵羊剩余采食量相关的分子标记的试剂盒，其包括如上所述引物对。
7、如上所述与绵羊剩余采食量相关的分子标记在筛选剩余采食量低型绵羊育种中的应用，其所述分子标记的基因型为aa型的基因型时，作为剩余采食量低的绵羊品种进行育种。低剩余采食量的绵羊可以节约饲养成本，增加经济效益，因为低rfi的羊在不增加饲料成本的前提下，产肉效率更高，肌内脂肪沉积更好。
8、一种筛选低剩余采食量绵羊品种的检测方法，其包括如下步骤：
9、a)提取湖羊血液的基因组dna作为模板，利用seq id no.2和seq id no.3所示的引物对湖羊的基因组dna进行pcr扩增；
10、b)对上述步骤a)获得的pcr扩增产物进行测序和序列分析，从而通过多态性位点的碱基类型确定基因型。
11、一种筛选低剩余采食量绵羊品种的检测方法，其包括如下步骤：
12、a)提取湖羊血液的基因组dna作为模板，利用seq id no.4-6所示的引物对进行pcr扩增；
13、b)扩增结束后，由于多态性位点碱基不同，延伸产物不同的末端碱基将导致延伸后的产物分子量的差异，经飞行时间质谱便可以将不同分子量的产物区分开，从而达到基因分型的目的。
14、本专利技术中通过设计sequenom massarray引物对分子标记进行检测，其基本原理是将预处理后的pcr扩增产物，通过仪器点样至带有基质的芯片上，使其与基质结合形成共结晶；再用激光照射复合物晶体，经辐射的基质分子吸收并积蓄能量后迅速升温，使得晶体升华进入气相状态，核酸分子也随之解吸并转变为亚稳态离子(多为单电荷离子)；这些单正电荷离子可在加速电场中获得动能，并在飞过自由漂移区后向检测器飞行，且离子质量越小，飞行速度越快，也就更早到达检测器，不同分子量的核酸分子因到达检测器的时间不同而得到检测，这为本专利技术的分子标记的检测提供了一种简便、准确、低成本的操作方法。
15、本专利技术的有益效果在于：
16、本专利技术提供的与绵羊剩余采食量相关的分子标记用于在筛选低剩余采食量绵羊育种中的应用，同时可以在绵羊出生时就通过检测rps20基因型进行选择，进而筛选出剩余采食量低的绵羊品种，可以节约饲养成本，增加经济效益，即筛选具有aa基因型，能加快育种进程，有效降低育种本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与绵羊剩余采食量相关的分子标记，其特征在于，该分子标记从绵羊RPS20基因中扩增得到，其具体核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其中，该序列的第265bp位R表示为A或G，存在A/G多态性。
2.检测权利要求1所述与绵羊剩余采食量相关的分子标记的引物对，其特征在于，其包括PCR的引物对或/和Sequenom MassARRAY的引物对；其中，PCR的引物对如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，Sequenom MassARRAY的引物对包括序列如SEQ ID NO.4所示的正向引物A1、序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物A2、序列如SEQ ID NO.6所示的通用反向引物C。
3.一种用于检测权利要求1所述与绵羊剩余采食量相关的分子标记的试剂盒，其包括PCR的引物对或/和MassARRAY SNP的引物对；其中，PCR的引物对包括如SEQ ID NO.2和SEQID NO.3所示，Sequenom MassARRAY的引物对包括序列如SEQ ID NO.4所示的正向引物A1、序列如SEQ ID NO.5所示的正向引物A2
4.权利要求1所述的与绵羊剩余采食量相关的分子标记在筛选剩余采食量低型绵羊育种中的应用，其所述分子标记的基因型为AA型的基因型时，作为低剩余采食量绵羊品种进行育种。
5.一种筛选低剩余采食量绵羊羊品种的检测方法，其包括如下步骤：
6.一种筛选低剩余采食量绵羊品种的检测方法，其包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种与绵羊剩余采食量相关的分子标记，其特征在于，该分子标记从绵羊rps20基因中扩增得到，其具体核苷酸序列如seq id no.1所示，其中，该序列的第265bp位r表示为a或g，存在a/g多态性。
2.检测权利要求1所述与绵羊剩余采食量相关的分子标记的引物对，其特征在于，其包括pcr的引物对或/和sequenom massarray的引物对；其中，pcr的引物对如seq id no.2和seq id no.3所示，sequenom massarray的引物对包括序列如seq id no.4所示的正向引物a1、序列如seq id no.5所示的正向引物a2、序列如seq id no.6所示的通用反向引物c。
3.一种用于检测权利要求1所述与绵羊剩余采食...
【专利技术属性】
技术研发人员：张小雪，杨晓斌，李发弟，王维民，田慧彬，张德印，张煜坤，赵源，李晓龙，赵利明，程江博，徐丹，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。