在培养物中具有改善的持久性的基因工程化T细胞制造技术

包含基因工程化T细胞的T细胞库，与非工程化T细胞对应物相比，这些基因工程化T细胞具有一个或多个以下特征：(a)在培养物中增强的扩增能力，(b)增强的增殖能力，(c)减少的凋亡，以及(d)增强的激活频率。此类基因工程化T细胞可包含(i)突变的参与细胞自我更新的基因；(ii)破坏的参与凋亡的基因；(iii)破坏的参与T细胞耗竭调节的基因；或者(iv)(i)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在培养物中具有改善的持久性的基因工程化T细胞
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年9月6日提交的美国临时专利申请号62/897,016、2019年10月30日提交的美国临时专利申请号62/927,764和2020年6月4日提交的美国临时专利申请号63/034,646的优先权权益。上述申请中的每一项特此通过援引以其全文并入。

技术介绍

[0003]嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法使用经基因修饰的T细胞来更特异性和有效地靶向和杀伤癌细胞。从血液中收集T细胞后，对细胞进行工程化，使其表面上包含CAR。可使用CRISPR/Cas9基因编辑技术将CAR引入T细胞中。将这些同种异体CAR T细胞注射到患者体内时，受体使T细胞能够杀伤癌细胞。
[0004]CAR
‑
T疗法需要在培养物中具有改善的持久性的T细胞。此类T细胞在体外和体内都存活得更久，从而在CAR T细胞制备和临床应用中带来益处。然而，改善培养物中T细胞的持久性仍然具有挑战性。

技术实现思路

[0005]本披露至少部分地基于T细胞库的开发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种基因工程化T细胞群体，该群体包含：(i)破坏的参与细胞自我更新的基因；(ii)破坏的参与凋亡的基因；(iii)破坏的参与T细胞耗竭调节的基因；或者(iv)(i)
‑
(iii)中任一项的组合；其中与非工程化T细胞对应物相比，该基因工程化T细胞群体具有一个或多个以下特征：(a)在培养物中增强的扩增能力，(b)增强的增殖能力，(c)降低的凋亡水平，以及(d)增强的激活频率。2.如权利要求1所述的基因工程化T细胞群体，其中这些T细胞包含(i)
‑
(iii)的组合。3.如权利要求1或权利要求2所述的基因工程化T细胞群体，其中(i)包括TET2，并且任选地其中这些基因工程化T细胞不包含(ii)、(iii)或两者。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中在选自由外显子1、外显子3、外显子4、外显子5和外显子6或它们的组合组成的组的外显子中对破坏的TET2进行基因编辑，任选地其中在外显子3、外显子4、外显子5或外显子6中对突变的TET2进行基因编辑。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中通过CRISPR/Cas介导的基因编辑对该破坏的TET2基因进行基因编辑。6.如权利要求5所述的基因工程化T细胞群体，其中通过CRISPR/Cas介导的基因编辑用包含SEQ ID NO:14、18、22、26、112、116或120的核苷酸序列的引导RNA(gRNA)对该破坏的TET2基因进行基因编辑。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中(ii)包括FAS。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中(iii)包括CD70。9.如权利要求7或权利要求8所述的基因工程化T细胞群体，其中通过CRISPR/Cas介导的基因编辑对破坏的FAS和/或CD70基因进行基因编辑。10.如权利要求9所述的基因工程化T细胞群体，其中通过CRISPR/Cas介导的基因编辑用包含SEQ ID NO:69、73、77、81或85的核苷酸序列的引导RNA(gRNA)对该破坏的FAS基因进行基因编辑，和/或其中通过CRISPR/Cas介导的基因编辑用包含SEQ ID NO:34、38、42、46、50、54或58的核苷酸序列的gRNA对该破坏的CD70基因进行基因编辑。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中这些T细胞进一步包含破坏的β
‑2‑
微球蛋白(β2M)基因。12.如权利要求1
‑
11中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中这些T细胞进一步包含破坏的T细胞受体α链恒定区(TRAC)基因。13.如权利要求1
‑
12中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中这些T细胞被进一步工程化为表达嵌合抗原受体(CAR)。14.如权利要求13所述的基因工程化T细胞群体，其中该CAR靶向肿瘤抗原。15.如权利要求14所述的基因工程化T细胞群体，其中该肿瘤抗原是CD19、B细胞成熟抗原(BCMA)或CD70。16.如权利要求13
‑
15中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中这些T细胞包含编码该CAR的核酸，并且其中该核酸插入这些T细胞的基因组中。
17.如权利要求16所述的基因工程化T细胞群体，其中该破坏的TRAC基因具有编码该嵌合抗原受体的核苷酸的插入。18.如权利要求1
‑
17中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中这些T细胞源自一个或多个人类供体的原代T细胞。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的基因工程化T细胞群体，其中这些T细胞表现出细胞因子依赖性生长。20.一种用于制备如权利要求1
‑
10中任一项所述的基因工程化T细胞群体的方法，该方法包括：(a)提供多个细胞，这些细胞是T细胞或其前体细胞；(b)对(i)
‑
(iii)基因中的一种或多种进行基因编辑；以及(c)产生该基因工程化T细胞群体。21.如权利要求20所述的方法，其中步骤(b)通过向该多个细胞递送RNA引导的核酸酶和靶向(i)
‑
(iii)基因中的一种或多种的一种或多种gRNA来进行。22.如权利要求21所述的方法，其中(i)包括TET2，并且任选地其中靶向TET2的gRNA对该TET2基因的外显子具有特异性，该外显子选自由外显子1、外显子3、外显子4、外显子5和外显子6组成的组。23.如权利要求22所述的方法，其中该靶向TET2的引导RNA(gRNA)包含SEQ ID NO:14、18、22、26、112、116或120的核苷酸序列。24.如权利要求20
‑
23中任一项所述的方法，其中(ii)包括FAS。25.如权利要求20
‑
24中任一项所述的方法，其中(iii)包括CD70。26.如权利要求24或权利要求25所述的方法，其中靶向FAS的gRNA包含SEQ ID NO:69、73、77、81或85的核苷酸序列，和/或其中靶向CD70的gRNA包含SEQ ID NO:34、38、42、46、50、54或58的核苷酸序列。27.如权利要求20
‑
26中任一项所述的方法，其中步骤(a)的这些细胞是一个或多个人类供体的原代T细胞。28.如权利要求20
‑
27中任一项所述的方法，其中在步骤(b)中，将靶向(i)
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：JA特雷特，D卡莱齐迪斯，H瓦尔德纳，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：