【技术实现步骤摘要】
一种表达Amyloid
β
靶向抑制因子的多能干细胞及其衍生物与应用
[0001]本专利技术属于基因工程
,具体涉及一种表达Amyloidβ靶向抑制因子的多能干细胞及其衍生物与应用。
技术介绍
[0002]β
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淀粉样蛋白(amyloid
‑
β,Aβ)是由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)经β
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分泌酶和γ
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分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有39
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43个氨基酸的多肽。它可由多种细胞产生,循环于血液、脑脊液和脑间质液中,大多与伴侣蛋白分子结合,少数以游离状态存在。β
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淀粉样蛋白片段位于淀粉样前体蛋白的跨膜区域,淀粉样前体蛋白首先经β
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分泌酶在β位点裂解为β
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N端片段(sAPPβ)和β
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C端片段,然后γ
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分泌酶在β
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C端片段的近N端跨膜区域水解释放出有39~43个氨基酸组成的Aβ肽段,此过程被称为APP的淀粉样降解途径。
[0003]另一方面,在细胞治疗领域,同种异体的免疫兼容问题依然是一大难题。近年已有许多报道通过敲除B2M、CIITA等基因,实现HLA
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I和HLA
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II细胞表面或本身基因的缺失表达,进而使细胞具备免疫耐受或逃逸T/B细胞特异性免疫应答,产生免疫兼容的通用型PSCs,为更广泛的通用型P ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物的基因组导入有Amyloidβ抑制因子的表达序列;所述Amyloidβ抑制因子为靶向Amyloidβ的shRNA和shRNA
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miR中的至少一种。2.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述靶向Amyloidβ的shRNA和shRNA
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miR的序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物基因组的B2M基因和/或CIITA基因被敲除。4.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于:所述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入有第一核酸分子;且,所述多能干细胞或其衍生物中的免疫应答相关基因的3
’
UTR区域还导入有第二核酸分子;所述第一核酸分子编码介导RNA干扰的小核酸分子,所述小核酸分子特异性靶向第二核酸分子的转录产物,且所述小核酸分子不靶向所述多能干细胞或其衍生物的任何其他的mRNA或lncRNA。5.根据权利要求4所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述小核酸分子包括短干扰核酸、短干扰RNA、双链RNA,优选为miRNA、shRNA、shRNA
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miR中的至少一种。6.根据权利5所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物来源于人类;所述小核酸分子的序列为不靶向人类任何mRNA或lncRNA的非人类物种的随机序列。7.根据权利要求4所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述第二核酸分子包括至少3个重复的小核酸分子序列的反向互补序列,优选为6~10个重复的小核酸分子序列的反向互补序列。8.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入至少一种免疫兼容分子的表达序列,所述免疫兼容分子用于调控多能干细胞细胞或其衍生物中与免疫应答相关的基因的表达。9.根据权利要求4或8所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述与免疫应答相关的基因包括:(1)主要组织相容性复合体基因,包括HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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DRA、HLA
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DRB1、HLA
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DRB3、HLA
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DRB4、HLA
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DRB5、HLA
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DQA1、HLA
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DQB1、HLA
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DPA1和HLA
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DPB1中的至少一种;(2)主要组织相容性复合体相关基因,包括B2M和CIITA中的至少一种。10.根据权利要求8所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于,所述免疫兼容分子包括以下的至少一种:(1)免疫耐受相关基因,包括CD47和HLA
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G中的至少一种;(2)HLA
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C类分子,包括人群中比例合计超过90%的HLA
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C复等位基因,或者超过90%的HLA
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C复等位基因与B2M构成的融合蛋白基因;(3)靶向主要组织相容性复合体基因的shRNA和/或shRNA
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miR,所述主要组织相容性复合体基因包括HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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DRA、HLA
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DRB1、HLA
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DRB3、HLA
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DRB4、HLA
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DRB5、HLA
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DQA1、HLA
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DQB1、HLA
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DPA1和HLA
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DPB1中的至少一种;(4)靶向主要组织相容性复合体相关基因的shRNA和/或shRNA
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miR,所述主要组织相容
性复合体相关基因包括B2M和CIITA中的至少一种。11.根据权利要求10所述的多能干细胞或其衍生物,其特征在于:靶向B2M的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.9~SEQ ID NO.11中的一种;靶向CIITA的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.12~SEQ ID NO.14中的一种;靶向HLA
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A的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.15~SEQ ID NO.17中的一种;靶向HLA
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B的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.18~SEQ ID NO.20中的一种;靶向HLA
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C的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.21~SEQ ID NO.23中的一种;靶向HLA
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DRA的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.24~SEQ ID NO.26中的一种;靶向HLA
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DRB1的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.27~SEQ ID NO.29中的一种;靶向HLA
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DRB3的shRNA和/或shRNA
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miR的靶序列选自SEQ ID NO.30~SEQ ID NO.31中的一种;靶向HLA
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DRB4的shRNA和/或s...
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