转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物及其制备方法和应用，该复合物主要为桃儿七酮U、单壁碳纳米管、卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺

Transferrin mediated single wall carbon nanotube heptane u liposome complex and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于医药生产
，具体涉及脂质体领域，特别地涉及一种转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物及其制备方法及其用于制备抗肿瘤药物的应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌(PCa)是男性第二大最常见的癌症，大多数前列腺癌患者后期会发展为抗去势前列腺癌(CRPC)，目前对CRPC缺乏有效的治疗方法。小叶莲为常用藏药，藏名奥莫色，是小檗科桃儿七属植物桃儿七Sinopodophyllum hexandrum的干燥成熟果实，具有调经活血功能，主要用于血瘀经闭、难产、死胎、胎盘不下。作为藏族习用药，具有悠久的历史。现代化学成分研究发现，异戊烯基化黄酮类化合物作为小叶莲中代表性的活性成分，具有很强的抗肿瘤活性。前期研究发现从小叶莲中提取的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮U能够通过抑制PC
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3细胞增殖、转移、诱导细胞凋亡发挥抗前列腺肿瘤的作用。但由于其极低的水溶性和较差的药代动力学行为，限制了桃儿七酮U的临床使用。
[0003][0004]纳米粒、树状大分子、脂质体、纳米胶束和碳纳米管(carbon nanotubes，CNTs)等都是目前具有一定应用前景的纳米载体。CNTs由于其巨大的比表面积，优越的跨膜性，管壁的易修饰性，显示了其在药物输送及靶向治疗领域十分诱人的潜力。CNTs可以作为药物载体与药物分子共价结合后将药物运到全身各处。而且CNTs的形状使其可以通过被动扩散或内吞的方式进入不同细胞，具有极强的穿透细胞屏障的能力。但是直接与CNTs结合表面积有限，导致其载药能力是有限的，因此高浓度的CNTs才能运送足够的剂量药物。
[0005]脂质体在这方面具有很大的优势，不仅具有较高的载药能力，还具有很好的生物相容性和生物降解能力，并能控制药物释放速度，改善药物药代动力学和药效学特性。但是传统脂质体作为药物载体很容易被血液和网状内皮系统巨噬细胞吞噬，导致体内循环时间过短。为了克服这一主要障碍，脂质体经聚乙二醇(PEG)修饰后，可以改变其表面亲水性能及空间位阻效应起到长循环作用，提高脂质体的物理稳定性和生物稳定性。但由于空间位阻又阻碍了脂质体进入肿瘤细胞，降低了所携带药物的治疗效果。
[0006]转铁蛋白与转铁蛋白受体在人体内有着重要的作用，转铁蛋白与肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体的亲和力是正常细胞表面的10～100倍，因此研发一种以转铁蛋白为靶向功能基团与脂质体相连，通过转铁蛋白介导转运进入肿瘤细胞，有效实现抗肿瘤靶向治疗作
用的复合物具有重要意义。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物及其制备方法和应用，可有效解决桃儿七酮U在临床治疗前列腺肿瘤中的应用问题。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案之一是：
[0009]一种转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物，主要为桃儿七酮U、单壁碳纳米管、卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白形成的碳纳米管脂质体复合物。
[0010]所述脂质体为单壁碳纳米管穿插于球状脂质体中，呈糖葫芦状，粒径大小在250～280nm之间。
[0011]本专利技术的技术方案之一是：一种转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物的制备方法，将桃儿七酮U包裹在脂质体中，由单壁碳纳米管与肿瘤细胞特异性配体转铁蛋白共修饰脂质体。
[0012]具体方法为，先将桃儿七酮U制备成桃儿七酮U脂质体，然后与羧基化单壁碳纳米管混合，制得单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物；再将单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白胶束混合，制得转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物。
[0013]更进一步，包括以下步骤：
[0014](1)单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物的制备：
[0015]将48～72mg卵磷脂、16～24mg胆固醇、16～24mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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氨基混合，加入有机溶剂氯仿(6.4～9.6mL)超声溶解；将4.8～7.2mg桃儿七酮U溶于无水乙醇(1.6～2.4mL)后，加入上述混合物中，减压旋蒸成膜；然后加入PBS溶液(8～12mL)旋转水化，冰浴下探头超声，得到桃儿七酮U脂质体混悬液；
[0016]将80～120mg Pluronic F127溶解在PBS溶液(8～12mL)中，加入8～12mg羧基化单壁碳纳米管冰浴下探头超声，得到羧基化单壁碳纳米管混悬液；然后依次加入8～12mg EDC和8～12mg NHS超声混合，活化；最后加入上述桃儿七酮U脂质体混悬液，搅拌，离心，收集沉淀，加入PBS溶液(8～12mL)重新分散，得到单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物的混悬液；
[0017](2)二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白胶束的制备：
[0018]称取16～24mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白溶于有机溶剂氯仿(4～6mL)中，减压蒸发成膜，除去有机溶剂，干燥，加入PBS溶液(8～12mL)旋转水化，制备成二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白胶束；
[0019](3)转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物的制备：
[0020]将上述单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物混悬液与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白胶束混合，反应孵育，反应后除去游离的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白，得到转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物。
[0021]步骤(1)中减压旋蒸的温度为45℃，时间为1h；旋转水化的温度为55℃，时间为2h；探头超声的功率为260～300w，时间为3～5min；活化时间为30min；搅拌的温度为室温，时间为3h；离心的速率为10000g，时间为30min；PBS溶液的pH为6.5。
[0022]步骤(2)中减压蒸发的温度为45℃，干燥的温度为50℃，旋转水化的温度为55℃，时间为2h。
[0023]步骤(3)中反应孵育的温度为37℃，时间为1h。
[0024]本专利技术的技术方案之一是：一种转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
[0025]所述肿瘤为前列腺肿瘤。
[0026]本专利技术的有益效果：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物，其特征在于，所述复合物主要为桃儿七酮U、单壁碳纳米管、卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白形成的碳纳米管脂质体复合物。2.根据权利要求1所述的转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物，其特征在于，所述脂质体为单壁碳纳米管穿插于球状脂质体中，呈糖葫芦状，粒径大小在250～280nm之间。3.一种如权利要求1所述的转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物的制备方法，其特征在于，将桃儿七酮U包裹在脂质体中，由单壁碳纳米管与肿瘤细胞特异性配体转铁蛋白共修饰脂质体。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，先将桃儿七酮U制备成桃儿七酮U脂质体，然后与羧基化单壁碳纳米管混合，制得单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物；再将单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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转铁蛋白胶束混合，制得转铁蛋白介导的单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)单壁碳纳米管桃儿七酮U脂质体复合物的制备：将48～72mg卵磷脂、16～24mg胆固醇、16～24mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇2000
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氨基混合，加入有机溶剂氯仿超声溶解；将4.8～7.2mg桃儿七酮U溶于无水乙醇后，加入上述混合物中，减压旋蒸成膜；然后加入PBS溶液旋转水化，冰浴下探头超声，得到桃儿七酮U脂质体混悬液；将80～120mg Pluronic F127溶解在PBS溶液中，加入8～12mg羧基化单壁碳纳米管冰浴下探头超声，得到羧基化单壁碳纳米管混悬液；然后依次加入8～12mg EDC和8～12mg NHS超...

【专利技术属性】
技术研发人员：关延彬，韩华，季珂，梁绿圆，田雨冬，孙彦君，祝侠丽，刘改枝，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：