一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法技术

本发明专利技术提供了一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，该检测方法采用液相色谱法检测阿加曲班一水合物中肼类杂质含量。该方法是根据ICH指南Q2（R1）开发和验证的。结论:本法专属性强，准确度与重复性良好，可用于阿加曲班一水合物中肼类杂质的控制。加曲班一水合物中肼类杂质的控制。

【技术实现步骤摘要】
一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法


[0001]本专利技术属于化药分析领域，具体涉及一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法。

技术介绍

[0002]阿加曲班原研厂家是日本三菱化学公司Shosuke Okamoto，于1990年2月在日本上市。美国食品与药品管理局(FDA)在2000年批准了史克必成(Smithkline Beecham)和得克萨斯生物技术公司(Texas Bitechnology)的可注射抗血栓小分子药物阿加曲班应用于治疗和预防血栓形成及肝素诱导的免疫性疾病一血小板减少症(HIT )，以及用于对需要进行经皮冠脉介入术(PCI )病人的治疗。2003年3月5日在美国中风学会第28界国际中风大会上公布的多中心二期临床试验结果表明，阿加曲班在急性缺血性中风治疗中的疗效显著、安全性高。而作为脑血栓急性期和慢性动脉闭塞症治疗药，阿加曲班2001年在韩国上市。2002年12月，三菱制药公司正式在中国上市慢性动脉闭塞症治疗药选择性抗凝血酶剂阿加曲班。2006年，阿加曲班在230家抽样医院抗血栓药中的销售金额份额已超过安布乐克(0.40%)，达到0.52%。阿加曲班注射液的开发成功，不但能为广大患者减轻痛苦，也会给企业带来可观的效益。阿加曲班的上市是低分子抗凝剂发展的一个里程碑式药物。2008年，其全球销售额为1.9亿美元，较2007年同比增长22.9%。
[0003]阿加曲班是一种抗凝剂，可作为直接凝血酶抑制剂使用。阿加曲班肼类杂质结构（图1）和阿加特班相似。单一高效液相色谱法已在美国药典（USP）中报告。在该方法中，阿加曲班峰以R
‑
阿加曲班和S
‑
阿加曲班洗脱，而阿加曲班肼类杂质洗脱当P1和P2达到峰值时，阿加曲班肼类杂质的P2峰与R
‑
阿加曲班峰重叠。因此阿加曲班中肼类似物杂质的准确浓度难以测定。且现有的该方法的运行时间较长，可达102分钟。为此，本专利技术建立了一种准确分离检测阿加曲班一水合物中肼类杂质含量的方法，本方法中肼类似物杂质和阿加曲班分离度较好。分离时间比文献减少了40分钟。在本方法中，肼类似物和阿加曲班洗脱时间分别为9.0 min和12.5 min，并按照《中国药典》的相关要求做了方法学研究和验证。
[0004]阿加曲班肼类杂质结构：目前，王刚等报道了“阿加曲班原料药中的杂质控制”[1]，该方法开发了一种定量分析方法，将阿加曲班有关物质2的杂质限度控制在0.10%以下，但并未涉及到阿加曲班肼
类杂质。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在提供一种专属性强，准确度与重复性良好，可用于阿加曲班一水合物中肼类杂质的控制检测方法。
[0006]为实现上述专利技术目的，本专利技术一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，具体实施方案为：本专利技术所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，该检测方法采用液相色谱法检测阿加曲班一水合物中肼类杂质含量。
[0007]本专利技术所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，该检测方法所用色谱柱为：手性色谱柱，流动相为：甲醇、乙腈、二氯甲烷、三氟乙酸、三乙胺的均匀混合物，检测波长为220
‑
270 nm，流速为0.2
‑
1.0 mL/min，柱温为30
±
5℃，进样品量：5
‑
10μL，检测器：UV/PDA检测器。
[0008]本专利技术所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，所述手性色谱柱规格为250
×
4.6mm，5μm。
[0009]本专利技术所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，所述流动相甲醇：乙腈：二氯甲烷：三氟乙酸：三乙胺=30:50:920:3:4。
[0010]本专利技术所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，所述检测方法进行等度洗脱。
[0011]本专利技术所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，所述检测方法具体为：采用YMC CHIRAL ART Cellulose
‑
SC 手性色谱柱，流动相为：甲醇、乙腈、二氯甲烷、三氟乙酸、三乙胺的均匀混合物，比例为：30:50:920:3:4，进行等度洗脱，检测波长为259 nm，流速为0.7 mL/min，柱温为35℃，进样品量：5μL，检测器：UV/PDA检测器。
[0012]现有的分析方法有以下缺点：单一高效液相色谱法已在美国药典（USP）中报告。在该方法中，阿加曲班峰以R
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阿加曲班和S
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阿加曲班洗脱，而阿加曲班肼类杂质洗脱当P1和P2达到峰值时，阿加曲班肼类杂质的P2峰与R
‑
阿加曲班峰重叠。因此阿加曲班中肼类似物杂质的准确浓度难以测定。且现有的该方法的运行时间较长，可达102分钟。为此，本专利技术建立了一种准确分离检测阿加曲班一水合物中肼类杂质含量的方法，本方法中肼类似物杂质和阿加曲班分离度较好。分离时间比文献减少了40分钟。在本方法中，肼类似物和阿加曲班洗脱时间分别为9.0 min和12.5 min，并按照《中国药典》的相关要求做了方法学研究和验证。
[0013]1准确性分析方法的准确性是测量分析物在相关杂质存在时的反应。这是通过证明阿加曲班一水合物中肼类杂质在样品溶液中达到极限浓度(1.5 ppm)而完成的。选择性色谱图如图2所示。空白运行不显示任何干扰峰联氨类似物。从阿加曲班中可以很好地分辨出肼类杂质峰肼类杂质峰通过了峰纯度标准。这表明这个峰是纯的。六次重复肼类杂质的相对标准偏差(%RSD)为2.22，拖尾系数为1.13。肼类杂质与阿加曲班峰的分辨率为2.46。见图1:测试样品中肼类杂质含量选择性的典型色谱图。
[0014]线性
溶液配制对照品母液：精密称定阿加曲班一水合物中肼类杂质对照品约50mg，置50ml量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，配制成1mg/ml的对照品母液。
[0015]线性溶液200%：精密移取2ml对照品母液于10ml容量瓶，流动相溶解并定容。
[0016]线性溶液150%：精密移取1.5ml对照品母液于10ml容量瓶，流动相溶液溶解并定容。
[0017]线性溶液100%：精密移取1ml对照品母液于10ml容量瓶，流动相溶液溶解并定容。
[0018]线性溶液50%：精密移取5ml线性溶液200%于20ml容量瓶，流动相溶液溶解并定容。
[0019]线性溶液10%：精密移取1ml线性溶液100%于10ml容量瓶，流动相溶解并定容。
[0020]线性溶液1%：精密移取1ml线性溶液100%于100ml容量瓶，流动相溶解并定容。
[0021]按上述色谱条件进样分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。
[0022]3可接受标准线性数据要求：列出主峰回归方程、相关系数和线性图，主成分相关系数应≥0.999。截距应在100%响应值10.0%以内，响应因子的相对标准偏差应小于5.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，其特征在于，该检测方法采用液相色谱法检测阿加曲班一水合物中肼类杂质含量。2.根据权利要求1所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，其特征在于，该检测方法所用色谱柱为：手性色谱柱，流动相为：甲醇、乙腈、二氯甲烷、三氟乙酸、三乙胺的均匀混合物，检测波长为220
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270 nm，流速为0.2
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1.0 mL/min，柱温为30
±
5℃，进样品量：5
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10μL，检测器：UV/PDA检测器。3.根据权利要求2所述一种阿加曲班一水合物中杂质含量的分离检测方法，其特征在于，所述手性色谱柱规格为250
×
4.6mm，5μm。4.根据权利要求2所述一种阿加曲班一...

【专利技术属性】
技术研发人员：何雄，贺莲，杨世平，张静，刘娟，
申请(专利权)人：汉寿康运医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：